RIPOR2在肌源性分化和细胞丝状伪足形成中发挥作用(Yoon等人,2007)。
通过对从尺寸分馏的大脑cDNA文库中获得的克隆进行测序,Nagase等人(1997年)克隆了C6ORF32,他们将其命名为KIAA0386。推导出的蛋白质含有1068个氨基酸。RT-PCR检测胸腺中度表达,胎盘和肺弱表达。
Dakour等人(1997年)通过对未分化的足月细胞滋养层细胞和分化的细胞滋养层之间进行消减杂交,以确定分化过程中表达增加的基因,克隆了C6ORF32,他们称之为PL48。536氨基酸蛋白质的计算分子量为59.8 kD,包含一个跨膜区、2个糖胺聚糖附着位点、4个N-连接的糖基化位点和许多潜在的磷酸化位点。对自发分化的人类细胞滋养层细胞进行Northern blot分析,在2小时时检测到2.8-、3.5-和4.8-kb转录物,随着分化时间的推移,其表达增加。PLA48在未分化的髓系白血病细胞中不表达,但在DMSO诱导粒细胞系分化后24至72小时表达增加。Dakour等人(1997年)得出结论,PL48在自发性细胞滋养层细胞分化过程中作为早期反应基因发挥作用,但在DMSO诱导的粒细胞分化途径中稍后被诱导。
Yoon等人(2007年)通过对胎儿成肌细胞分化期间表达增加的基因进行微阵列分析,克隆C6ORF32,然后对分化后5天采集的人类初级胎儿肌肉细胞进行RT-PCR。C6ORF32可以编码12种假定的交替拼接形式。他们鉴定了两种亚型,称为Iso1和Iso2。Iso1含有1018个氨基酸,Iso2含有591个氨基酸,与Dakour等人(1997年)确定的PL48物种相比,其中包括55个氨基酸的N末端延伸。免疫荧光研究将C6ORF32定位于原始人类胎儿骨骼肌细胞的细胞膜、细胞骨架和长细胞丝状体,以及有丝分裂细胞的细胞质。在诱导分化和细胞融合时,C6ORF32在单核细胞中表达,而不是在肌管中表达,并且在人成肌细胞分化过程中在mRNA和蛋白质水平上表达上调。
在小鼠组织中,Diaz-Horta等人(2014年)发现Fam65b在胚胎大脑中的表达最高,其次是内耳和出生后内耳。免疫荧光研究表明Fam65b存在于内外毛细胞的静纤毛中,并靶向顶端质膜室。该蛋白在囊泡运输区丰富,并显示出囊泡样结构,表明其位于细胞内膜运输区室中。
Yoon等人(2007)发现,在小鼠成肌细胞分化过程中,RNAi敲低小鼠C6orf32导致细胞融合减少,肌管形成严重减少,其特征是肌生成素(MYOG;159980)和肌球蛋白重链(见160730)表达减少,而MyoD1(159970)表达不变。作者认为,C6orf32可能在早期肌源性分化中发挥作用,肌肉细胞融合减少可能是C6orf32缺失导致的分化受损或减慢的次要影响。小鼠C6orf32 Iso2或Iso1在小鼠成肌细胞和人类胚胎肾细胞中的过度表达可诱导长丝状伪足的形成。突变结构的转染表明,C6ORF32的N端氨基酸55至113可能介导丝状伪足的形成。
Zhao等人(2016年)利用生物化学和随机光学重建显微镜显示,Fam65b寡聚体在小鼠毛细胞静纤毛基底锥度附近形成一个圆周环。锥体蛋白(TPRN;613354)是锥体附近的一种蛋白质,它形成了一个致密的核状结构,在缺乏Fam65b的情况下被破坏。Fam65b基因敲除小鼠的立体纤毛表现出机械传导中断,随后恶化。酵母2杂交筛选显示Rhoc(165380)结合Fam65b。Rhoc与Fam65b在静纤毛中共定位,Fam65b功能需要Rhoc。
通过辐射杂交分析,Nagase等人(1997年)将C6ORF32基因定位到第6染色体。
Gross(2022)根据RIPOR2序列(GenBank BC001232)与基因组序列(GRCh38)的比对,将RIPOR2基因映射到染色体6p22.3。
常染色体隐性聋104
在患有常染色体隐性聋-104(DFNB104;616515)的土耳其近亲家族的6名受累成员中,Diaz-Horta等人(2014)在FAM65B基因(611410.0001)中发现了纯合剪接位点突变。通过全基因组测序发现并经Sanger测序证实的突变与该家族中的疾病分离。体外功能表达研究表明,突变蛋白在细胞质包涵体中异常积累,没有到达细胞膜。在248个常染色体隐性遗传性耳聋家庭或437例单纯性耳聋患者中未发现FAM65B基因突变。Diaz-Horta等人(2014年)得出结论,FAM65B是毛细胞静纤毛的质膜相关蛋白,对听力至关重要。
常染色体显性聋21
Kunst等人(2000年)报告的患有常染色体显性聋-21(DFNA21;607017)的一个多代荷兰大家族(W97-056)的20名受累成员中,de Bruijn等人(2021年)在RIPOR2基因(611410.0002)中发现了一个杂合的12 bp帧内缺失(c.1696_1707del)。通过外显子组测序确定的突变与家族中的疾病分离,尽管有证据表明外显率不完整或与年龄相关。根据这些发现,对大量遗传性耳聋患者队列的现有外显子数据集进行分析,确定了另外11名携带这种杂合子缺失的荷兰籍先证者。它在6个家庭中与疾病分离,有证据表明外显不完全。单体型分析表明存在创始人效应。野生型小鼠耳蜗外毛细胞中同源Ripor2突变的表达在短期内没有明显影响静纤毛结构,但突变蛋白没有正常定位于静纤毛基底。在Ripor2-null小鼠中表达突变无法修复外毛细胞的形态学缺陷,这表明小的缺失会破坏蛋白质功能。由于单倍体不足是一种不太可能的机制,de Bruijn等人(2021年)假设了一种毒性的功能获得效应。该缺失在gnomAD数据库中出现的频率较低(0.0071-0.0077%)。在荷兰东南部听力未知的人中,0.0392%(22952人中的18人)发现了杂合子缺失,作者得出结论,RIPOR2基因突变可能是某些北欧人群听力损失的常见原因。
Diaz-Horta等人(2014年)发现,fam65b在斑马鱼的耳泡中表达。斑马鱼胚胎中fam65b基因的吗啉敲除导致囊状毛细胞和神经肥大的数量显著减少,并导致听力损失。