概述
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产品名称 人 KRT7敲除A549细胞系 -
亲代细胞系 A549型 -
有机体 人类 -
突变描述 CRISPR/Cas9实现的淘汰; X=2 bp缺失; 帧偏移=100% -
通道编号 <20 -
淘汰验证 下一代测序(NGS),Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 1 -
常规说明 建议控制: 人野生型A549细胞系( ab259777号 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM:火腿F12+5%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 三 -1x10个 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为6x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的融合时,应使其传代。 不要超过7x10 4 细胞/厘米 2 .
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1毫升 -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肺 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌 -
性别 男性 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 阻断干扰素依赖性间期并刺激细胞DNA合成。 参与人乳头瘤病毒16型E7 mRNA(HPV16 E7)的翻译调控。 -
组织特异性 在培养的表皮、支气管和间皮细胞中表达,但在结肠、外宫颈和肝脏中不表达。 在胃和食道交界处的腺体细胞中观察到,但食道中没有。 -
序列相似性 属于中间丝族。 -
翻译后修饰 Arg-20是二甲基化的,可能是不对称的二甲基精氨酸。 -
细胞定位 细胞质。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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WT蛋白Arg166后2 bp缺失 -
所有车道: 抗细胞角蛋白7抗体[EP1620Y]( 约68460 )稀释度为1/10000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: KRT7敲除A549细胞裂解物 车道3: HeLa细胞裂解物 车道4: MCF7细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 使用ECL技术开发。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 40-55千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot:抗KRT7抗体[EP1620Y]( ab68460磅 )以1/10000稀释度染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度加载控制染色,以洋红色显示。 在Western blot中, 约68460 被证明与KRT7特异结合。 在野生型A549细胞裂解液中观察到40-55kDa的条带,在KRT7敲除细胞系中未观察到该大小的信号。 为了生成此图像,分析了野生型和KRT7敲除A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在TBS-0.1%吐温®20(TBS-T)中的3%牛奶中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 二级抗体为羊抗兔IgG H&L 800CW和羊抗鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/20000。 -
所有车道: 抗细胞角蛋白7抗体[EPR17078]-细胞骨架标记( 约181598 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: KRT7敲除A549细胞裂解物 车道3: HeLa细胞裂解物 车道4: MCF7细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 使用ECL技术开发。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 40-55千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot:抗KRT7抗体[EPR17078]( 约181598 )以1/1000稀释度染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度加载控制染色,以洋红色显示。 在Western blot中, 约181598 被证明与KRT7特异结合。 在野生型A549细胞裂解液中观察到40-55kDa的条带,在KRT7敲除细胞系中未观察到该大小的信号。 为了生成此图像,分析了野生型和KRT7敲除A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在TBS-0.1%吐温®20(TBS-T)中的3%牛奶中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 二级抗体为羊抗兔IgG H&L 800CW和羊抗鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/20000。 -
所有车道: 抗细胞角蛋白7抗体[SP52]( 约183344 )稀释1/25 车道1: 野生型A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: KRT7敲除A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道3: HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 车道4: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 50千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约183344 在50 kDa时观察到。 红色负载控制, 约8245 ,在37 kDa下观察到。 约183344 在野生型A549细胞中显示与KRT7(细胞角蛋白7)特异性反应,因为KRT7敲除细胞系ab261867(敲除细胞裂解物 约261676 ). 对野生型和KRT7基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 Ab183344和 约8245 (小鼠抗GAPDH负荷对照)分别在4°C、1/25稀释度和1/20000稀释度下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床 ab216773号 和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收 约216776 二级抗体在成像前在室温下以1/20000稀释1小时。 -
所有车道: HRP抗细胞角蛋白7抗体[EP17078]( 约209945 )稀释1/5000 车道1: 野生型A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: KRT7敲除A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道3: HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 车道4: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 ab209945年 在野生型A549细胞中显示与KRT7特异性反应,因为KRT7敲除细胞系ab261867(敲除细胞裂解物 约261676 ). 对野生型和KRT7基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 膜被3%的牛奶堵塞。 Ab209945和 约8245 (小鼠抗GAPDH负荷对照)分别在4°C、1/5000稀释度和1/20000稀释度下培养过夜。 用山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收 约216776 二级抗体在室温下以1/20000稀释1小时。 在使用ECL技术开发印迹之前,使用Licor Odyssey CLx对装载控制进行成像。 -
所有车道: HRP抗细胞角蛋白7抗体[EPR1619Y]-细胞骨架标记物( ab192079年 )稀释1/5000 车道1: 野生型A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: KRT7敲除A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道3: HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 车道4: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 51千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? ab192079年 在野生型A549细胞中显示与KRT7特异性反应,因为KRT7敲除细胞系ab261867(敲除细胞裂解物 约261676 ). 对野生型和KRT7基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 膜被3%的牛奶堵塞。 Ab192079和 约8245 (小鼠抗GAPDH负荷对照)分别在4°C、1/5000稀释度和1/20000稀释度下培养过夜。 用山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收 约216776 二级抗体在室温下以1/20000稀释1小时。 在使用ECL技术开发印迹之前,使用Licor Odyssey CLx对装载控制进行成像。 -
所有车道: 抗细胞角蛋白7抗体[SP52]( 公元119697年 )稀释1/25 车道1: 野生型A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: KRT7敲除A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道3: HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 车道4: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 50千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 公元119697年 在50 kDa时观察到。 红色负载控制, 约8245 ,在37 kDa下观察到。 公元119697年 在野生型A549细胞中显示与KRT7(细胞角蛋白7)特异性反应,因为KRT7敲除细胞系ab261867(敲除细胞裂解物 约261676 ). 对野生型和KRT7基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 Ab119697和 约8245 (小鼠抗GAPDH负荷对照)分别在4°C、1/25稀释度和1/20000稀释度下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床 ab216773号 和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收 约216776 二级抗体在成像前在室温下以1/20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗细胞角蛋白7抗体[EPR1619Y]-细胞骨架标记( 约68459 )稀释1/5000 车道1: 野生型A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: KRT7敲除A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道3: HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 车道4: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 观察到的频带大小: 50千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约68459 在50 kDa时观察到。 红色负载控制, 约8245 ,在37 kDa下观察到。 约68459 在野生型A549细胞中显示与KRT7(细胞角蛋白7)特异性反应,因为KRT7敲除细胞系ab261867(敲除细胞裂解物 约261676 ). 对野生型和KRT7基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 Ab68459和 约8245 (小鼠抗GAPDH负荷对照)分别在4°C、1/5000稀释度和1/20000稀释度下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床 ab216773号 和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收 约216776 二级抗体在成像前在室温下以1/20000稀释1小时。 -
X=2 bp删除
数据表及文件
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SDS下载 -
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