人ATG16L1敲除HeLa细胞系

希拉牌手表

液体

利用CRISPR/Cas9实现基因敲除，外显子1中22 bp缺失和外显子1中插入选择盒

腺癌

ATG16L1型

淘汰赛

CRISPR技术

Sanger测序，Western blot

CSF1PO、D13S317、D7S820、D5S818、TH01、D16S539、TPOX

欧盟：2美国：2

粘附剂

女性

到达后，小瓶应储存在液氮气相中，而不是-80°C。在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。

1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。
2.将细胞悬液（0.8 mL）转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中，用额外的0.8 mL培养基（总体积10 mL）清洗小瓶以收集剩余细胞，并在室温下以201 x g（rcf）离心5分钟。10 mL代表建议的最小稀释度。20 mL代表建议的最大稀释度。
3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预先加热的培养基中，并使用血细胞仪或其他细胞计数方法将所有剩余细胞接种到T25中进行计数。
4.在37°C培养箱中用5%CO培养₂.复苏后一天检查培养物，继续检查直至80%融合。如果需要，可以更换介质。
5.一旦汇合，进入密度为2x10的适当烧瓶⁴细胞/厘米²。播种密度仅供参考，应根据各个实验室的时间表进行调整。应每天监测培养物。

• 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。


• 引导播种密度为2x10⁴细胞/厘米²建议使用。


• 当细胞达到80-90%的汇合时，应进行传代。

DMEM（高糖）+10%FBS

细胞冷冻培养基DMSO无血清培养基，在补充有甲基纤维素的MEM中含有8.7%DMSO。