概述
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产品名称 人 DAPK3(ZIP激酶)敲除HEK-293T细胞系 -
亲代细胞系 HEK293吨 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,纯合子:外显子1插入1 bp -
通道编号 <20 -
淘汰验证 桑格测序 -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
规则说明 Western blot数据表明,CRISPR基因编辑可能导致相关蛋白的截短。 请参阅数据图像。 建议控制: 人野生型HEK293T细胞系( 约255449 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表最低推荐稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
该产品受布罗德研究所、ERS基因组学有限公司和Sigma Aldrich有限责任公司的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/暂停 粘附剂 -
组织 肾 -
单元格类型 上皮的 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:8、9 D13S317:12、14 D7S820:11 D16S539:9、13 vWA:16、19 TH01:7、9.3 TPOX:11个 CSF1PO:11、12 -
无支原体 是的 -
存放说明 干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
新冠肺炎疫苗
靶标
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功能 丝氨酸/苏氨酸激酶是细胞凋亡的积极调节者。 有丝分裂期间着丝粒处“Thr-11”上的磷酸化组蛋白H3。 通过MYPT1的磷酸化调节肌球蛋白轻链磷酸酶,从而调节肌动蛋白细胞骨架的组装、细胞迁移、肿瘤细胞的侵袭性、平滑肌收缩和神经突起的生长。 参与真核细胞核中许多亚核结构域之一的早幼粒细胞白血病蛋白核体(PML-NB)的形成,并参与肿瘤发生和病毒感染。 -
美国 属于蛋白激酶超家族。 CAMK Ser/Thr蛋白激酶家族。 DAP激酶亚家族。 包含1个蛋白激酶结构域。 -
翻译后修饰 无所不在。 UBE2D3 E3连接酶介导的泛素化不会导致蛋白酶体降解,但会影响细胞核内早幼粒细胞白血病蛋白核体(PML-NBs)的形成。 自动磷酸化。 ROCK1磷酸化。 -
细胞定位 核心。 细胞质。 细胞核>PML体。 重新定位到结合PAWR的细胞质中,复合物似乎与肌动蛋白丝相互作用(根据相似性)。 定位于早幼粒细胞白血病蛋白核体(PML-NBs)。 从前期到后期与着丝粒结合。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗ZIP激酶抗体[EPR1636Y]( ab51602标准 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HEK293T细胞裂解物 车道2: DAPK3敲除HEK293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 53千帕 观察到的频带大小: 53千帕 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab51602标准 在53 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 ab51602标准 western blot显示与野生型HEK-293T细胞中的ZIP激酶反应。 在敲除细胞系ab266755(敲除细胞裂解物 第257407页 )53kDa以下的车道可能代表截断形式和劈开碎片。 尚未对此进行进一步调查。 对野生型HEK-293T和DAPK3敲除HEK-293细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 ab51602标准 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以1/1000和1/20000的稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗ZIP激酶抗体[EPR1635]( 约79422 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HEK293T细胞裂解物 车道2: DAPK3敲除HEK293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 53千帕 观察到的频带大小: 53千帕 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约79422 在53 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 约79422 western blot显示与野生型HEK-293T细胞中的ZIP激酶反应。 在敲除细胞系ab266755(敲除细胞裂解物 第257407页 )53kDa以下的车道可能代表截断形式和劈开碎片。 尚未对此进行进一步调查。 对野生型HEK-293T和DAPK3敲除HEK-293细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约79422 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以1/5000稀释度和1/20000稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:外显子1插入1 bp
数据表及文件
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