(美国)
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:外显子2中5 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255928 )。 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致丧失生存能力。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11,12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶
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功能 肝细胞生长因子和分散因子受体。 具有酪氨酸蛋白激酶活性。 细胞增殖、散射、形态发生和存活的功能。 -
疾病相关 注=与TPR基因重排后MET的激活产生致癌蛋白。 注:MET缺陷可能与胃癌有关。 MET缺陷是肝细胞癌(HCC)的一个原因[MIM:114550]。 MET缺陷是肾乳头状细胞癌(RCCP)的一个原因[MIM:650744]。 它是肾细胞癌的一个亚型,倾向于显示由无数不规则的指状结缔组织突起形成的管状-乳头状结构。 肾细胞癌是一种来源于近端肾小管上皮细胞的散发性或遗传性异质性癌。 它分为普通肾细胞癌(透明细胞癌、非毛细血管癌)、乳头状肾细胞癌、嫌色肾细胞癌,集合管癌伴肾髓质癌和未分类肾细胞癌。 注:MET启动子区的一个常见等位基因显示,在一些家庭中,与孤独症易感性存在遗传关联。 功能分析表明MET启动子活性降低,特异性转录因子复合物的结合发生改变。 注:MET激活突变可能参与高度恶性、转移综合征(称为原发性未知癌症(CUP)或原发性隐匿性恶性肿瘤)的发展。 全身肿瘤扩散通常是癌症进展的晚期事件。 然而,在某些情况下,远处扩散发生在很早的阶段,因此转移在原发病灶之前就达到了临床相关性。 有时,尽管恶性肿瘤的诊断取得了进展,但仍无法确定原发病灶。 -
序列相似性 属于蛋白激酶超家族。 酪氨酸蛋白激酶家族。 包含3个IPT/TIG域。 包含1个蛋白激酶结构域。 包含1个Sema域。 -
结构域 激酶结构域参与SPSB1结合。 -
翻译后修饰 PTPRJ在Tyr-1349和Tyr-1365处脱磷。 -
细胞定位 膜。 -
UniProt提供的信息
美国
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图片
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所有车道: 抗-Met(c-Met)抗体[EP1454Y]-N端( 约51067 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: MET敲除A549细胞裂解物 3号车道: 野生型HeLa 约255929 细胞裂解产物 车道4: MET(MET(c-MET))淘汰赛HeLa 约256991 细胞裂解产物 车道5: HT-29细胞裂解物 车道6: T-47D细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 使用ECL技术开发。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 155千帕 观察到的频带大小: 40-50千道尔顿 为什么实际的频带大小与预测的不同? 蛋白质印迹:抗MET抗体[EP11454Y]( 约51067 )以1/1000稀释度染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度加载控制染色,以洋红色显示。 在Western blot中, 约51067 被证明与MET特异结合。 在野生型A549细胞裂解液中观察到40-50 kDa的条带,在MET敲除细胞系中未观察到该大小的信号。 为了生成此图像,分析了野生型和MET敲除A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在TBS-0.1%吐温®20(TBS-T)中的3%牛奶中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 二级抗体为羊抗兔IgG H&L 800CW和羊抗鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/20000。 -
所有车道: 抗-Met(c-Met)抗体[EPR19554-110]( 约254252 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: MET敲除A549细胞裂解物 3号车道: 野生型HeLa 约255929 细胞裂解产物 车道4: MET(MET(c-MET))淘汰赛HeLa 约256991 细胞裂解产物 车道5: HT-29细胞裂解物 车道6: T-47D细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 使用ECL技术开发。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 155千帕 观察到的频带大小: 80-140千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 蛋白质印迹:抗MET抗体[EP19554-110]( 约254252 )以1/1000稀释度染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度加载控制染色,以洋红色显示。 在Western blot中, 约254252 被证明与MET特异结合。 在野生型A549细胞裂解液中在80-140 kDa处观察到一条带,在MET敲除细胞系中未观察到该大小的信号。 为了生成此图像,分析了野生型和MET敲除A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在TBS-0.1%吐温®20(TBS-T)中的3%牛奶中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 二级抗体为羊抗兔IgG H&L 800CW和羊抗鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/20000。 全长MET蛋白是糖基化的,具有多个裂解位点,因此裂解产物可以在~40-140 kDa之间检测到 -
所有车道: 抗-Met(c-Met)抗体[EP1454Y]-N端( 约51067 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: MET敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 155千帕 观察到的频带大小: 50千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗-Met(c-Met)抗体[EP1454Y]-N-末端染色,稀释度为1/1000,以绿色显示; 兔抗GAPDH抗体[EPR16891]( 约181602 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 第51067页 被证明与c-Met的α链特异结合。 在野生型HeLa细胞裂解液中在50kDa处观察到一条带,在MET敲除细胞系ab265961(敲除细胞裂解液 约256991 )。 为了生成该图像,分析了野生型和MET敲除的HeLa细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是HRP结合的山羊抗兔(H+L)和山羊抗小鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
纯合子:第2外显子5 bp缺失。 -
MET敲除HeLa细胞的代表性图像,低汇合和高汇合示例(分别位于左上和右上)和野生型HeLa电池,低汇流和高汇流示例(分别于左下和右下)显示了典型的粘附上皮样形态。 使用EVOS XL Core显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表及文件
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SDS下载 -
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