主要功能和细节
一次性90分钟协议 灵敏度:200 pg/ml 范围:0.781 ng/ml-100 ng/ml 样品类型:细胞裂解液、组织匀浆 检测方法:比色法 检测类型:半定量 反应对象:老鼠、人类
概述
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产品名称 -
检测方法 比色法 -
精确度 批次内 样品 n个 平均值 标准偏差 变异系数% HeLa提取物 6 4.6% 批次间 样品 n个 平均值 标准偏差 变异系数% HeLa提取物 三 2.5% -
样品类型 细胞裂解液,组织匀浆 -
检测类型 半定量 -
灵敏度 200微微克/毫升 -
范围 0.781纳克/毫升- 100纳克/毫升 -
检测时间 1小时 100万 -
实验步骤 一步分析法 -
种属反应性 与反应: 老鼠,人类 预测可用于: 老鼠 -
产品概述 Abcam的p38 MAPKα(pT180/Y182) 在体外 SimpleStep ELISA™(酶联免疫吸附测定)试剂盒用于人和小鼠细胞中p38 MAPKα(pT180/Y182)蛋白的半定量测量。
SimpleStep ELISA™采用亲和标记捕获抗体和报告结合检测器抗体,免疫捕获溶液中的样品分析物。 整个复合物(捕获抗体/分析物/检测器抗体)依次通过包被微孔的抗抗原抗体的免疫亲和力固定。 为了进行分析,将样品或标准品添加到微孔中,然后添加抗体混合物。 孵育后,清洗微孔以去除未结合的物质。 加入TMB底物,在温育过程中被HRP催化,产生蓝色。 然后通过添加停止溶液来停止该反应,完成从蓝色到黄色的任何颜色变化。 信号的产生与结合分析物的量成比例,强度在450 nm处测量。 或者,可以在600 nm处动态记录TMB的发展,而不是终点读数。
截至2019年10月,该试剂盒用新抗体重新配制,以保持长期持续供应。 -
说明 Abcam没有也不打算申请客户使用含有欧洲授权清单(附件十四)物质的产品的REACH授权。 我们的客户有责任检查REACH授权和任何其他相关授权在其预期用途中应用的必要性。 -
平台 微孔板
性能
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存放说明 储存于+4°C。 请参阅协议。 -
组件 1 x 96测试 10X洗涤缓冲液PT 1 x 20毫升 50X细胞提取增强剂溶液 1 x 1毫升 5X细胞提取缓冲液PTR 1 x 12毫升 冻干p38 MAPKα对照裂解液 1瓶 p38 MAPKα(pT180/Y182)捕获抗体 1 x 3毫升 p38 MAPKα(pT180/Y182)检测抗体 1 x 3毫升 平板密封件 1台 单步预涂96孔微孔板(ab206978) 1台 停止解决方案 1 x 12毫升 底物溶液 1 x 12毫升 -
研究领域 -
功能 丝氨酸/苏氨酸激酶是MAP激酶信号转导途径的重要组成部分。 MAPK14是四个p38 MAPK之一,在细胞外刺激(如促炎细胞因子或物理应激)诱发的细胞反应级联中发挥重要作用,从而直接激活转录因子。 因此,p38 MAPK磷酸化了广泛的蛋白质,据估计,它们每个可能有大约200到300个底物。 一些靶点是下游激酶,通过磷酸化和进一步磷酸化附加靶点被激活。 RPS6KA5/MSK1和RPS6KA4/MSK2可以直接磷酸化并激活转录因子,如CREB1、ATF1、NF-kappa-B亚型RELA/NFKB3、STAT1和STAT3,但也可以磷酸化组蛋白H3和核小体蛋白HMGN1。 RPS6KA5/MSK1和RPS6KA4/MSK2通过诱导染色质重塑或招募转录机制,在应激或有丝分裂刺激下快速诱导早期基因中发挥重要作用。 另一方面,另外两个激酶靶点,MAPKAPK2/MK2和MAPKAPK3/MK3,主要在转录后水平参与基因表达的控制,通过磷酸化ZFP36(三四脯氨酸)和ELAVL1,以及通过调节EEF2K,这对翻译过程中mRNA的延伸很重要。 MKNK1/MNK1和MKNK2/MNK2是另外两种被p38 MAPKs激活的激酶,它们通过磷酸化起始因子EIF4E2来调节蛋白质合成。 MAPK14还与酪蛋白激酶II相互作用,通过自身磷酸化和TP53/p53的进一步磷酸化导致其活化。 在细胞质中,p38 MAPK通路是蛋白质周转的重要调节器。 例如,CFLAR是TNF诱导凋亡的抑制剂,其蛋白酶体介导的降解受p38 MAPK磷酸化调节。 以类似的方式,MAPK14磷酸化泛素连接酶SIAH2,调节其对EGLN3的活性。 MAPK14还可能通过干扰跨膜蛋白ATG9的细胞内运输来抑制自噬的溶酶体降解途径。 MAPK14的另一个功能是通过影响小GTPase RAB5A的不同机制调节膜受体的内吞作用。 