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我刚订购并使用了ABCA1抗体(批号GR91950-1),但它不起作用。请在附件中找到三张图片,第一张是ABCA1结果抗体。它只显示非特定波段。用肌动蛋白和FASN重新表达的膜显示了这些蛋白的强信号。我使用的细胞系是:C4-2,LNCaP,DU145 PC3人前列腺癌细胞。在文献中,使用贵公司的抗体,其中一些细胞系已显示ABCA1阳性。RT时用3%BSA TBST堵塞膜1hABCA1 1:1000 4C过夜(抗体是在收到交货后新鲜制备的)。第二抗体来自其他公司1:2000 1 h ar RT(第二抗体对肌动蛋白和FASN有效)。其他公司的ECL我要求退款或更换有效抗体。此PO订购的另一种抗体(Ab13847,capsapse-3)也不起作用,如果需要,将单独提交结果图片。
Abcam社区
已验证客户
2012年12月20日被问及
很遗憾,我听说抗体没有按预期发挥作用。由于该蛋白是一种具有15个跨膜结构域和多个糖基化位点的非常疏水的蛋白质,因此它是一种很难处理的蛋白质。请让我了解您的协议:1) 样品是如何制备的(哪种裂解缓冲液)?2) 凝胶中含有多少蛋白质?3) 你在用什么凝胶?4) 转移后你检查了凝胶和膜了吗?由于凝胶中的沉淀,这种疏水性和大的蛋白质很容易丢失。我建议在转移后用考马斯蓝检查凝胶,并向转移缓冲液中添加0.1%的十二烷基硫酸钠。相比之下,肌动蛋白是一种更容易检测的蛋白质。我可以免费发送另一个抗体,但如果样品制备和转移不理想,可能会再次出现类似的无带问题。请让我知道以上信息。如果你能尝试一两条建议,那会很有帮助。至于ab13847,我还需要了解有关遇到的问题和使用的协议/条件的更多信息。
回复于 2012年12月20日