概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,纯合子:在外显子2中插入选择盒 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255448 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致丧失生存能力。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11,12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 第16天第539页:第9页,第10页 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 波形蛋白是在各种非上皮细胞,尤其是间充质细胞中发现的III类中间丝。 波形蛋白横向或末端附着于细胞核、内质网和线粒体。 参与LARP6对CO1A1和CO1A2的I型胶原mRNA的稳定。 -
组织特异性 在成纤维细胞中高表达,在T和B淋巴细胞中有一些表达,在Burkitt淋巴瘤细胞系中很少或没有表达。 在许多激素依赖性乳腺癌细胞系中表达。 -
疾病相关 白内障30 -
序列相似性 属于中间丝族。 -
结构域 中央α-螺旋线圈-线圈棒区域介导元素同二聚体化。 [IL]-x-C-x-x-[DE]基序是iNOS-S100A8/A9转亚硝化酶复合物介导的半胱氨酸S-亚硝基化的一个拟议目标基序。 -
翻译后修饰 丝裂原-55的磷酸化和巢蛋白(通过相似性)促进了有丝分裂期间的丝状体解体。 间充质来源的各种细胞中最显著的磷蛋白之一。 在细胞分裂过程中,磷酸化作用增强,此时波形蛋白丝显著重组。 PKN1的磷酸化抑制丝状物的形成。 在细胞质中性粒细胞分泌期间,CDK5在Ser-56处磷酸化。 通过STK33磷酸化。 在胞质分裂期间,O-糖基化的位点与磷酸化位点相同或接近,这会干扰磷酸化状态。 S-亚硝化由干扰素-γ和氧化修饰的低密度脂蛋白(LDL(ox))诱导,可能与iNOS-S100A8/9转亚硝化酶复合物有关。 -
细胞定位 细胞质。 -
UniProt提供的信息 -
形式 波形蛋白存在于结缔组织和细胞骨架中。
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗维生素A抗体[V9]-细胞骨架标记( 约8069 )浓度为1µg/ml 车道1: U-2 OS(人骨肉瘤上皮细胞系)细胞裂解物 车道2: 人扁桃体细胞裂解物 3号车道: 野生型HeLa细胞裂解物 车道4: VIM敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( 约216772 )稀释1/20000 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 53千帕 其他波段位于: 50 kDa(可能的负载控制) 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约8069 在53 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约181602 在37 kDa时观察到。 约8069 在野生型HeLa细胞中显示与波形蛋白反应。 敲除细胞系ab255446(敲除细胞裂解物 约263775 )已使用。 对野生型和波形蛋白敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约8069 和抗-GAPDH抗体[EPR16891]-负荷控制( 约181602 )分别以1µg/ml和1份20000稀释液在4°C下培养过夜。 用山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( 约216772 )和山羊抗狂犬病IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( ab216777号 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗维生素A抗体[SP20]( 约16700 )稀释度为1/100 车道1: U20S细胞裂解物 车道2: 人扁桃体细胞裂解物 3号车道: 野生型HeLa细胞裂解物 车道4: VIM敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释1/20000 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 53千帕 其他波段位于: 37 kDa(可能的负载控制) 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约16700 在53 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 在37 kDa时观察到。 约16700 在野生型HeLa细胞中显示与波形蛋白反应。 敲除细胞系ab255446(敲除细胞裂解物 约263775 )已使用。 对野生型和波形蛋白敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约16700 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C下以1/100稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:选择盒插入外显子2。
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载