主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔单克隆[EPR25424-71]到pan Brd4 适用于:ChIP-sequencing、IHC-P、IP、WB、ICC/IF、Flow Cyt(Intra) 反应对象:小鼠、大鼠、人类
概述
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产品名称 -
描述 兔单克隆抗体 [EPR25424-71]至锅Brd4 -
宿主 兔子 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 老鼠、老鼠、人 -
免疫原 重组片段。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
阳性对照 WB:293T、NIH/3T3、PC-12、K-562和ES-D3[D3]裂解物。 IHC-P:人类卵巢癌、人类睾丸、小鼠睾丸和大鼠睾丸组织。 ICC/IF:K-562和NIH/3T3细胞。 流式细胞术(内):K-562和NIH/3T3细胞。 IP:K-562和ES-D3[D3]细胞。
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常规说明
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分试样。 储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 pH值:7.2 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:40%甘油(甘油,甘油),59%PBS,0.05%BSA -
浓度信息加载。。。 -
纯度 纯化蛋白A -
克隆 单克隆 -
克隆编号 EPR25424-71型 -
同种型 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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备选版本 -
兼容的辅助设备 -
同位素控制 -
相关产品
应用
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靶标
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功能 染色质阅读器蛋白,识别并结合乙酰化组蛋白,在表观遗传记忆跨细胞分裂和转录调控的传递中发挥关键作用。 在整个细胞周期中与乙酰化染色质保持关联,并通过保持乙酰化染色蛋白状态和保持高阶染色质结构为有丝分裂后G1基因转录提供表观遗传记忆。 在间期,通过与P-TEFb复合体结合并将其招募到启动子中,在调节信号诱导基因的转录中起着关键作用:BRD4需要通过取代P-TEFb中的负调控因子,如HEXIM1和7SKsnRNA复合体,形成转录活性的P-TEFb-复合体, 从而将其转化为活性形式,然后磷酸化RNA聚合酶II的C末端结构域(CTD)。 促进RNA聚合酶II C末端结构域(CTD)的“Ser-2”磷酸化。 据报道,直接作为一种非典型蛋白激酶发挥作用,并调节RNA聚合酶II C末端结构域(CTD)的“Ser-2”磷酸化; 然而,这些数据需要更多体内证据(PubMed:22509028)。 除乙酰化组蛋白外,还可识别并结合乙酰化RELA,导致P-TEFb复合物的进一步招募和NF-kappa-B的随后激活。还可作为p53/TP53介导转录的调节器:CK2磷酸化后,招募到p53/TP33特异性靶向启动子。 异构体B:在DNA损伤反应途径中起染色质绝缘体的作用。 通过向乙酰化组蛋白募集凝聚素-2复合物来抑制DNA损伤反应信号,导致染色质结构重塑,通过限制组蛋白H2AFX/H2A.x磷酸化的扩散,使该区域免受DNA损伤反应的影响。 -
组织特异性 普遍表达。 -
疾病相关 一种罕见、侵袭性和致命的癌症发生在年轻人的中线器官中,其染色体畸变涉及BRD4。 用产生BRD4-NUT融合蛋白的NUT转运t(15;19)(q14;p13)。 -
序列相似性 包含2个溴结构域。 包含1个NET域。 -
结构域 NET结构域介导与许多参与转录调控的染色质蛋白(WHSC1L1、JMJD6、CHD4、GLTSCR1和ATAD5)的相互作用。 C末端(CTD)区域介导P-TEFb复合体的CDK9和CCNT1亚单位的相互作用和招募(PubMed:16109376,PubMed:16109377)。 还需要维持高阶染色质结构(PubMed:22334664)。 2个溴结构域分别通过Asn-140和Asn-433介导与乙酰化组蛋白的特异性结合(PubMed:20871596)。 招募BRD4靶基因所需的修饰组蛋白尾部的确切组合尚不清楚。 第一溴结构域对乙酰化组蛋白H4尾部具有高亲和力,而第二溴结构域识别组蛋白H3中的多重乙酰化标记(PubMed:22464331)。 许多特异性抑制剂与乙酰基赖氨酸结合残基Asn-140和Asn-433竞争性结合,促进乙酰化组蛋白的去除。 其中许多抑制剂是苯二氮卓衍生物(PubMed:22137933,PubMed:22136404,PubMet:23517011,PubMer:23530754)。 -
翻译后修饰 CK2的磷酸化破坏溴结构域2和NPS区域之间的分子内结合,并促进NPS和BID区域之间的结合,从而激活蛋白质并促进与乙酰化组蛋白的结合。 在缺乏磷酸化的情况下,BRD4不定位于p53/TP53靶基因启动子,磷酸化促进对p53/TP33靶启动子的招募。 -