此外,由炎症细胞因子和紫外线照射诱导的网格蛋白介导的EGFR内化依赖于MAPK14介导的表皮生长因子自身和RAB5A效应器的磷酸化。 跨膜蛋白的胞外体脱落也受p38 MAPK的调节。 在炎症刺激下,p38 MAPK磷酸化膜相关金属蛋白酶ADAM17。 这种磷酸化是ADAM17介导的TGF-α家族配体的外域脱落所必需的,这导致EGFR信号的激活和细胞增殖。 另一个p38 MAPK底物是FGFR1。 FGFR1可以从细胞外间隙转移到靶细胞的胞浆和细胞核,并调节rRNA合成和细胞生长等过程。 FGFR1易位需要p38 MAPK激活。 在细胞核中,许多转录因子被磷酸化并被p38 MAPK激活以响应不同的刺激。 经典示例包括ATF1、ATF2、ATF6、ELK1、PTPRH、DDIT3、TP53/p53以及MEF2C和MEF2A。 p38 MAPK通过调节染色质修饰物和重塑物而成为基因表达的重要调节因子。 参与炎症反应的几个基因的启动子,如IL6、IL8和IL12B,在LPS刺激的髓样细胞中显示了组蛋白H3磷酸化对“Ser-10”(H3S10ph)的p38 MAPK依赖性富集。 这种磷酸化增强了NF-kappa-B结合位点标记启动子的可接近性,以增加NF-kampa-B招募。 磷酸化CDC25B和CDC25C,这是与14-3-3蛋白结合所必需的,并导致紫外线照射后G2延迟启动。 DNA损伤后磷酸化TIAR,从GADD45A mRNA中释放TIAR并阻止mRNA降解。 p38 MAPK也可能具有激酶依赖性作用,这被认为是由于在缺乏磷酸化的情况下与靶点结合。 OGT催化的蛋白质O-Glc-N-酰化由MAPK14调节,尽管OGT似乎没有被MAPK14磷酸化,但在葡萄糖剥夺诱导MAPK14活化时,它们的相互作用增加。 这种相互作用可能通过将OGT招募到特定靶点(如神经丝H)来调节OGT活性,刺激其O-Glc-N-酰化。 胎儿中期发育需要胎盘迷路层中胚胎衍生血管的生长。 通过调节EPO基因表达,在发育和应激诱导的红细胞生成中也发挥着重要作用。 Isoform MXI2的激活受到有丝分裂原和氧化应激的刺激,并且仅对ELK1和ATF2进行低磷酸化。 等形EXIP可能在细胞凋亡的早期发生中起作用。 -
美国 大脑、心脏、胎盘、胰腺和骨骼肌。 在肺、肝和肾中表达较少。 -
序列相似性 属于蛋白激酶超家族。 CMGC Ser/Thr蛋白激酶家族。 MAP激酶亚家族。 包含1个蛋白激酶结构域。 -
结构域 TXY基序包含苏氨酸和酪氨酸残基,其磷酸化激活MAP激酶。 -
翻译后修饰 通过MAP2Ks MAP2K3/MKK3、MAP2K4/MKK4和MAP2K6/MKK6对Thr-180和Tyr-182进行双重磷酸化,以响应炎症因子、环境应激或生长因子,从而激活酶。 双重磷酸化也可以由TAB1介导的自身磷酸化介导。 T细胞中的TCR参与也导致ZAP70对Tyr-323的磷酸化。 通过DUPS1、DUSP10和DUSP16脱磷和灭活。 KAT2B和EP300在Lys-53和Lys-152处乙酰化。 Lys-53处的乙酰化增加了对ATP的亲和力并增强了激酶活性。 Lys-53和Lys-152通过HDAC3脱乙酰。 无所不在。 泛素化通过蛋白酶体途径导致降解。 -
细胞定位 细胞质。 核心。 -
UniProt提供的信息 -
别名 CSAID结合蛋白 Csaids结合蛋白 CSBP公司
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数据库链接
图片
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原始数据值拟合到四参数可变斜率曲线(+/-SD)。 -
原始数据值拟合到四参数可变斜率曲线(+/-SD)。 -
绘制三次测量的数据(平均值+/-SD),并与1X细胞提取缓冲液PTR(零)进行比较。 -
HeLa细胞在96周的组织培养板中培养,并在细胞溶解前用茴香霉素处理(15分钟)。 绘制了p38 MAPKα(pT180/Y182)的四次测量数据,并与总p38 MAPK-α蛋白水平进行了比较。 -
SimpleStep ELISA技术允许在一个步骤中形成抗体-抗原复合物,将检测时间缩短至90分钟。 将样品或标准品和抗体混合物一次性添加到微孔中,培养、清洗并添加最终基质。 有关详细的分步指南,请参阅协议。
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
文献 (1)
Abd El-Fattah EE公司 等。 AKT-AMPKα-mTOR依赖的HIF-1α激活是癌症治疗的一个新的治疗靶点:一种新的治疗肝癌的抗糖尿病药物西他列汀的重新定位方法。 前沿药理学 12:720173 (2021). 公共医学:35095479