概述
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产品名称 -
亲代细胞系 HEK293吨 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,外显子2插入1 bp,外显基因2缺失23 bp,外显子2插入2 bp -
通道编号 <20 -
淘汰验证 桑格测序,蛋白质印迹(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HEK293T细胞系( 约255449 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 应每天对培养物进行监测。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞计数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肾 -
单元格类型 上皮的 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:8,9 D13S317:12、14 D7S820:11 D16S539:9、13 vWA:16、19 TH01:7、9.3 TPOX:11个 CSF1PO:11、12 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 可能的氧化还原酶,在控制细胞生命和死亡中具有双重作用; 在凋亡过程中,它从线粒体转移到细胞核,在caspase非依赖性途径中作为促凋亡因子发挥作用,而在正常线粒体中,它通过其氧化还原酶活性发挥抗凋亡因子的作用。 细胞核中的可溶性形式(AIFsol)诱导“部分死亡”,即染色体DNA的半胱天冬酶非依赖性断裂。 与EIF3G相互作用,从而抑制EIF3机制和蛋白质合成,并激活casapse-7以放大凋亡。 在过氧化氢暴露细胞中的半胱天冬酶非依赖性、固缩性细胞死亡中起关键作用。 以序列无关的方式与DNA结合。 -
疾病相关 AIFM1缺陷是6型复合氧化磷酸化缺陷症(COXPD6)[MIM:300816]的原因。 这是一种线粒体疾病,导致神经退行性疾病,其特征是精神运动迟缓、张力减退、屈曲乏力、肌肉无力和消瘦。 -
序列相似性 属于FAD依赖性氧化还原酶家族。 -
翻译后修饰 在正常条件下,线粒体加工肽酶(MPP)在线粒体膜间间隙(IMS)易位期间或易位后,首先通过蛋白质水解去除54位N-末端片段,形成膜内锚定成熟型(AIFmit)。 在凋亡过程中,它在氨基酸位置101处进一步进行蛋白质水解处理,导致成熟形式的产生,该成熟形式仅限于线粒体IMS中的可溶性形式(AIFsol)。 AIFsol被释放到细胞质中以响应特定的死亡信号,并转移到细胞核,在那里以半胱天冬酶非依赖性的方式诱导核凋亡。 -
细胞定位 线粒体膜间间隙。 线粒体内膜。 细胞质。 核心。 细胞质>核周区。 在转位到线粒体膜间隙(IMS)期间或刚转位到IMS之后,蛋白质裂解导致形成膜内锚定成熟型(AIFmit)。 在细胞凋亡过程中,进一步的蛋白水解过程会导致成熟形式,以可溶性形式(AIFsol)局限于线粒体IMS。 AIFsol被释放到细胞质以响应特定的死亡信号,并转移到细胞核,在那里诱导核凋亡。 在细胞核和核周区域与EIF3G共定位。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗AIF抗体[E20]-线粒体标记( ab32516型 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道2: AIFM1敲除HEK-293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测波段大小: 67千帕 观察到的频带大小: 67千帕 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab32516型 在67 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 ab32516型 western blot显示在野生型HEK-293T细胞中与AIF反应。 当敲除细胞系ab266347(敲除细胞裂解物 约256834 )已使用。 对野生型HEK-293T和AIFM1敲除型HEK-29.3T细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 ab32516型 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因1:第2外显子23 bp缺失 -
等位基因2:外显子2插入1 bp。 -
等位基因3:在外显子2插入2 bp。 -
代表性图像AIFM1敲除HEK293T细胞,低汇合和高汇合示例(左上和右上)和野生型HEK293 T细胞,高汇合和低汇合(左下和右下)显示典型的粘附上皮样形态。 使用EVOS M5000显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表及文件
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SDS下载 -
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