细胞定位 核心。 染色体。 与乙酰化染色质相关。 组蛋白脱乙酰化后从染色质中释放,可由不同信号触发,如JNK通路激活或诺克唑治疗。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 -
别名 Brd4抗体 BRD4_HUMAN抗体 溴代多巴胺蛋白4抗体
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图片
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所有车道: 稀释1/1000的抗-pan Brd4抗体[EPR25424-71](ab314432) 车道1: 干扰siRNA对照全细胞裂解物转染293T(人胚胎肾上皮细胞) 车道2: 293T转染特异性靶向Brd4全细胞裂解物的siRNA 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释度为1/100000 预测的带宽大小: 152千Da 观察到的频带大小: 110200kDa 为什么实际的频带大小与预测的不同? 暴露时间: 180秒 封闭和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST 在Western blot中,抗-GAPDH抗体[EPR16891]-负载控制( 约181602 )1/200000稀释液染色。 在Western blot中,抗Brd4L抗体[EPR25425-23]( 约289886 )1/1000稀释染色。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗-pan Brd4抗体[EPR25424-71](ab314432) 车道1: 293T(人胚胎肾上皮细胞)全细胞裂解物 车道2: NIH/3T3(小鼠胚胎成纤维细胞)全细胞裂解物 3号车道: PC-12(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)全细胞裂解物 车道4: K-562(人慢性粒细胞白血病淋巴细胞)全细胞裂解物 车道5: ES-D3 D3(小鼠囊胚衍生胚胎干细胞)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释度为1/100000 预测的带宽大小: 152千Da 观察到的频带大小: 110200kDa 为什么实际的频带大小与预测的不同? 封闭和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST 新鲜制备裂解液并立即用于蛋白质印迹,以尽量减少蛋白质降解。 37kDa和100kDa之间的带的身份未知。 曝光时间:1-3车道:81秒; 第四车道:3秒; 第五跑道:81秒。 -
对石蜡包埋的人类卵巢癌组织标记pan Brd4进行免疫组织化学分析,在1/2000(0.235 ug/ml)时使用ab314432,然后使用现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 人类卵巢癌细胞核染色(PMID:32044108)。 该切片在室温下与ab314432孵育30分钟。 免疫染色在Leica Biosystems BOND®RX仪器上进行。 二次抗体孵育后,在室温下用3%过氧化氢孵育载玻片10分钟,以降低背景。 苏木精复染。 仅二级抗体对照:二级抗体是现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 用Tris-EDTA缓冲液(pH 9.0,表位检索溶液2)进行热介导抗原检索20分钟。 -
在1/2000(0.235 ug/ml)时用ab314432对石蜡包埋的人类睾丸组织标记pan Brd4进行免疫组织化学分析,然后使用现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 人类睾丸细胞核染色。 该切片在室温下与ab314432孵育30分钟。 免疫染色在Leica Biosystems BOND®RX仪器上进行。 二次抗体孵育后,在室温下用3%过氧化氢孵育载玻片10分钟,以降低背景。 苏木精复染。 仅二级抗体对照:二级抗体是现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 用Tris-EDTA缓冲液(pH 9.0,表位检索溶液2)进行热介导抗原检索20分钟。 -
对石蜡包埋小鼠睾丸组织标记pan Brd4的免疫组织化学分析,在1/2000(0.235 ug/ml)时使用ab314432,然后使用现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 小鼠睾丸细胞核染色。 该切片在室温下与ab314432孵育30分钟。 免疫染色在Leica Biosystems BOND®RX仪器上进行。 二次抗体孵育后,在室温下用3%过氧化氢孵育载玻片10分钟,以降低背景。 苏木精复染。 仅二级抗体对照:二级抗体是现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 用Tris-EDTA缓冲液(pH 9.0,表位检索溶液2)进行热介导抗原检索20分钟。 -
