概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:外显子7中7 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255448 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表最低推荐稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12,13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 核膜解体后,需要维持分散在细胞质中的单个有丝分裂染色体(PubMed:27362226)。 与有丝分裂染色体的表面、染色体周层相关,并覆盖染色体表面的大部分(PubMed:27362226)。 通过形成空间电荷和静电电荷屏障,防止染色体塌陷成单个染色质团:蛋白质具有高净电荷,充当表面活性剂,分散染色体并实现独立的染色体运动(PubMed:27362226)。 结合DNA,优先选择超螺旋DNA和富含AT-的DNA(PubMed:10878551)。 对有丝分裂染色体的内部结构没有贡献(根据相似性)。 可能在染色质组织中起作用(PubMed:24867636)。 然而,尚不清楚它是在染色质组织中起直接作用,还是维持有丝分裂染色体分散功能的间接结果。 -
序列相似性 包含1个FHA域。 包含16个K167R重复。 包含1个PP1-绑定域。 -
发展阶段 表达优先发生在细胞周期的晚期G1、S、G2和M期,而在G0期细胞中无法检测到抗原(在蛋白水平)(PubMed:6206131)。 在G2期和有丝分裂期间(蛋白质水平)出现最高水平。 在间期,在核仁周围的纤维蛋白缺乏区域形成纤维状结构(PubMed:2674163,PubMed:8799815)。 -
翻译后修饰 磷酸化。 有丝分裂中的高磷酸化(PubMed:10502411,PubMed:10653604)。 高磷酸化形式不结合DNA。 -
细胞定位 染色体。 核心。 细胞核,核仁。 与有丝分裂染色体的表面、染色体周层相关,并覆盖有丝分裂的染色体表面的很大一部分(PubMed:27362226)。 与G1期卫星DNA相关(PubMed:9510506)。 在间期与染色质紧密结合,当染色质结合在浓缩染色体表面时,有丝分裂中染色质结合减少(PubMed:15896774,PubMed:22002106)。 主要定位于核周区的G1期,在后期,也可在整个核内部检测到,主要定位于细胞核基质(PubMed:22002106)。 -
UniProt提供的信息
相关产品
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KO细胞裂解物 -
相关产品
应用
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图片
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所有车道: 抗Ki67抗体[SP6]( 公元16667年 )稀释度为1/100 车道1: Ramos细胞裂解物 车道2: 野生型HeLa细胞裂解物 3号车道: MKI67敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释1/20000 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 358千帕 其他波段位于: 124 kDa(可能的负载控制) 1-3车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 公元16667年 在359 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约130007 在125 kDa时观察到。 公元16667年 在野生型HeLa细胞中显示与Ki67反应。 敲除细胞系ab255407(敲除细胞裂解物 约263762 )已使用。 对野生型和Ki67基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 公元16667年 和抗V蛋白抗体[VIN-54]( 约130007 )分别在4°C下以1/100稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗小鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:第7外显子7 bp缺失。
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载