CEP2是一种中心体蛋白,似乎在细胞周期间期中心体内聚中发挥作用(Mayor等人,2002)。
使用与中心体反应的自身免疫血清筛选HeLa细胞cDNA表达库,Mack等人(1998年)获得了编码CEP2的部分cDNA,他们称之为CEP250。作者确定,大多数推导出的1843氨基酸部分蛋白采用卷曲-线圈结构。
Fry等人(1998年)使用NEK2(604043)作为诱饵,在B细胞cDNA文库的酵母2杂交筛选中,然后筛选胎盘cDNA文库,克隆了CEP2,他们称之为CNAP1。推导出的2442氨基酸蛋白质的计算分子量为281 kD。人类细胞系的Western blot分析检测到表观分子量为250 kD的CNAP1。这些抗体也能识别T淋巴细胞系中约190 kD的蛋白质。Fry等人(1998年)确定,CNAP1可能会形成扩展的卷曲-线圈结构域,中心附近可能有扭结或铰链区域。核糖核酸酶保护实验表明,小鼠Cep2在所分析的所有组织中均呈低水平表达。免疫电镜将CEP2定位于母子中心粒的近端。CEP2与NEK2共存。中心体染色强度在间期没有变化,但在前期开始时减弱,伴随着中心体分离。
Mayor等人(2000)发现,当亲代中心粒在有丝分裂开始时分离时,CEP2从中心体解离,但在细胞分裂结束时在中心体重新积累。他们还确定CEP2的190-kD形式缺少N末端。
通过在小鼠视网膜冷冻切片中进行免疫染色,de Castro-Miro等人(2016)检测到内源性CEP250主要位于外光感受器段,支持其在光感受者轴丝中的定位。
Kang等人(2023年)评估了小鼠耳蜗中Cep250的转录水平,发现在出生后第1天(P1),毛细胞中的Cep250转录水平高于支持细胞。然而,Cep250在成年期的支柱细胞和支持细胞中也有表达。在螺旋神经节神经元中,从胚胎第15.5天(E15.5)到P14,Cep250持续表达。野生型小鼠耳蜗的免疫组织化学显示Cep250在内毛细胞、外毛细胞、柱细胞和支持细胞中表达。
通过辐射杂交分析,Fry等人(1998年)将CEP2基因定位到20号染色体的着丝粒区域,约20q11.2。
Fry等人(1998年)通过在干扰微管网络的条件下对细胞进行免疫染色,确定CEP2独立于微管与中心体相关。CEP2与NEK2在中心粒共定位,CEP2的C末端片段在体外和人骨肉瘤细胞系中被NEK2磷酸化。
Mayor等人(2000年)发现,无论细胞周期处于什么阶段,抗体介导的对CEP2功能的干扰都会导致中心体分裂。分裂发生在亲本中心粒之间,不依赖于完整微管或微丝的存在,也不阻止微管在中心粒成核。N端、中间或C端CEP2片段的过度表达,而非全长蛋白的过度表达导致中心体分裂,可能是由于中心体成分在细胞质中隔离所致。Mayor等人(2000年)得出结论,CEP2并没有跨越两个亲本中心粒之间的距离,但它是包含额外蛋白质的内聚结构的一部分。
Mayor等人(2002年)发现,CEP2在人骨肉瘤细胞系中的过度表达导致大中心体相关结构的形成。然而,CEP2过度表达并不干扰中心体分离或细胞分裂,这表明细胞周期调节活性将CEP2从中心体中分离出来。活性NEK2的共表达大大减少了大型CEP2结构的形成。Mayor等人(2002年)得出结论,CEP2的定位和功能受NEK2调控的细胞周期磷酸化的影响。
Bahe等人(2005年)发现,人类rootletin(CROCC;615776)在中心粒近端结合CNAP1,并在2个中心粒之间形成桥梁。通过小干扰RNA消耗根素导致中心体分裂,但不会改变CNAP1与中心粒的关联。相反,CNAP1的缺失使生根素与中心体的联系松动。
Yang等人(2006)独立地发现,小鼠根蛋白与Cnap1结合,并在2个中心粒之间形成桥。rootletin和Cnap1的相互作用似乎很复杂,可能包括头对头和头对尾的相互作用,并且涉及rootletin上的几个位点。与定位于中心粒近端的Cnap1不同,根素免疫反应在HEK293细胞的2个中心粒之间和周围延伸。Cnap1显性-阴性突变体的表达扰乱了中心体生根素的分布,并分离了间期细胞中的一对中心粒。根素和Cnap1在有丝分裂开始时从中心体分离,在间期又重新融合。
Graser等人(2007年)使用小干扰RNA筛选发现,CNAP1、rootletin、pericentrin(PCNT;605925)、CEP68(616889)或CEP215(CDK5RAP2;608201)的缺失降低了中心体内聚并导致U2OS、A549和RPE1细胞中心体分裂。CNAP1和rootletin的耗竭产生了最严重的表型。CEP68的耗竭导致中心粒中的生根素丢失,而生根素或CNAP1的耗竭则导致中心粒的CEP68丢失。Graser等人(2007年)得出结论,CEP68、CNAP1和根素在中心体之间形成了一个动态连接体结构,在有丝分裂开始时必须将其拆除以分离中心体。
