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请你把这种抗体的IHC协议发给我。
Abcam社区
已验证客户
2012年5月30日被问及
感谢您昨天与我们联系。 我已经从实验室收到关于ab108508的IHC协议的更多信息。我可以确认0.01M柠檬酸钠缓冲液(pH 6.0)用于抗原回收。这是一份副本协议的: 石蜡包埋组织的免疫组织化学方案 1.溶液和试剂1.1. 二甲苯1.2. 无水变性乙醇,组织学分级(100%、95%、70%、50%)1.3. 洗涤缓冲液/TBST:1X TBS/0.1%吐温-20,pH至7.6。1.4. 蒸馏水(dH2O)1.5. 抗原回收溶液:0.01M柠檬酸钠缓冲液,pH 6.0准备抗原回收储备溶液:10X储备液:将29.4 g柠檬酸钠三钠脱水盐(C6H 5Na 3O 7 2H2O)溶解在1升dH2O中。添加5mL吐温-20。1X工作溶液:将200mL 10X储备液与1800mL dH2O混合;pH至6.01.6. 3%过氧化氢1.7. 封闭缓冲液:PBS中的10%血清(血清来源取决于第二抗体的宿主)1.8. 初级抗体稀释液:PBS中的5%血清(血清来源取决于宿主二级抗体)1.9. 苏木精1.10. 永久性安装介质 2.协议2.1. 脱蜡/复水2.1.1. 在65°C的烘箱中加热滑梯1小时。2.1.2. 使用以下系列洗涤液进行脱沥青/水合物处理:两次二甲苯洗涤(每次3分钟),然后两次100%乙醇洗涤(每次3min),然后是95%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、30%乙醇,然后在振动筛上TBST洗涤3分钟。 2.2. 抗原检索这是建议使用脱粘法进行热诱导表位检索(HIER)腔室/压力锅。也可以使用带温度传感器的热水浴或微波炉(协议因所用方法而异)。2.2.1. 向Decloaker/压力锅中添加500 ml dH2O。2.2.2. 将载玻片浸入含有抗原回收液的染色皿中。将染色盘放入脱胶室。2.2.3. 程序在125°C下运行30秒,然后在90°C下运转10秒。2.2.4. 让它冷却到室温(10-20分钟)。2.2.5. 去除载玻片并在TBST中冲洗。2.2.6. 继续染色步骤。 2.3. 染色2.3.1. 在摇床上用TBST清洗载玻片3分钟。2.3.2. 用3%过氧化氢覆盖组织5分钟,使内源性过氧化物酶失活。2.3.3. 用TBST清洗载玻片三次(每次在振动筛上3分钟)。2.3.4. 用封闭溶液封闭幻灯片1小时。2.3.5. 根据数据表上的建议,在一级抗体稀释液中稀释一级抗体。2.3.6. 将一级抗体涂敷在每个切片上,并在加湿室(4ºC)中培养过夜。2.3.7. 用TBST清洗载玻片三次(每次在振动筛上3分钟)。2.3.8. 按照制造商的建议,将二级HRP结合的抗兔抗体稀释在封闭溶液中,涂敷于每个部位;在室温下孵育30分钟。2.3.9. 用TBST清洗载玻片三次(在振动筛上各清洗5分钟)。2.3.10. 将新制备的DAB基质添加到切片中,并孵育直至出现色斑(通常1分钟)。2.3.11. 用水冲洗部分。2.3.12. 苏木精反染(一般10秒)。2.3.13. 用水冲洗部分。2.3.14. 使用两次含100%乙醇的洗涤液将样品脱水(每次3分钟),然后用二甲苯冲洗两次(每次3分钟)。2.3.15. 使用永久性安装介质将盖玻片安装在幻灯片上。 我希望这些信息有帮助,并且抗体工作良好。如果您有进一步的问题,请随时与我们联系。
回复于 2012年5月30日