主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 大鼠单克隆[EP459Y]到CD20-大鼠IgG2a 适用于:IP、Flow Cyt(Intra)、WB、ICC 敲除已验证 反应对象:人类
概述
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产品名称 -
描述 大鼠单克隆抗体 [EP459Y]至CD20-鼠IgG2a -
宿主 老鼠 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 人类 -
免疫原 合成肽。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
阳性对照 WB:Raji和Ramos全细胞裂解物和野生型Raji细胞裂解物 ICC:拉莫斯细胞。 IP:Ramos全细胞裂解物。 流动细胞(内部):Ramos细胞。
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常规说明 这种鼠单克隆嵌合抗体是由RabMAb亲本抗体设计而成的( 约78237 ). 根据需要,一些兔子序列被保留为可变域的一部分。 当与其他兔源抗体复合时,建议使用交叉吸收的Fc-反应性次级抗体。
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分试样。 长期储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 pH值:7.2 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:59%PBS、40%甘油(甘油、甘油)、0.05%BSA -
浓度信息加载。。。 -
纯度 纯化蛋白A -
克隆 单克隆 -
克隆编号 EP459Y型 -
同种型 IgG2a -
研究领域
相关产品
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备选版本 -
兼容的辅助设备 -
同位素控制
应用
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靶标
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功能 该蛋白可能参与调节B细胞的活化和增殖。 -
组织特异性 在B细胞上表达。 -
疾病相关 MS4A1缺陷是免疫缺陷常见变量5型(CVID5)的原因[MIM:613495]; 由于CD20缺陷也被称为抗体缺乏。 CVID5是一种以抗体缺乏、低丙种球蛋白血症、反复细菌感染和无法对抗原产生抗体反应为特征的原发性免疫缺陷。 这种缺陷是由于B细胞分化失败和免疫球蛋白分泌受损所致; 循环B细胞的数量通常在正常范围内,但也可能很低。 -
序列相似性 属于MS4A家族。 -
翻译后修饰 磷酸化。 可能受蛋白激酶的功能调节。 -
细胞定位 薄膜。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 -
别名 APY抗体 ATOPY抗体 B淋巴细胞抗原CD20抗体
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图片
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所有车道: 抗CD20抗体[EP459Y]-大鼠IgG2a(嵌合)(ab279300),1/1000稀释 车道1: 野生型Raji细胞裂解物 车道2: MS4A1敲除Raji细胞裂解物 3号车道: A549细胞裂解物 车道4: HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 33千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗CD20抗体[EP459Y]–大鼠IgG2a(嵌合)染色,稀释1/1000,以绿色显示; 兔抗α-管蛋白抗体[EP1332Y]( 约52866 )以1/20000稀释度进行负荷对照染色,以红色显示。在Western blot中,ab279300显示与CD20特异性结合。 在野生型Raji细胞裂解液中观察到33 kDa的条带,在MS4A1敲除细胞系中未观察到该大小的信号 约273871 (敲除细胞裂解物 约263259 ). 为了生成此图像,分析了野生型和MS4A1敲除Raji细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后与一级抗体在4°C下孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab253031号 )和山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( ab216777号 )稀释1/20000。 -
所有车道: 抗CD20抗体[EP459Y]-大鼠IgG2a(嵌合)(ab279300),1/1000稀释 车道1: Raji(人类Burkitt淋巴瘤B淋巴细胞),全细胞裂解物 车道2: Ramos(人类Burkitt淋巴瘤B淋巴细胞),全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗-Rat IgG H&L(HRP)( 约205720 )稀释1/5000 封闭/稀释缓冲液:5%NFDM/TBST。 -
使用ab279300对Ramos(人类Burkitt淋巴瘤细胞系)细胞进行CD20免疫荧光染色。 细胞用100%甲醇固定(5分钟),用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞在+4°C下与ab279300以0.2µg/ml孵育过夜。然后将细胞与 ab150165型 ,山羊抗-Rat IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示),核DNA用DAPI标记(以蓝色显示)。 仅二级对照(最下面一行)未与ab279300孵育,但以其他方式处理相同。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)采集图像,显示单个共焦切片。 -
流式细胞术重叠直方图显示Ramos(人类Burkitt淋巴瘤细胞系)阳性细胞(左侧)和HEK293T(大T抗原转化的胚胎肾人类上皮细胞系)阴性细胞(右侧),ab279300(红线)染色。 用4%甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后将细胞培养在含有10%正常山羊血清的1x PBS中,以阻止非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后用抗体(ab279300)(1x10 6 在22°C下,在100µl(0.2µg/ml)中放置30分钟。 二级抗体山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 488,预吸附)( ab150165型 )于2000年1月在22°C下使用30分钟。 同型控制抗体(黑线)为大鼠IgG2a-kappa( 约18450 )在与第一抗体相同的浓度和条件下使用。 未标记样本(蓝线)也用作对照。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 在相同条件下使用80%甲醇(5分钟)/0.1%PBS-Triton X-100渗透固定15分钟的Ramos细胞中,该抗体发出阳性信号。 -
从0.35 mg Ramos(人类Burkitt淋巴瘤B淋巴细胞)中免疫沉淀CD20,用ab279300以1/30的稀释度(0.35 mg裂解液中2µg)溶解10µg全细胞。 使用ab279300在1/1000稀释度下对免疫沉淀进行Western blot。 山羊抗-Rat IgG(H+L),HRP)( 约205720 )以1/5000稀释度使用。 车道1: Ramos全细胞裂解液10µg。 车道2: ab279300 IP在Ramos全细胞裂解液中。 3号车道: 大鼠单克隆IgG2a( 约18450 )而不是Ramos全细胞裂解物中的ab279300。 阻塞和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 曝光时间:1秒。 -
使用ab279300对Ramos(人类Burkitt淋巴瘤细胞系)细胞进行CD20免疫荧光染色。 细胞用4%甲醛固定(10分钟),用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞在+4°C下以0.2µg/ml的ab279300培养过夜。然后用 ab150165型 ,山羊抗-Rat IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示),核DNA用DAPI标记(以蓝色显示)。 仅二级对照(最下面一行)未与ab279300孵育,但以其他方式处理相同。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)采集图像,显示单个共焦切片。
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
文献 (1)
谢敏 等。 在小鼠模型中,产生白细胞介素-35的B细胞通过STAT3磷酸化和肠道微生物群修饰拯救炎症性肠病。 细胞死亡发现 9:67 (2023). 公共医学:36797242