概述
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产品名称 人 VDAC1(孔蛋白)敲除HEK-293T细胞株 -
亲代细胞系 HEK293吨 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,纯合子:外显子2中2 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HEK293T细胞系( 约255449 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.将小瓶在37°C水浴中解冻约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肾 -
单元格类型 上皮的 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:8、9 D13S317:12、14 D7S820:11 D16S539:9、13 vWA:16、19 TH01:7、9.3 TPOX:11个 CSF1PO:11、12 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 通过线粒体外膜和质膜形成通道。 线粒体外膜的通道允许小的亲水分子扩散; 在质膜中,它参与细胞体积调节和凋亡。 它在低或零膜电位下采用开放构象,在30-40mV以上电位下采用封闭构象。开放态具有弱的阴离子选择性,而封闭态具有阳离子选择性。 可能参与形成通透性过渡孔复合体(PTPC),负责释放触发细胞凋亡的线粒体产物。 -
组织特异性 心脏、肝脏和骨骼肌。 -
序列相似性 属于真核生物线粒体孔蛋白家族。 -
结构域 主要由19条β链形成的跨膜β-桶组成。 螺旋N末端折叠回孔开口,并在电压门控通道活性中发挥作用。 -
细胞定位 线粒体外膜。 细胞膜。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗-VDAC1/Porin+VDAC3抗体[20B12AF2]( 约14734 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型Hap1细胞裂解物 车道2: VDAC1敲除Hap1细胞裂解物 3号车道: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道4: VDAC1敲除HEK-293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 预先吸附的山羊抗小鼠IgG H&L(IRDye®800CW)( 约216772 )稀释1/20000 预测的带宽大小: 31千Da 其他波段位于: 37 kDa(可能的负载控制) 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约14734 在31 kDa时观察到。 红色负载控制, 约181602 在37 kDa时观察到。 约14734 在野生型HEK-293T细胞中显示与VDAC1/孔蛋白反应。 敲除细胞系ab255444(敲除细胞裂解物 约263839 )被使用。 对野生型和VDAC1/孔蛋白敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约14734 和抗-GAPDH抗体[EPR16891]-负荷控制( 约181602 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( ab216776年 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗-VDAC1/Porin+VDAC2抗体[EPR10852(B)]-线粒体负荷控制( 约154856 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型Hap1细胞裂解物 车道2: VDAC1敲除Hap1细胞裂解物 3号车道: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道4: VDAC1敲除HEK-293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释1/20000 预测的带宽大小: 31千Da 其他波段位于: 124 kDa(可能的负载控制) 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约154856 在31 kDa时观察到。 红色负载控制, 约8245 在37 kDa时观察到。 约154856 在野生型HEK-293T中显示与VDAC1/卟啉反应。 敲除细胞系ab255444(敲除细胞裂解物 约263839 )被使用。 对野生型和VDAC1/孔蛋白敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约154856 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( ab216776年 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:外显子2中2 bp缺失
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载