概述
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产品名称 -
产品概述 通过CRISPR/Cas9。 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,外显子1缺失1 bp,外显基因1插入1 bp。 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
重组说明 为了用作白细胞对照,将冻干液重新悬浮在50µL LDS*样品缓冲液中,使最终浓度达到2 mg/ml。对于还原条件,我们建议最终浓度为0.1 M DTT。 *不建议将SDS样品缓冲液用于这些冻干溶血物。 -
笔记 裂解液制备: 我们的裂解产物是使用RIPA缓冲液制成的,我们在其中添加了蛋白酶抑制剂鸡尾酒和磷酸酶抑制剂鸡尾液(比例:300:100:10)。 这意味着感兴趣的蛋白质发生了变性。 如果您需要天然形式的蛋白质,请使用活细胞版本-找到 在这里 。请参阅我们的裂解协议,了解我们裂解产物的制备方法的更多详细信息。 用户存储说明: 冻干液可在4°C下储存。 复原后,在-20°C下短期保存或-80°C下长期保存。 获取数千种由常用癌症细胞系产生的敲除细胞裂解物。 有关敲除细胞裂解物的更多信息,请参阅此处。 Abcam没有也不打算申请客户使用含有欧洲授权清单(附件十四)物质的产品的REACH授权。 我们的客户有责任检查REACH授权和任何其他相关授权在其预期用途中应用的必要性。 本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 。 -
经过测试的应用程序
属性
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储存说明 储存于-80°C。 请参阅协议。 -
组件 1套 ab255489-人EGFR敲除HeLa细胞裂解物 1 x 100微克 ab255929-人野生型HeLa细胞裂解物 1 x 100微克 -
研究领域 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12,13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10
目标
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功能 受体酪氨酸激酶结合EGF家族配体并激活几个信号级联,将细胞外信号转换为适当的细胞反应。 已知配体包括EGF、TGFA/TGF-alpha、双调节蛋白、表观蛋白/EPGN、BTC/β细胞壁蛋白、表调节蛋白/EREG和HBEGF/肝素结合EGF。 配体结合触发关键细胞质残基上的受体同源和/或异源二聚和自磷酸化。 磷酸化受体招募GRB2等适配蛋白,后者反过来激活复杂的下游信号级联。 激活至少4个主要下游信号级联,包括RAS-RAF-MEK-ERK、PI3激酶-AKT、PLCgamma-PKC和STATs模块。 也可能激活NF-kappa-B信号级联。 还可直接磷酸化其他蛋白质,如RGS16,激活其GTPase活性,并可能将EGF受体信号与G蛋白偶联受体信号耦合。 还磷酸化MUC1并增加其与SRC和CTNNB1/β-catenin的相互作用。 异构体2可能是EGF作用的拮抗剂。 -
组织特异性 普遍表达。 异构体2也在卵巢癌中表达。 -
参与疾病 肺癌 炎症性皮肤和肠道疾病,新生儿,2 -
序列相似性 属于蛋白激酶超家族。 酪氨酸蛋白激酶家族。 EGF受体亚家族。 包含1个蛋白激酶结构域。 -
翻译后 修改 Ser-695处的磷酸化是部分的,只有当Thr-693被磷酸化时才会发生。 PRKD1在Thr-678和Thr-693处的磷酸化抑制EGF诱导的MAPK8/JNK1活化。 PTPRJ的去磷酸化可防止内吞并稳定质膜上的受体。 Tyr-1197的自磷酸化由Arg-1199的甲基化刺激,并增强与PTPN6的相互作用。 Tyr-1092和/或Tyr-1110的自磷酸化招募STAT3。 通过PTPN1和PTPN2脱磷。 EGF刺激下的单泛素化和多泛素化; 它不影响酪氨酸激酶活性或信号传导能力,但可能在溶酶体靶向中发挥作用。 多泛素连接主要通过“Lys-63”进行,但也会通过“Lys-48”、“Lys-11”和“Lys-29”进行连接。 OTUD7B的去泛素作用可防止降解。 RNF115和RNF126泛素化。 甲基化。 PRMT5在Arg-1199的甲基化刺激Tyr-1197的磷酸化。 -
手机定位 分泌膜和细胞膜。 内质网膜。 高尔基体膜。 细胞核膜。 内体。 内体膜。 核心。 作为对EGF的反应,通过高尔基体和内质网从细胞膜转运到细胞核。经配体激活后内吞。 在雌激素激动剂诱导的癌相关成纤维细胞(CAF)的细胞核中用GPER1染色。 -
UniProt提供的信息 -
替代名称 禽红细胞白血病病毒癌基因同源物 细胞生长抑制蛋白40 细胞增殖诱导蛋白61
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应用
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图像
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车道1: A431细胞裂解物(20µg) 车道2: MDA-MB-468细胞裂解物(20µg) 3号车道: 野生型HeLa细胞裂解物(20µg) 车道4: EGFR敲除HeLa细胞裂解物(20µg) 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约32077 在175 kDa下观察到。 红色-装载控制, 约130007 在125 kDa时观察到。 约32077 在野生型HeLa细胞中显示与EGFR反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 ab255385号 使用敲除细胞裂解物ab263845。 对野生型和EGFR敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约32077 和抗V蛋白抗体[VIN-54]( 约130007 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
车道1: A431细胞裂解物(20µg) 车道2: MDA-MB-468细胞裂解物(20µg) 3号车道: 野生型HeLa细胞裂解物(20µg) 车道4: EGFR敲除HeLa细胞裂解物(20µg) 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约52894 在175 kDa下观察到。 红色-装载控制, 约130007 在125 kDa时观察到。 约52894 在野生型HeLa中显示与EGFR反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 ab255385号 使用敲除细胞裂解物ab263845。 对野生型和EGFR敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约52894 和抗V蛋白抗体[VIN-54]( 约130007 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因1:外显子1中1 bp缺失 -
等位基因2:1 bp插入外显子1
协议
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载