概述
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产品名称 -
亲代细胞系 SHSY-5Y型 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:外显子2中34 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 1 -
常规说明 建议控制: 人野生型SHSY-5Y细胞系( 约275475 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: EMEM和F-12K的1:1混合物+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致丧失生存能力。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为1-2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 这些细胞生长为漂浮细胞和粘附细胞的混合物。 去除含有浮动细胞的培养基,通过离心回收细胞,使用标准方法分离细胞,与浮动细胞结合并转移到新的培养瓶中。 引导播种密度为1-2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 细胞应以有利于细胞间通讯的密度播种以增殖。 如果细胞播种太稀疏,生长速度会降低,细胞死亡率也会很高。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 骨髓 -
单元格类型 神经母细胞瘤 -
疾病 神经母细胞瘤 -
性别 女性 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 t-SNARE参与神经递质释放的分子调控。 可能在特定神经元系统的突触功能中发挥重要作用。 与参与囊泡对接和膜融合的蛋白质相关。 通过与CENPF的相互作用调节质膜再循环。 -
组织特异性 新皮质、海马、梨状皮质、丘脑前核、脑桥核和小脑颗粒细胞的神经元。 -
序列相似性 属于SNAP-25系列。 包含2个t-SNARE线圈同源域。 -
翻译后修饰 棕榈酰化。 Cys-85似乎是主要位点,并且棕榈酰化是膜结合所必需的。 -
细胞定位 细胞质>核周区。 细胞膜。 细胞连接>突触>突触体。 膜结合需要棕榈酰化。 在细胞质中表达,集中在核周区域。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗SNAP25抗体[EPR3275]( 澳大利亚银行109105 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型SH-SY5Y细胞裂解物 车道2: SNAP25敲除SH-SY5Y细胞裂解物 3号车道: Neuro-2a细胞裂解物 车道4: K562细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 23千帕 观察到的频带大小: 27千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:稀释1/1000的抗SNAP25抗体[EPR3275]染色,以绿色显示; 装载控制 约7291 (小鼠抗α-管蛋白[DM1A])染色,稀释1/20000,以红色显示。在Western blot中, 澳大利亚银行109105 显示与SNAP25特异性结合。 在野生型SH-SY5Y细胞裂解液中在27kDa处观察到一条带,在SNAP25敲除细胞系ab280041(敲除细胞裂解液 ab280100型 ). 为了生成此图像,分析了野生型和SNAP25敲除SH-SY5Y细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
所有车道: 抗SNAP25抗体[EP3274]( 约108990 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型SH-SY5Y细胞裂解物 车道2: SNAP25敲除SH-SY5Y细胞裂解物 3号车道: Neuro-2a细胞裂解物 车道4: K562细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 23千帕 观察到的频带大小: 27千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 蛋白质印迹的假彩色图像:1/1000稀释的抗-SNAP25抗体[EP3274]染色,显示为绿色; 装载控制 约7291 (小鼠抗α-管蛋白[DM1A])染色,稀释1/20000,以红色显示。在Western blot中, 约108990 显示与SNAP25特异性结合。 在野生型SH-SY5Y细胞裂解液中在27kDa处观察到一条带,在SNAP25敲除细胞系ab280041(敲除细胞裂解液 ab280100型 ). 为了生成此图像,分析了野生型和SNAP25敲除SH-SY5Y细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
外显子2缺失34 bp的SH-SY5Y细胞中的人SNAP25 KO
数据表及文件
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