概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,纯合子:外显子2插入1 bp -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255928 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的融合时,应使其传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 TNFSF6/FASLG受体。 适配器分子FADD将caspase-8招募到激活的受体。 由此产生的死亡诱导信号复合物(DISC)执行caspase-8蛋白水解酶激活,启动随后的caspases级联(天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶)介导凋亡。 FAS介导的凋亡可能在诱导外周耐受、抗原刺激的成熟T细胞自杀或两者兼有中发挥作用。 分泌的亚型2至6阻断细胞凋亡(体外)。 -
组织特异性 在静息的外周血单个核细胞中,异型体1和异型体6的表达水平相同。 激活后,亚型1增加,亚型6水平降低。 -
疾病相关 FAS缺陷是1A型自身免疫性淋巴增殖综合征(ALPS1A)的病因[MIM:601859]; 也称为Canale-Smith综合征(CSS)。 ALPS是一种儿童综合征,包括溶血性贫血和血小板减少症,伴有大量淋巴结病和脾肿大。 -
序列相似性 包含1个死亡域。 包含3个TNFR-Cys重复。 -
结构域 包含参与FADD结合的死亡结构域,可能与其他细胞溶质适配器蛋白结合。 -
细胞定位 分泌膜和细胞膜。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗-Fas抗体[EPR5700]( 约133619 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: FAS敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 37千帕 观察到的频带大小: 37千帕 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约133619 在37 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在37kDa下观察到。 约133619 抗-Fas抗体[EPR5700]显示与野生型HeLa细胞中的Fas特异性反应。 敲除细胞系ab265260(敲除细胞裂解物 约256911 )已使用。 对野生型和Fas敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约133619 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以1000分之一和20000分之一的稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:外显子2插入1 bp。 -
FAS敲除HeLa细胞、低汇合和高汇合示例(左上和右上)以及野生型HeLa电池的代表性图像,低汇合与高汇合(左下和右下)显示出典型的粘附、上皮样形态。 使用EVOS XL Core显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载