概述
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产品名称 人 COL6A1敲除HEK-293T细胞系 -
亲代细胞系 HEK293吨 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,纯合子:外显子2中1 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全等级 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HEK293T细胞系( ab255593号 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞沉淀重新悬浮在5mL预热的培养基中,并使用血细胞仪或替代细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肾 -
单元格类型 上皮的 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:8、9 D13S317:11、12、14 D7S820:11 第16天第539页:第9页,第13页 vWA:15、20 TH01:7、9.3 TPOX:11、12 CSF1PO:12个 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 胶原蛋白VI是一种细胞结合蛋白。 -
疾病相关 COL6A1缺陷是Bethlem肌病(BM)的原因[MIM:158810]。 BM是一种罕见的常染色体显性近端肌病,其特征是儿童早期发病(5岁时完全外显),关节挛缩最常见于肘部和脚踝。 COL6A1缺陷是Ullrich先天性肌营养不良(UCMD)的原因[MIM:254090]; 也称为Ullrich硬化性肌营养不良。 UCMD是一种常染色体隐性遗传性先天性肌病,其特征是肌无力和多关节挛缩,通常在出生或婴儿早期发现。 临床过程比Bethlem肌病更严重。 -
序列相似性 属于VI型胶原蛋白家族。 包含3个VWFA域。 -
翻译后修饰 三肽重复单元(G-X-Y)第三位的脯氨酸在部分或全部链中被羟基化。 -
细胞定位 分泌>细胞外间隙>细胞外基质。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗VI型胶原抗体[EPR17072]( 约182744 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HEK293T细胞裂解物 车道2: COL6A1敲除HEK293T细胞裂解物 3号车道: 人骨骼肌组织裂解物 每条泳道20µg的裂解物/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释度为1/10000 预测的带宽大小: 109千帕 观察到的波段大小: 136千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-3车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约182744 在136 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在36 kDa时观察到。 约182744 在野生型HEK293T细胞中,六型胶原抗体[EPR17072]与六型胶原特异性反应。 当敲除细胞系ab265060(敲除细胞裂解物 约256879 )已使用。 野生型和VI型胶原抗体敲除样品进行SDS-PAGE。 约182744 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在1000倍和20000倍稀释液中培养2.5小时。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:第2外显子1 bp缺失。
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载