概述
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产品名称 人 SNCA敲除U-87 MG细胞系 -
亲本细胞系 U-87毫克 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:外显子2和内含子2-3中42 bp缺失,破坏供体剪接位点并导致终止密码子 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 桑格测序 -
经测试应用 -
生物安全水平 1 -
常规说明 建议控制: 人类野生型U-87( 约278079 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: EMEM+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: •所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 •引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 •如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 •当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。 本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 大脑 -
单元格类型 表皮样癌 -
疾病 胶质母细胞瘤 -
性别 男性 -
无支原体 是的 -
存放说明 干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 可能参与多巴胺释放和转运的调节。 诱导微管相关蛋白tau的纤维化。 降低神经元对各种凋亡刺激的反应性,导致胱天蛋白酶-3的激活降低。 -
组织特异性 主要在大脑中表达,但在除肝脏外的所有检查组织中也以低浓度表达。 集中于突触前神经末梢。 -
疾病相关 SNCA的遗传改变导致异常聚合成纤维,与几种神经退行性疾病(联核蛋白病)有关。 SNCA纤维聚集物是阿尔茨海默病淀粉样斑块的主要非A-β成分,也是路易体内含物的主要成分。 在1型脑铁蓄积性神经退行性变的路易体(LB)样神经元内包涵体、胶质包涵体和轴突球体中也发现了它们。 帕金森病1 帕金森病4 路易痴呆体 -
序列相似性 属于突触核蛋白家族。 -
结构域 “阿尔茨海默病淀粉样斑块的非A-β成分”域(NAC域)参与原纤维的形成。 中间的疏水区域形成细丝的核心。 C末端可以调节聚集并决定纤丝的直径。 -
翻译后修饰 磷酸化,主要是丝氨酸残基。 CK1的磷酸化作用似乎发生在不同于其他激酶磷酸化的残基上。 在同核蛋白病变中,Ser-129的磷酸化是选择性的和广泛的。 在体外,Ser-129的磷酸化促进了不溶性纤维的形成。 渗透胁迫下通过PTK2B依赖途径对Tyr-125进行磷酸化。 神经退行性同核蛋白病的标志性病变包含α-同核蛋白,该蛋白通过酪氨酸残基的硝化进行修饰,并可能通过二酪氨酸交联生成稳定的低聚物。 无所不在。 主要的共轭物是双泛素形式。 Met-1处的乙酰化对正确折叠和天然低聚物结构似乎很重要。 -
细胞定位 细胞质,胞浆。 膜。 核心。 细胞连接,突触。 保密。 多巴胺能神经元的膜结合。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗α-同核蛋白抗体[EPR20535]( 约212184 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型U-87 MG细胞裂解物 车道2: SNCA敲除U-87 MG细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 14千Da 观察到的频带大小: 16千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗Alpha-synuclein抗体[EPR20535]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约212184 被证明与Alpha-synuclein特异结合。 在野生型U-87 MG细胞裂解液中在16 kDa处观察到一条带,在SNCA敲除细胞系ab282333(敲除细胞裂解液 ab283006号 ). 为了生成此图像,分析了野生型和SNCA敲除的U-87 MG细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )以1/2000稀释。 -
外显子2和内含子2-3中42bp缺失,破坏供体剪接位点并导致终止密码子
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载