石蜡包埋大鼠睾丸组织标记pan Brd4的免疫组织化学分析,在1/2000(0.235 ug/ml)时使用ab314432,然后使用现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 大鼠睾丸细胞核染色。 将切片与ab314432在室温下孵育30分钟。 免疫染色在Leica Biosystems BOND®RX仪器上进行。 二次抗体孵育后,在室温下用3%过氧化氢孵育载玻片10分钟,以降低背景。 苏木精复染。 仅二级抗体对照:二级抗体是现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 用Tris-EDTA缓冲液(pH 9.0,表位检索溶液2)进行热介导抗原检索20分钟。 -
4%副甲醛固定、0.1%TritonX-100渗透性K-562(人类慢性粒细胞白血病淋巴母细胞)细胞的免疫荧光分析,在1/500(0.94 ug/ml)稀释度下用ab314432标记pan Brd4,然后 约150081 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)预吸附抗体,稀释度为1/1000(2ug/ml)(绿色)。 共聚焦图像显示K-562细胞系的核染色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems,TCS SP8)拍摄图像。 Ab195889抗α-微管蛋白小鼠单克隆抗体-微管标记(Alexa Fluor®594)用于在1/200(2.5 ug/ml)稀释度(红色)下对微管蛋白进行反染色。 核染色为DAPI(蓝色)。 仅二级抗体对照:二级抗体为 约150081 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)以1/1000(2ug/ml)稀释度预先吸附。 -
4%对甲醛固定、0.1%TritonX-100渗透NIH/3T3(小鼠胚胎成纤维细胞)细胞的免疫荧光分析,在1/500(0.94 ug/ml)稀释度下用ab314432标记pan Brd4,然后 约150081 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)预吸附抗体,稀释度为1/1000(2ug/ml)(绿色)。 共聚焦图像显示NIH/3T3细胞系的核染色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems,TCS SP8)拍摄图像。 Ab195889抗α-微管蛋白小鼠单克隆抗体-微管标记(Alexa Fluor®594)用于在1/200(2.5 ug/ml)稀释度(红色)下对微管蛋白进行反染色。 核染色为DAPI(蓝色)。 仅二级抗体对照:二级抗体为 约150081 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)以1/1000(2ug/ml)稀释度预先吸附。 -
从0.35 mg K-562(人类慢性粒细胞白血病淋巴母细胞)全细胞裂解液中用ab314432以1/30稀释(0.35 mg裂解液中2 ug)免疫沉淀pan Brd4。 使用ab314432在1/1000稀释度下对免疫沉淀进行Western blot。 用于IP二级抗体(HRP)的VeriBlot( 阿布131366 )以1/5000稀释度使用。 车道1:K-562(人类慢性粒细胞白血病淋巴细胞)全细胞裂解物 泳道2:K-562(人慢性粒细胞白血病淋巴母细胞)全细胞裂解物中的ab314432 IP 通道3:兔单克隆IgG( 约172730 )而不是K-562全细胞裂解液中的ab314432 阻塞和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 曝光时间:32秒 新鲜制备裂解液并立即用于蛋白质印迹,以尽量减少蛋白质降解。 -
用ab314432从0.35 mg ES-D3[D3](小鼠囊胚衍生胚胎干细胞)全细胞裂解液中以1/30稀释度(0.35 mg裂解液中2 ug)免疫沉淀pan Brd4。 使用ab314432在1/1000稀释度下对免疫沉淀进行Western blot。 用于IP二级抗体(HRP)的VeriBlot( 阿布131366 )以1/5000稀释度使用。 通道1:ES-D3[D3](小鼠囊胚衍生胚胎干细胞)全细胞裂解物 通道2:ES-D3[D3](小鼠囊胚衍生胚胎干细胞)全细胞裂解物中的ab314432 IP 通道3:兔单克隆IgG( 约172730 )而不是ES-D3[D3]全细胞裂解液中的ab314432 阻塞和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 曝光时间:5秒 新鲜制备裂解液并立即用于蛋白质印迹,以尽量减少蛋白质降解。 -
染色质是从K562细胞中制备的。 细胞用1%甲醛固定10分钟。 使用10^7个细胞和8µg ab314432[EPR25424-71]进行ChIP。 ChIP DNA在Illumina NovaSeq 6000上测序,深度为3000万读。 还显示了输入控件。 -
染色质是从K562细胞中制备的。 细胞用1%甲醛固定10分钟。 使用10^7个细胞和8µg ab314432[EPR25424-71]进行ChIP。 ChIP DNA在Illumina NovaSeq 6000上测序,深度为3000万读。 还显示了输入控件。 -
染色质是从K562细胞中制备的。 细胞用1%甲醛固定10分钟。 使用10^7个细胞和8µg ab314432[EPR25424-71]进行ChIP。 ChIP DNA在Illumina NovaSeq 6000上测序,深度为3000万读。 还显示了输入控件。
实验方案
数据表及文件
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