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请让我了解您的协议:1) 样品是如何制备的(哪种裂解缓冲液)?样品在含有以下成分的裂解缓冲液中进行裂解:50 mM Tris-HCl pH 7.5,150 mM NaCl,0.5%NP-40,1 mM DTT,1 mM-PMSF缓冲液,含1x蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂。2) 凝胶中含有多少蛋白质?每个样品总蛋白40 ug3) 你在用什么凝胶?凝胶的8%4) 转移后你检查了凝胶和膜了吗?由于凝胶中的沉淀,这种疏水性和大的蛋白质很容易丢失。我建议在转移后用考马斯蓝检查凝胶,并向转移缓冲液中添加0.1%的十二烷基硫酸钠。添加0.1%SDS和转移缓冲液。请参阅附件中显示FASN(250kD)信号的图像,表明传输成功。我认为这不是抗体的质量。如果可能,请给我另一个抗体(ab66217或ab92472)。如果抗体有效,我很乐意提供图像。
Abcam社区
已验证客户
2012年12月21日被问及
是的,我可以免费寄给你ab66217或ab92472。你喜欢哪一种?关于协议和您的结果:我肯定建议使用RIPA缓冲区,而不是基于NP-40的缓冲区。RIPA含有SDS,SDS更强,更适合膜蛋白。FASN不是一种膜蛋白,也没有糖基化位点,因此检测这种蛋白比检测疏水性糖基化大分子量蛋白ABCA1更容易。这将是我的建议。
回复于 2012年12月21日