概述
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产品名称 人NPC2(Niemann-Pick C2)敲除HEK-293T细胞系 -
亲代细胞系 HEK293吨 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,纯合子:外显子1插入1 bp -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HEK293T细胞系( 约255449 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.将小瓶在37°C水浴中解冻约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,在适当的细胞培养瓶中以2x10的密度播种细胞 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/暂停 粘附剂 -
组织 肾 -
单元格类型 上皮的 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:8、9 D13S317:12、14 D7S820:11 D16S539:9、13 vWA:16、19 第01页:第7页,第9.3页 TPOX:11个 CSF1PO:11、12 -
无支原体 是的 -
存储说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 可能参与附睾成熟过程中精子膜脂质组成的调节。 -
组织特异性 附睾。 -
参与疾病 NPC2缺陷是尼曼病C2型(NPDC2)的病因[MIM:607625]。 影响内脏和中枢神经系统的溶酶体储存障碍。 这是由于低密度脂蛋白衍生胆固醇的细胞内加工和转运缺陷所致。 它导致胆固醇在溶酶体中积聚,并延迟诱导胆固醇稳态反应。 尼曼病C2型具有高度可变的临床表型。 临床特征包括可变肝脾肿大和严重的进行性神经功能障碍,如共济失调、肌张力障碍和痴呆。 发病年龄从婴儿期到成年晚期不等。 -
序列相似性 属于NPC2家族。 -
手机定位 保密。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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测序色谱图显示外显子1的序列编辑 -
所有车道: 抗尼曼匹克C2抗体[EPR19993-145-1]( 约218192 )稀释1/1000 车道1: 野生型HEK-293T(大T抗原转化胚胎肾人上皮细胞系)全细胞裂解物 车道2: NPC2敲除HEK-293T(大T抗原转化胚胎肾人上皮细胞系)全细胞裂解物 3号车道: HepG2(人肝癌细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释度为1/10000 预测的带宽大小: 17千Da 观察到的频带大小: 16-18千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-3车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约218192 在16-18 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在36kDa处观察到。 约218192 在野生型HEK-293T细胞中,抗Niemann-Pick C2抗体[EPR19993-145-1]被证明与Niemann-Bick C2特异性反应。 敲除细胞系ab266749(敲除细胞裂解物 约258079 )已使用。 野生型和Niemann-Pick C2基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约218192 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗尼曼匹克C2抗体[EPR19993]( 约207158 )稀释1/1000 车道1: 野生型HEK-293T(大T抗原转化胚胎肾人上皮细胞系)全细胞裂解物 车道2: NPC2敲除HEK-293T(大T抗原转化胚胎肾人上皮细胞系)全细胞裂解物 3号车道: HepG2(人肝癌细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释度为1/10000 预测的带宽大小: 17千Da 观察到的频带大小: 16-18千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-3车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约207158 在16-18 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在36kDa处观察到。 约207158 在野生型HEK-293T细胞中,抗Niemann-Pick C2抗体[EPR19993]与Niemann-Bick C2特异性反应。 敲除细胞系ab266749(敲除细胞裂解物 约258079 )已使用。 对野生型和Niemann-Pick C2敲除样品进行SDS-PAGE。 约207158 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:外显子1中插入1bp -
NPC2敲除HEK293T细胞、低汇合和高汇合示例(左上和右上)和野生型HEK293 T细胞的代表性图像,低汇合与高汇合(左下和右下)显示典型的粘附、上皮样形态。 使用EVOS M5000显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载