概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,纯合子:外显子1中1 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255448 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 冷冻保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬浮液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)洗涤小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 第16天第539页:第9页,第10页 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 转录调节组蛋白乙酰化(HAT)复合物SAGA的组蛋白去平衡成分。 催化组蛋白H2A和H2B的氘化,从而起到辅活化剂的作用。 由MYC等激活剂招募到特定的基因启动子,在那里它是转录所必需的。 需要核受体介导的转录激活和细胞周期进展。 -
组织特异性 在包括心脏和骨骼肌在内的各种组织中中度表达,在肺和肝中弱表达。 -
序列相似性 属于肽酶C19家族。 UBP8亚家族。 包含1个UBP型锌指。 -
细胞定位 核心。 -
UniProt提供的信息
应用
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图片
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所有车道: 抗-USP22抗体[EPR18945]( 约195289 )稀释1/2000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: USP22敲除HeLa细胞裂解物 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 60千Da 观察到的频带大小: 59千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:1/2000稀释的抗-USP22抗体[EPR18945]染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约195289 显示与USP22特异结合。 在野生型HeLa细胞裂解液中在59kDa处观察到一条带,在usp22敲除细胞系ab264888(敲除细胞裂解液 约257789 ). 为了生成此图像,分析了野生型和usp22敲除HeLa细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在荧光蛋白印迹(基于TBS)封闭溶液中封闭膜。 将印迹在TBS-T中洗涤四次,在室温下与第二抗体孵育1小时,再次洗涤四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
所有车道: 抗-USP22抗体[EPR4352(2)]( 澳大利亚银行109435 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: USP22敲除HeLa细胞裂解物 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 60千Da 观察到的频带大小: 59千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗-USP22抗体[EPR4352(2)]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 澳大利亚银行109435 显示与USP22特异结合。 在野生型HeLa细胞裂解液中在59kDa处观察到一条带,在usp22敲除细胞系ab264888(敲除细胞裂解液 约257789 ). 为了生成此图像,分析了野生型和usp22敲除HeLa细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在荧光蛋白印迹(基于TBS)封闭溶液中封闭膜。 将印迹在TBS-T中洗涤四次,在室温下与第二抗体孵育1小时,再次洗涤四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
纯合子:外显子1缺失1 bp。
数据表及文件
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