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α-突触核蛋白是在突触活动中发挥多种作用的神经元蛋白。
α-突触核蛋白通过增强胞吐融合孔的囊泡启动、融合和扩张,作为单体参与突触小泡胞吐作用,调节突触小泡运输和随后的神经递质释放。
α-同核蛋白在多聚体膜结合状态下作为分子伴侣,与半胱氨酸串蛋白-α/DNAJC5一起帮助突触前质膜上称为 SNARE(美国国家科学基金会附着蛋白受体)的突触融合成分折叠。
α-同核蛋白通过与多巴胺转运蛋白 (日期1)结合从而调节其活性,在多巴胺神经传递的调节中发挥作用,也是致病性 路易和路易神经突的主要组分,其基因突变与帕金森病有关。
α-突触核蛋白主要在大脑中表达,在中枢神经系统的突触前末梢高度表达。
在除肝脏外的组织中也有少量表达。
α-突触核蛋白在细胞质、细胞膜、细胞核中均有表达。
α-同核蛋白也分泌于细胞连接、突触和多巴胺能神经元膜结合处。
人(第37840页):1-3:11-14 kDa(预测)
(O55042):1-2:12-14 kDa(预测)
(P37377):1-2:15-16 kDa(预测)3:4 kDa
α-同步核蛋白反应预测14kDa左右,但由于存在不同异构体和翻译后修饰,实际检测到的条带大小与预测值并非完全一致。
磷酸化修饰通常发生于α-同核蛋白129和125位酪氨酸,所以请选择对应抗体(α-突触核蛋白、α-突触核蛋白(磷酸S129)、α-突触核蛋白(磷酸Y125))以正确检测非修饰或修饰的α-同核蛋白
α-同核蛋白的检测,在室温下用 0.4%PFA膜30分钟,然后再用 5%牛奶封闭有助于获得理想实验结果。
HAP1、HEK293-T甜品
人、大鼠脑组织裂解液
α-同核蛋白(约51189)
SNCA(α-突触核蛋白)HEK-293T(ab255433号)
SNCA(Alpha-synuclein)HAP1
关键控制点
在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点:
样本制备
添加复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。
布拉德福德(Bradford)回报分析、劳里(Lowry)回报分析(BCA)分析测定样本总蛋白浓度。
转膜
强烈建议转膜完成后使用丽春红染色,确定转膜是否成功。
抗体孵育
建议使用新鲜抗体,避免重复利用。