概述
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产品名称 -
亲代细胞系 HEK293吨 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:外显子6中2 bp插入 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HEK293T细胞系( 约255449 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬浮液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)洗涤小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.将培养物在37°C培养箱中与5%CO一起培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 。 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肾 -
单元格类型 上皮的 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:8、9 D13S317:第12页,第14页 D7S820:11 D16S539:9、13 vWA:16、19 TH01:7、9.3 第三方:11 CSF1PO:11、12 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 蛋白激酶信号转导级联的组成部分。 TRAF6和TGF-β信号转导的介体。 激活IKBKB和MAPK8以响应TRAF6信号。 刺激NF-kappa-B激活和p38 MAPK通路。 在渗透胁迫信号中,在MAPK8/JNK的激活中起主要作用,但在NF-kappa-B的激活中不起主要作用。 -
序列相似性 属于蛋白激酶超家族。 STE-Ser/Thr蛋白激酶家族。 MAP激酶激酶亚家族。 包含1个蛋白激酶结构域。 -
翻译后 修改 与TAB1/MAP3K7IP1结合可促进自身磷酸化和随后的活化。 与TAB2/MAP3K7IP2(自身与游离的非锚定Lys-63多泛素链相关)的结合促进了MAP3K7的自磷酸化和随后的活化。 PP2A和PPP6C在Thr-187处脱磷导致失活。 泛素化,导致蛋白酶体降解(根据相似性)。 需要“Lys-63”连接的多泛素化来实现自身磷酸化和随后的激活 Lys-63’连接的泛素化不会导致蛋白酶体降解。 由CYLD脱去泛素,这是一种选择性切割“Lys-63”连接泛素链的蛋白酶。 Y.entercolitica YopP脱泛素。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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所有车道: 抗TAK1抗体[EPR5984]( 澳大利亚银行109526 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道2: MAP3K7敲除HEK-293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 67千帕 观察到的频带大小: 72千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 车道1-2: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 澳大利亚银行109526 在72 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 澳大利亚银行109526 western blot显示与野生型HEK-293T细胞中的TAK1反应。 敲除细胞系ab266555(敲除细胞裂解物 约256984 )被使用。 对野生型HEK-293T和MAP3K7敲除HEK-293 T细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 澳大利亚银行109526 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附( ab216773号 )和山羊抗小鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:第6外显子插入2 bp -
MAP3K7敲除HEK293T细胞的代表性图像,低融合度和高融合度实例(分别为左上和右上)和野生型HEK293T细胞,低融合度和高融合度(分别为左下和右下)显示典型的粘附性上皮样形态。 使用EVOS XL Core显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载