概述
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产品名称 人 MSH6基因敲除HeLa细胞 -
产品概述 CRISPR/Cas9实现的敲除细胞裂解物。 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 通过使用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:在外显子4中插入1 bp。 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 桑格测序,蛋白质印迹(WB) -
重组说明 为了用作白细胞对照,将冻干液重新悬浮在50µL LDS*样品缓冲液中,使最终浓度达到2 mg/ml。对于还原条件,我们建议最终浓度为0.1 M DTT。 *不建议将SDS样品缓冲液用于这些冻干溶血物。 -
说明 裂解液制备: 我们的裂解产物是使用RIPA缓冲液制成的,我们在其中添加了蛋白酶抑制剂鸡尾酒和磷酸酶抑制剂鸡尾液(比例:300:100:10)。 这意味着感兴趣的蛋白质变性了。 如果您需要天然形式的蛋白质,请使用活细胞版本-找到 在这里 。请参阅我们的裂解协议,了解我们裂解产物的制备方法的更多详细信息。 用户存储说明: 冻干液可在4°C下储存。 复原后,在-20°C下短期保存或-80°C下长期保存。 获取数千种由常用癌症细胞系产生的敲除细胞裂解物。 有关敲除细胞裂解物的更多信息,请参阅此处。 Abcam没有也不打算为客户使用含有欧洲授权清单(附件十四)物质的产品申请REACH授权。 我们的客户有责任检查REACH授权和任何其他相关授权在其预期用途中应用的必要性。 本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . -
经测试应用
性能
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存放说明 储存于-80°C。 请参阅协议。 -
组件 1套 ab255514-人MSH6敲除HeLa细胞裂解物 1 x 100微克 ab255552-人类野生型HeLa细胞裂解物 1 x 100微克 -
研究领域 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 d7第820页:8,12 D16S539:9、10 vWA:16、18 第01页:第7页 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10
靶标
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功能 复制后DNA错配修复系统(MMR)的组成部分。 与MSH2异二聚体形成MutSα,与DNA错配结合,从而启动DNA修复。 当结合时,MutS-alpha弯曲DNA螺旋并屏蔽大约20个碱基对,并识别DNA中的单碱基错配和二核苷酸插入-删除环(IDL)。 错配结合后,与MutLα异二聚体形成三元复合物,该复合物被认为负责指导下游MMR事件,包括链识别、切除和再合成。 ATP结合和水解在失配修复功能中起着关键作用。 与MutS-alpha相关的ATP酶活性调节与分子开关类似的结合:不匹配的DNA激发ADP-->ATP交换,导致可识别的构象转换,将MutS-alpha转换为滑动钳,能够沿DNA主干水解诱导依赖性扩散。 这种转换对于不匹配修复至关重要。 MutSα也可能在DNA同源重组修复中发挥作用。 -
疾病相关 MSH6缺陷是遗传性非息肉病5型结直肠癌(HNPCC5)的病因[MIM:600678]。 多个基因位点的突变可能单独或联合参与HNPCC表型的产生(也称为Lynch综合征)。 大多数临床上公认的HNPCC家族都有MLH1或MSH2基因突变。 HNPCC是一种常染色体显性遗传疾病,与癌症易感性显著增加相关。 其特点是易患早发性结直肠癌(CRC)和胃肠道、泌尿系和女性生殖道的结肠外癌。 据报道,HNPCC是西方世界最常见的遗传性结直肠癌。 HNPCC中的癌起源于称为腺瘤的良性肿瘤性息肉。 临床上,HNPCC通常分为两个亚组。 I型:遗传性易患结直肠癌,发病年龄小,结肠近端可见癌。 II型:患者患某些组织癌症的风险增加,例如子宫、卵巢、乳腺、胃、小肠、皮肤和喉部,以及结肠。 经典型HNPCC的诊断基于阿姆斯特丹标准:3个或更多受结直肠癌影响的亲属,其中一个是其他两个的一级亲属; 2代或2代以上受影响; 一个或多个结直肠癌在50岁之前出现; 排除遗传性息肉病综合征。 MSH6突变似乎与非典型HNPCC有关,特别是与子宫内膜癌或非典型子宫内膜增生的发生有关,子宫内膜增生是子宫内膜癌的假定前驱。 MSH6缺陷也存在于不符合阿姆斯特丹HNPCC标准的家族性结直肠癌(可疑或不完整的HNPCC)中。 MSH6缺陷是子宫内膜癌(ENDMC)易感性的一个原因[MIM:608089]。 -
序列相似性 属于DNA错配修复mutS家族。 包含1个PWWP域。 -
翻译后修饰 N端被阻塞。 DNA损伤后发生磷酸化,可能是ATM或ATR引起的。 PRKCZ磷酸化,可通过泛素蛋白酶体途径阻止MutSα降解。 -
细胞定位 核心。 -
UniProt提供的信息 -
别名 DNA错配修复蛋白Msh6 G/T错配结合蛋白 G/T错配结合蛋白
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应用
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车道1: 野生型HeLa细胞裂解物(20µg) 车道2: MSH6敲除HeLa细胞裂解物(20µg) 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约14204 在160 kDa时观察到。 红色-加载控制 约52866 在50 kDa时观察到。 约14204 western blot显示,抗-MSH6抗体[44]与野生型HeLa细胞中的MSH6特异性反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 ab255410型 使用敲除细胞裂解物ab263763。 野生型和MSH6基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约14204 和抗α-微管蛋白抗体[EP1332Y]-微管标记( 约52866 )在4点孵育过夜 ° C分别为1/500稀释度和1/20000稀释度。 用山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附( ab216772型 )和山羊抗狂犬病IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( ab216777号 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
车道1: 野生型HeLa细胞裂解物(20µg) 车道2: MSH6敲除HeLa细胞裂解物(20µg) 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约92471 在160 kDa时观察到。 红色-加载控制 约130007 在124 kDa时观察到。 约92471 western blot显示重组抗-MSH6抗体[EPR3945]与野生型HeLa细胞中的MSH6特异性反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 ab255410型 使用敲除细胞裂解物ab263763。 野生型和MSH6基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约92471 4℃孵育过夜 ° C的稀释度分别为1/1000和1/2000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:第4外显子插入1 bp
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载