Khateb等人(2014年)在一个伊朗犹太血统的大近亲家族(MOL0028)的3个同胞中发现了CEP250基因无义突变的纯合子(R1155X;609689.001),这些同胞患有早发性严重听力损失和相对轻微的视网膜变性(CRDHL2;618358)。在该家族另外3名患有严重视网膜色素变性(RP)听力损失的同胞中,作者确定了CEP250 R1155X突变的纯合子以及已知RP基因C2ORF71无义突变的纯合性(PCARE,613425;见RP54,613428);视网膜表型较轻的3个同胞是C2ORF71突变的杂合子。作者得出结论,双纯合子视网膜严重受累表明,由编码睫状体蛋白的2个基因无义突变引起的加性效应。
在来自阿根廷、沙特阿拉伯和西班牙的33个被诊断为“遗传性视网膜营养不良”的家族的队列中,de Castro-Miro等人(2016年)确定了一个患病的兄弟姐妹(A3家族),他们在CEP250基因SMC结构域内的保守残基处纯合子A609V替换,与疾病分离。这些患者被列为常染色体隐性遗传RP患者;没有进一步的临床信息报道。作者注意到,在该家族中,一个已知的常染色体隐性遗传RP相关突变也分离出杂合性,即CRB1基因中的C948Y替代(604210.0013),他们认为这可能导致表型的严重性。对用A609V CEP250突变体转染的人ARPE19细胞的分析显示,初级纤毛持续延长,平均比野生型细胞长三分之一。
Kubota等人(2018)在2名患有轻度锥体营养不良和感音神经性耳聋的日本姐妹中,确定了CEP250基因R121X(609689.002)和R188X(6099689.003)无义突变的复合杂合性,这些基因与家族疾病分离。作者表示,在先证者中未发现C2ORF71基因的致病性变体。
在58名诊断为Usher综合征(参见276900)的西班牙患者的队列中,Fuster-Garcia等人(2018年)确定了一名患有听力损失和轻度视网膜变性的女性(RP1973),该女性患有涉及黄斑的复合杂合CEP250基因无义突变:K1113X(609689.004)和R1336X(6099689.005)。作者指出,先证者也是USH2A基因错义突变的杂合子(608400;R1521C,rs773526991)。
在一项对患有视网膜疾病并伴有或不伴有已知感觉神经性听力损失的患者的回顾性研究中,Igelman等人(2021)确定了2名姐妹和一名不相关的男性患有视杆营养不良、听力损失和CEP250基因双等位基因突变:该男性为1-p缺失的复合杂合子(609689.0006)和一个2 bp的重复序列(609689.007),两姐妹为无义突变纯合子(Q1987X;609689.00)。未报告突变的家族分离。
挂起确认的关联
---耳聋,常染色体隐性遗传
通过对日本非综合征性耳聋患者队列的全基因组测序,Kang等人(2023年)确定了3名中度感音神经性耳聋姐妹,她们是CEP250基因无义突变纯合子(c.3511C-T,Q1171X)。姐妹俩都没有视网膜功能障碍的症状或体征;然而,作者指出,视网膜退化可能会在晚年开始,需要长期随访。他们父母的突变情况没有报道。转染NIH3T3细胞的分析表明,无义变异体被翻译成截短的蛋白,无法定位于中心体;然而,睫状体长度不受影响,也没有证据表明存在显性负效应。
Abu-Diab等人(2023年)产生了CEP250敲除(KO)小鼠,并观察到视网膜变性和听力损失发病较晚。纯合子KO小鼠在6个月龄时的视网膜电图(ERG)与野生型小鼠相比没有显著差异,但在12个月龄和20个月龄的测试中,与野生型鼠相比,a波和b波振幅分别减少了42%和71%。同样,KO小鼠的光适应全视野ERG在12个月龄时仅表现出11%的反应减少,而在20个月龄的时候,明显下降了82%。听觉脑干反应测试显示,KO小鼠在4个月龄至20个月龄期间的听力阈值显著增加,与年龄匹配的野生型小鼠相比,KO鼠的听力恶化更严重。KO视网膜的组织学分析显示,与野生型视网膜或6个月大的KO视网膜相比,外核层在12个月和20个月大时变薄。KO视网膜免疫染色显示Cep78弥漫染色,表明纤毛紊乱,未检测到Cep250表达。
Kang等人(2023)测量了Cep250 KO小鼠的ABR阈值。7周龄时,纯合KO、杂合KO或野生型小鼠之间没有差异。9周龄时,纯合子KO小鼠与杂合子或野生型小鼠相比,听觉阈值显著增加,17周龄时听力损失更为明显。整体免疫染色显示,纯合子KO小鼠的毛细胞变性比杂合子严重,外毛细胞变性在基底弯的高频区最为突出。作者将Cep250 KO小鼠高频进行性听力损失归因于外毛细胞死亡,并得出结论,耳蜗中的Cep250对维持成年小鼠外毛细胞存活至关重要。