概述
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产品名称 人 MAPK1(ERK2)敲除HeLa细胞系 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9,外显子2中1 bp缺失和外显子2中插入选择盒实现敲除 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、桑格测序、蛋白质印迹(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255448 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致丧失生存能力。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
可行性 ~80% -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 通过磷酸化许多转录因子,如ELK1,参与分化细胞减数分裂、有丝分裂和有丝分裂后功能的启动和调节。 磷酸酯类EIF4EBP1; 启动翻译所必需的。 磷酸化微管相关蛋白2(MAP2)。 磷酸化物SPZ1(根据相似性)。 磷酸化热休克因子蛋白4(HSF4)和ARHGEF2。 作为转录抑制因子。 绑定到[GC]AAA[GC]一致序列。 抑制干扰素γ诱导基因的表达。 似乎与CCL5、DMP1、IFIH1、IFITM1、IRF7、IRF9、LAMP3、OAS1、OAS2、OAS3和STAT1的启动子结合。 转录活性独立于激酶活性。 -
序列相似性 属于蛋白激酶超家族。 CMGC Ser/Thr蛋白激酶家族。 MAP激酶亚家族。 包含1个蛋白激酶结构域。 -
结构域 TXY基序包含苏氨酸和酪氨酸残基,其磷酸化激活MAP激酶。 -
翻译后修饰 在Thr-185和Tyr-187上双重磷酸化,激活酶。 PTPRJ在Tyr-187进行脱磷。 -
细胞定位 核心。 -
UniProt提供的信息
相关产品
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗-ERK2抗体[E460]( 约32081 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa裂解物 车道2: MAPK1敲除HeLa裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 预测的带宽大小: 41千Da 观察到的频带大小: 41千Da 约32081 Western blot显示与野生型HeLa细胞中的MAPK1反应,在MAPK1敲除细胞系ab265052中观察到信号丢失。 对野生型HeLa和MAPK1敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 将膜在TBST中的5%牛奶中封闭1小时,然后与 约32081 以1/1000的稀释度在4°C下过夜。 在成像之前,用0.2µg/mL的二级抗体培养斑点。 该数据由YCharOS Inc.提供,该公司是一家开放科学公司,其任务是对所有人类蛋白质的商用抗体试剂进行表征。 Abcam和YCharOS正在合作,通过使生命科学界能够更好地评估商用抗体,帮助解决再现性危机。 -
约32081 野生型HeLa细胞中ERK2染色(顶部面板)和ERK2敲除HeLa电池(底部面板)。 将细胞用100%甲醇固定(5分钟),用0.1%PBS吐温透化5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1小时。 然后在4°C下将细胞培养过夜 约32081 0.2µg/ml和 约7291 ,小鼠单克隆[DM1A]到α-管蛋白-负载控制。 然后将细胞与 约150081 、山羊抗兔IgG-H&L(Alexa Fluor)多克隆二级抗体 ® 488),以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 ab150120型 ,山羊抗小鼠IgG-H&L的多克隆第二抗体(Alexa Fluor ® 594),以1/1000稀释度预吸附(以伪红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 -
所有车道: 抗-ERK1+ERK2抗体[EPR17526]( 约184699 )稀释度为1/10000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: MAPK1敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 41千Da 观察到的频带大小: 44千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约184699 在44 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在37kDa下观察到。 约184699 抗ERK1+ERK2抗体[EPR17526]在野生型HeLa细胞中与ERK2特异性反应。 当敲除细胞系ab265052(敲除细胞裂解物 约257525 )已使用。 对野生型和ERK2基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 公元184699年 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C下以1比10000和1比20000的稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗ERK2抗体[E460]( 约32081 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: MAPK1敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 41千Da 观察到的频带大小: 41千Da 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约32081 在41 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在37kDa下观察到。 约32081 在野生型HeLa细胞中,抗ERK2抗体[E460]与ERK2特异性反应。 当敲除细胞系ab265052(敲除细胞裂解物 约257525 )已使用。 对野生型和ERK2基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约32081 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C下以1比1000稀释度和1比20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因1:第2外显子1 bp缺失。 -
等位基因2:选择盒插入外显子2。
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载