概述
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产品名称 人 CLDN1敲除A-431细胞系 -
亲代细胞系 A431型 -
有机体 人类 -
突变描述 CRISPR/Cas9实现的淘汰; X=5 bp缺失,2 bp缺失; 帧移位=99.7% -
通道编号 <20 -
淘汰验证 下一代测序(NGS),Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 1 -
常规说明 建议控制: 人野生型A-431细胞系( 约263975 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻培养基DMSO无血清培养基,在补充有甲基纤维素的MEM中含有8.7%DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的融合时,应使其传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 皮肤 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 表皮样癌 -
性别 女性 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 Claudins是紧密连接复合体的主要成分,调节上皮细胞的通透性。 虽然一些克劳丁家族成员在不渗透屏障的形成中起着重要作用,但其他成员调节对离子和小分子的渗透性。 通常,几个克劳丁家族成员共存并相互作用,这决定了整体的渗透性。 CLDN1是防止小分子通过表皮紧密连接在细胞旁扩散所必需的,也是皮肤正常屏障功能所必需的。 由于CLDN1本身对于角质形成细胞紧密连接处的水屏障的形成似乎是不必要的,因此可能通过间接影响其他蛋白质的表达水平来实现正常水稳态和防止皮肤过度失水所必需的(PubMed:23407391)。 (微生物感染)作为肝细胞中丙型肝炎病毒的受体(PubMed:17325668)。 作为登革热病毒的受体(PubMed:24074594)。 -
组织特异性 在肝脏和肾脏中强烈表达。 表达于心脏、大脑、脾脏、肺和睾丸。 -
疾病相关 鱼鳞病硬化性胆管炎新生儿综合征 -
美国 属于克劳丁家族。 -
细胞定位 细胞连接,紧密连接。 细胞膜。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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WT蛋白Leu16后2 bp缺失(等位基因1)和5 bp缺失(等位基因2) -
所有车道: 抗-Claudin 1抗体( ab129119号 )浓度为1µg/ml 车道1: 野生型A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: CLDN1敲除物A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 车道1-2: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab129119号 在18 kDa时观察到。 红色负载控制, 约8245 ,在37 kDa下观察到。 ab129119号 在野生型A-431细胞中表现出特异性反应,因为在CLDN1敲除细胞系ab261889中信号丢失(敲除细胞裂解物 约261698 ). 对野生型和CLDN1基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 膜被3%的牛奶堵塞。 Ab129119和 约8245 (小鼠抗GAPDH负荷对照)分别在4℃、1 ug/ml和1/20000稀释度下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床 ab216773号 和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收 约216776 二级抗体在成像前在室温下以1/20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗-Claudin 1抗体[EPR9306]( 约180158 )稀释度为1/10000 车道1: 野生型A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: CLDN1敲除物A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物 车道3: A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 1-3车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约180158 在18 kDa时观察到。 红色负载控制, 约8245 ,在37 kDa下观察到。 ab180158 当CLDN1敲除A-431细胞系ab261889(敲除细胞裂解物 约261698 ). 对野生型和A-431 CLDN1敲除样品进行SDS-PAGE分析。 膜被3%的牛奶堵塞。 Ab180158和 约8245 (小鼠抗GAPDH负荷对照)分别以1/10000和1/20000稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床 ab216773号 和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收 约216776 二级抗体在成像前在室温下以1/20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗-Claudin 1抗体[EPRR18871]( ab211737型 )稀释1/2000 车道1: 野生型A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: CLDN1敲除物A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物 车道3: A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道4: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab211737型 在18 kDa时观察到。 红色负载控制, 约8245 ,在37 kDa下观察到。 ab211737型 当CLDN1敲除A-431细胞系ab261889(敲除细胞裂解物 约261698 ). 对野生型和A-431 CLDN1敲除样品进行SDS-PAGE分析。 膜被3%的牛奶堵塞。 Ab211737和 约8245 (小鼠抗GAPDH负荷对照)分别以1/2000稀释度和1/20000稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床 ab216773号 和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收 约216776 二级抗体在成像前在室温下以1/20000稀释1小时。 -
X=5 bp缺失,2 bp缺失
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载