概述
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产品名称 人 CASP9敲除THP-1细胞系 -
亲代细胞系 THP-1型 -
有机体 人类 -
通道编号 <20 -
生物安全水平 1 -
常规说明 建议控制: 人野生型THP-1细胞系( 约275477 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: RPMI+10%FBS+0.05 mMβ-巯基乙醇 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞沉淀重新悬浮在5mL预热的培养基中,并使用血细胞仪或替代细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2-4x10的适当细胞培养瓶中 5 细胞/mL。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行缩放。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 5.THP-1细胞从冷冻保存中恢复缓慢,因此可能在数天内无法进行继代培养。 在此期间,应尽可能多地保留细胞,仅在细胞密度达到8x10时进行传代培养 5 细胞/mL。 亚文化准则: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 细胞应在2-4x10处播种 5 细胞/mL,达到8x10时传代 5 细胞/mL。不建议细胞密度超过1x10 6 细胞/mL。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 暂停 -
组织 血液 -
单元格类型 急性单核细胞白血病 -
疾病 急性单核细胞白血病 -
性别 男性 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 参与负责凋亡执行的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶的激活级联。 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9与Apaf-1的结合导致蛋白酶激活,蛋白酶随后裂解并激活半胱氨酸蛋白酶-3。 蛋白质水解裂解聚ADP-核糖聚合酶(PARP)。 异构体2缺乏活性是胱天蛋白酶-9的主要负性抑制剂。 -
组织特异性 无处不在,心脏表达最高,肝脏、骨骼肌和胰腺表达中等。 所有其他组织中含量低。 在心脏内,特别在心肌细胞中表达。 -
序列相似性 属于肽酶C14A家族。 包含1个卡域。 -
发展阶段 胎儿心脏低水平表达,新生儿心脏中等水平表达,成人心脏高水平表达。 -
翻译后修饰 颗粒酶B对Asp-315的裂解和caspase-3对Asp-330的裂解产生两个活性亚基。 Caspase-8和-10也可能参与这些处理事件。 -
UniProt提供的信息
图片
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所有车道: 抗天冬氨酸酶-9抗体[EPR18107]( 公元202068年 )稀释1/2000 车道1: 野生型THP-1细胞裂解物 车道2: CASP9敲除THP-1细胞裂解物 3号车道: HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 45千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗天冬氨酸酶-9抗体[EPR18107]在1/2000稀释度下染色,以绿色显示; 鼠抗CANX[CANX/1543]( ab238078型 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 公元202068年 显示与Caspase-9特异结合。 在野生型THP-1细胞裂解液中在45 kDa处观察到一条带,在CASP9敲除细胞系ab276122(敲除细胞裂解液 约284219 ). 为了生成此图像,分析了野生型和CASP9敲除THP-1细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温®中3%牛奶中的膜被堵塞 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收( 约216776 )稀释1/20000。 -
所有车道: 抗天冬氨酸酶-9抗体[EPR18108]( 约185719 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型THP-1细胞裂解物 车道2: CASP9敲除THP-1细胞裂解物 3号车道: HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 45千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗天冬氨酸酶-9抗体[EPR18108]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 鼠抗CANX[CANX/1543]( ab238078型 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约185719 显示与Caspase-9特异结合。 在野生型THP-1细胞裂解液中在45 kDa处观察到一条带,在CASP9敲除细胞系ab276122(敲除细胞裂解液 约284219 ). 为了生成此图像,分析了野生型和CASP9敲除THP-1细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在TBS-0.1%吐温®20(TBS-T)中的3%牛奶中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸收抗体( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
所有车道: 抗天冬氨酸酶-9抗体[E23]( 约32539 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型THP-1细胞裂解物 车道2: CASP9敲除THP-1细胞裂解物 3号车道: HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 45千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 蛋白质印迹的假彩色图像:1/1000稀释的抗半胱氨酸9抗体[E23]染色,显示为绿色; 鼠抗CANX[CANX/1543]( ab238078型 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约32539 显示与Caspase-9特异结合。 在野生型THP-1细胞裂解液中在45 kDa处观察到一条带,在CASP9敲除细胞系ab276122(敲除细胞裂解液 约284219 ). 为了生成此图像,分析了野生型和CASP9敲除THP-1细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在TBS-0.1%吐温®20(TBS-T)中的3%牛奶中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸收抗体( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。
数据表及文件
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