概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,纯合子:第10外显子1 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255928 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 冷冻保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 应每天对培养物进行监测。 亚文化准则: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 。 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 形成生物钟核心成分的转录激活物。 生物钟是一种内部计时系统,通过在基因表达中产生大约24小时的昼夜节律来调节各种生理过程,这些节律被转化为代谢和行为的节律。 它源自拉丁词根“circa”(about)和“diem”(day),是一系列生理功能的重要调节器,包括新陈代谢、睡眠、体温、血压、内分泌、免疫、心血管和肾功能。 由两个主要组成部分组成:位于大脑视交叉上核(SCN)中的中央时钟和几乎存在于每个组织和器官系统中的外周时钟。 中央和外围时钟都可以通过环境提示重置,也称为Zeitgebers(德语中的“计时器”)。 中央时钟的主要时差是光,由视网膜感应并直接向SCN发出信号。 中央时钟通过神经元和荷尔蒙信号、体温和与进食相关的提示引导外围时钟,使所有时钟与外部光/暗周期对齐。 昼夜节律允许生物体通过调节基因表达,每24小时产生一次蛋白质表达峰值,以控制特定生理过程相对于太阳日最活跃的时间,从而在分子水平上实现与环境的时间内稳态。 核心时钟成分(时钟、NPAS2、ARNTL/BMAL1、ARNTL2/BMAL2、PER1、PER2、PER3、CRY1和CRY2)的转录和翻译在节律生成中起着关键作用,而翻译后修饰(PTM)引起的延迟对确定周期(tau)很重要 节律的长度(τ是指节律的周期,是一个完整周期的时间长度)。 昼夜节律与昼夜周期同步,而中点和中点节律的周期分别短于24小时和长于24小时。 昼夜节律的破坏有助于心血管疾病、癌症、代谢综合征和衰老的病理学。 转录/翻译反馈环(TTFL)是分子昼夜节律机制的核心。 转录因子CLOCK或NPAS2和ARNTL/BMAL1或ARNTL2/BMAL2形成反馈回路的正肢,以异二聚体的形式发挥作用,激活核心时钟基因和时钟控制基因(参与关键代谢过程)的转录,在其启动子中包含E-box元件(5'-CACGTG-3')。 核心时钟基因:PER1/2/3和CRY1/2是转录抑制物,它们形成反馈回路的负肢并与时钟相互作用 NPAS2-ARNTL/BMAL1型 ARNTL2/BMAL2异二聚体抑制其活性,从而负调控其自身表达。 这种异二聚体还激活核受体NR1D1/2和RORA/B/G,它们分别形成第二反馈环,并激活和抑制ARNTL/BMAL1转录。 ARNTL/BMAL1通过对典型Wnt信号通路基因的转录控制,正向调节肌肉生成,负向调节脂肪生成。 在正常胰腺β细胞功能中起作用; 通过调节抗氧化基因NFE2L2/NRF2及其靶点SESN2、PRDX3、CCLC和CCLM来调节葡萄糖刺激的胰岛素分泌。 负性调节mTORC1信号通路; 调节MTOR和DEPTOR的表达。 控制Ly6C炎性单核细胞的昼夜振荡; PRC2复合体的节律性募集给维持Ly6C单核细胞节律所必需的趋化因子表达带来日变化。 调节卵巢中HSD3B2、STAR、PTGS2、CYP11A1、CYP19A1和LHCGR的表达以及与毛发生长有关的基因。 通过调节神经干/祖细胞(NSPCs)及时进入细胞周期和细胞周期结束前发生的细胞分裂数量,在成年海马神经发生中发挥重要作用。 调节CIART和KLF11的昼夜表达。 CLOCK-ARNTL/BMAL1异二聚体调节SERPINE1/PAI1、VWF、B3、CCRN4L/NOC、NAMPT、DBP、MYOD1、PPARGC1A、PPARKC1B、SIRT1、GYS2、F7、NGFR、GNRHR、BHLHE40/DEC1、ATF4、MTA1、KLF10以及与葡萄糖和脂质代谢相关的基因的昼夜表达。 通过位于其铰链区域的多个赖氨酸残基的乙酰化减少NR3C1/GR与糖皮质激素反应元件(GRE)的关联,抑制糖皮质激素受体NR3C1/GR诱导的转录活性。 促进有节奏的染色质开放,调节其他转录因子的DNA可及性。 NPAS2-ARNTL/BMAL1异二聚体通过调节视网膜中腺苷酸环化酶1(ADCY1)的节律性表达,积极调节MAOA、F7和LDHA的表达,并调节日间对比敏感度的昼夜节律。 -
组织特异性 毛囊(蛋白质水平)。 在成人大脑、骨骼肌和心脏中高度表达。 -
序列相似性 包含1个bHLH(基本螺旋-环-螺旋)域。 包含1个PAC(PAS-associated C-terminal)域。 包含2个PAS(PER-ARNT-SIM)域。 -
翻译后修饰 泛素化,导致其蛋白酶体降解。 O-糖基化; 包含O-GlcNAc。 OGT的O-糖基化通过抑制泛素化防止蛋白质降解。 它还稳定了CLOCK-ARNTL/BMAL1异二聚体,从而增加了生物钟负环(如PER1/2/3和CRY1/2)中由CLOCK-ANNTL/BMA1-介导的基因转录。 用CLOCK二聚后在Lys-538上乙酰化。 乙酰化促进CRY1介导的抑制。 SIRT1脱乙酰,可能导致蛋白质稳定性降低。 用时钟二聚后磷酸化。 磷酸化通过促进CLOCK-ARNTL/BMAL1异二聚体的降解,增强转录活性,改变亚细胞定位,降低其稳定性。 磷酸化显示肝脏的昼夜变化,峰值在CT10到CT14之间。 CK2在Ser-90的磷酸化对其核定位、与时钟的相互作用以及控制时钟核的进入至关重要。 用CLOCK二聚化后,在Lys-259上进行氨酰化。 主要与聚-SUMO2/3而非SUMO1结合,这些结合物的水平发生节律性变化,在CT9-CT12达到峰值。 Sumoylation使其仅定位于PML体,并促进其在PML体中的泛素化、泛素依赖性蛋白酶体降解和CLOCK-ARNTL/BMAL1异二聚体的转录活性。 -
细胞定位 核心。 细胞质。 核,PML体。 细胞核和细胞质之间的穿梭和这种核质穿梭对于时钟的核积累、靶基因转录和时钟-核糖核酸/碱性磷酸酶1异二聚体的降解至关重要。 sumoylated形式定位于PML体内。 在ID2存在的情况下,固定在细胞质上。 -
UniProt提供的信息
相关产品
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KO细胞裂解物
应用
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所有车道: 稀释1/1000的抗肾上腺素能受体抗体 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: ARNTL敲除HeLa细胞裂解物 3号车道: SH-SY5Y细胞裂解液 车道4: Huh7细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 68千Da 观察到的频带大小: 76千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在76 kDa时观察到抗1-肾上腺素能受体抗体。 红色-加载控制 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在37kDa下观察到。 Western blot显示,在野生型HeLa细胞中,抗肾上腺素能受体抗体与肾上腺素能受体反应,在ARNTL基因敲除细胞系ab264701(ARNTL敲除细胞裂解物)中观察到信号丢失 约258314 ). 对野生型HeLa和ARNTL敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )与抗肾上腺素能受体抗体孵育前 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:第10外显子1 bp缺失。
数据表及文件
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