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我们已经系统地测定了超过 840拉布(Abcam的兔单克隆抗体系列)的 K(K)D类值(抗体及其抗原之间的平衡解离常数),用以评估其个体 K(K)D类值,并观察 拉布MAb抗体的平均亲和力。与已发表文献载明的小鼠单克隆抗体值的比较结果显示,拉布MAb抗体的亲和力平均提高了 1-2 个数量级(图 1)。
图1:拉布MAb抗体与小鼠单抗 的K(K)D类 分布对比:本次对比选用的88种小鼠单抗的K(K)D类 值来自已发表的文献。每种小鼠单抗的K(K)D类值可能都已经使用了多种方法和步骤进行了单独测定。863种拉布MAb抗体的K(K)D类 值均通过OI-RD操作系统测定项目测定。
什么是K(K)D类?它与抗体亲和力和敏感性有何关系?
K(K)D类是抗体与其抗原之间的平衡解离常数,即 k个远离的/k个在的比。K(K)D类与亲和力成反比。K(K)D类值与抗体的浓度(特定实验所需的抗体量)有关,因此 K(K)D类值越低(浓度越低),抗体的亲和力越高。
K(K)D类 值
摩尔浓度(敏感性)
10-4至 10-6
微摩尔(µM)
10-7至 10-9
纳摩尔(毫微米)
10-10 至 10-12
皮摩尔(百万分之一)
10-13 至 10-15
飞摩尔(fM)
表1:K(K)D类和摩尔值
相关测定与加州大学戴维斯分校物理系 J.Landry和X.Zhu合作,即OI-RD(斜入射反射率差)以及亲和力数据的数据处理、数据分析和报告生成在加州大学戴维斯分校物理系测定,并在发布前交由 阿布卡姆的科学家进行了测定置信度审查。
阅读有关此新型抗体 K(K)D类测定方法的详细信息。
为了确保您能够查看各抗体的 K(K)D类 测定值,已在各抗体产品页添加各抗体的特定 K(K)D类值和对应图示。
图2:K(K)D类 值图表说明:
斜率平缓 = 解离速率缓慢/抗体结合较强
下降趋势明显 = 解离速度较快/抗体结合较弱
在虚线处,将溶液换回空缓冲溶液并运行肽微阵列。
K(K)D类系指抗体从其抗原解离的速率 (k)远离的)与抗体与抗原缔合的速率 (k)在) 之间的比值。网站上列出的 K(K)D类 值系通过测定特定抗体/抗原相互作用的 k个在和k个远离的,然后根据所得值之间比率确定的。
K(K)D类 值和抗体亲和力之间是什么关系?
亲和力系指单个分子与其配体结合的强度,通常通过平衡解离常数 (K)D类) 进行测定和报告,平衡解离常数可用于评估两分子间相互作用的强度并对此进行排序。抗体与其抗原的结合是一个可逆的过程,结合反应的速率与反应物的浓度成正比。
平衡时,[抗体] [抗原]复合物的形成速率与其解离成其组分[抗体] + [抗原]的速率相等。测定反应速率常数可定义平衡或亲和力常数 (1/K)D类)。简而言之,K(K)D类值越小,抗体对其靶标的亲和力越大。
大多数抗体的K(K)D类值都在低微摩尔 (10-6) 至纳摩尔 (10-7至 10-9) 范围内。人们通常认为,高亲和力抗体处于低纳摩尔范围内 (10-9),而亲和力非常高的抗体处于皮摩尔范围内 (10-12)。采用 OI-RD 850多次测定后得出,RabMAb公司D类值约为 7 x 10-11M、 拉巴马布抗体普遍具有很高的亲和力。
K(K)D类值采用加州大学戴维斯分校物理系 詹姆斯·兰德里和朱向东博士开发的新型无标记检测系统测量。这是一个基于微阵列的系统,并且结合了基于偏振调制斜入射反射率差 (OI-RD)(参考)的无标记光学扫描仪。
了解 OI-RD公司
使用 OI-RD或Biacore仪器对六个独立的抗体-抗原对进行动力学测量。在该实验中,双倍抗原被捕获到固体支持物上。通过注射四种浓度的 RabMAb公司抗体产生结合数据。用于拟合实验数据的模型为 朗缪尔1比1并使用整体曲线拟合分析。比较分析结果汇总参见表 2 和图 2。结果表明,各分析方法之间具有极好的相关性,并且在一个数量级内。
抗体
OI-RD K系列D类(百万)
Biacore K公司D类(百万)
表皮生长因子受体
8.5E(东经)-12
1.9E版-11
谷氨酸-1
2.4英-11
7.7E版-12
CD34型
4.1E节-11
1.2电子10
胰高血糖素
7.0E版-11
3.3E(东经)-10
细胞角蛋白15
2.5E(东经)-10
5.6E(东经)-10
表2:使用OI-RD公司和表面等离子共振获得的K(K)D类 测定结果比较。
参考文献