概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:外显子4中1 bp插入 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255448 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致丧失生存能力。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11,12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 复制后DNA错配修复系统(MMR)的组成部分。 与MSH2异二聚体形成MutSα,与DNA错配结合,从而启动DNA修复。 当结合时,MutS-alpha弯曲DNA螺旋并屏蔽大约20个碱基对,并识别DNA中的单碱基错配和二核苷酸插入-删除环(IDL)。 错配结合后,与MutLα异二聚体形成三元复合物,该复合物被认为负责指导下游MMR事件,包括链识别、切除和再合成。 ATP结合和水解在失配修复功能中起着关键作用。 与MutS-alpha相关的ATP酶活性调节与分子开关类似的结合:不匹配的DNA激发ADP-->ATP交换,导致可识别的构象转换,将MutS-alpha转换为滑动钳,能够沿DNA主干水解诱导依赖性扩散。 这种转换对于不匹配修复至关重要。 MutSα也可能在DNA同源重组修复中发挥作用。 -
疾病相关 MSH6缺陷是遗传性非息肉病5型结直肠癌(HNPCC5)的病因[MIM:600678]。 多个基因位点的突变可能单独或联合参与HNPCC表型的产生(也称为Lynch综合征)。 大多数临床上公认的HNPCC家族都有MLH1或MSH2基因突变。 HNPCC是一种常染色体显性遗传疾病,与癌症易感性显著增加相关。 其特点是易患早发性结直肠癌(CRC)和胃肠道、泌尿系和女性生殖道的结肠外癌。 据报道,HNPCC是西方世界最常见的遗传性结直肠癌。 HNPCC中的癌起源于称为腺瘤的良性肿瘤性息肉。 临床上,HNPCC通常分为两个亚组。 I型:结肠直肠癌的遗传易感性,发病年龄小,近端结肠癌。 II型:患者患某些组织癌症的风险增加,例如子宫、卵巢、乳腺、胃、小肠、皮肤和喉部,以及结肠。 经典型HNPCC的诊断基于阿姆斯特丹标准:3个或更多受结直肠癌影响的亲属,其中一个是其他两个的一级亲属; 2代或2代以上受影响; 一个或多个结直肠癌在50岁之前出现; 排除遗传性息肉病综合征。 MSH6突变似乎与非典型HNPCC有关,特别是与子宫内膜癌或非典型子宫内膜增生的发生有关,子宫内膜增生是子宫内膜癌的假定前驱。 MSH6缺陷也存在于不符合阿姆斯特丹HNPCC标准的家族性结直肠癌(可疑或不完整的HNPCC)中。 MSH6缺陷是子宫内膜癌(ENDMC)易感性的一个原因[MIM:608089]。 -
序列相似性 属于DNA错配修复mutS家族。 包含1个PWWP域。 -
翻译后修饰 N端被阻塞。 DNA损伤后发生磷酸化,可能是ATM或ATR引起的。 PRKCZ磷酸化,可通过泛素蛋白酶体途径阻止MutSα降解。 -
细胞定位 核心。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗MSH6抗体[44]( 约14204 )稀释1/500 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: MSH6敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 153千帕 观察到的频带大小: 160千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约14204 在160 kDa时观察到。 红色-抗α-管蛋白抗体[EP1332Y]-微管标记( 约52866 )在50 kDa时观察到。 约14204 western blot显示与野生型HeLa细胞中的MSH6反应。 敲除细胞系ab255410(敲除细胞裂解物 约263763 )已使用。 对野生型HeLa和MSH6敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约14204 和抗α-微管蛋白抗体[EP1332Y]-微管标记( 约52866 )在4°C下过夜,分别以1/500和1/20000稀释。 用山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附( ab216772型 )和山羊抗狂犬病IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( ab216777号 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗-MSH6抗体[EPR3945]( 约92471 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: MSH6敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 153千帕 观察到的频带大小: 160千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约92471 在160 kDa时观察到。 124 kDa时观察到的红色抗V蛋白抗体[VIN-54]。 约92471 western blot显示与野生型HeLa细胞中的MSH6反应。 敲除细胞系ab255410(敲除细胞裂解物 约263763 )已使用。 对野生型HeLa和MSH6敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约92471 和抗-Vinculin抗体[VIN-54]在4°C下过夜,分别以1/1000和1/20000稀释。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:第4外显子插入1 bp。
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载