Robertson等人(1994年)利用消减杂交技术鉴定了一种新的耳蜗转录物的部分人类cDNA。Robertson等人(1997年)从胎脑cDNA文库中获得了人类和小鼠COCH的全长cDNA,他们称之为COCH5B2。推导出的人类蛋白含有550个氨基酸,与小鼠蛋白的序列同源性为94%。它包含一个潜在的信号肽和2个与血管性血友病因子(VWF;613160)a型结构域同源的结构域。人类组织的Northern blot分析检测到胎儿耳蜗和前庭高水平和胎儿大脑和眼睛极低水平的主要2.3kb和次要2.0kb和2.9kb转录物的表达。Robertson等人(1998年)表明,人类COCH蛋白与鸡蛋白具有79%的序列一致性。对胚胎晚期和孵化后的鸡耳蜗和前庭组织进行原位杂交,检测到位于听觉神经节和感觉上皮之间的神经纤维沿线的纺锤形细胞中的表达。这些细胞伴随着缰孔处的轴突,轴突延伸到毛细胞的开口处。
通过荧光原位杂交,Robertson等人(1997)将COCH基因映射到DFNA9最小临界区域内的14q11.2-q13。他们将小鼠Coch基因定位到与人类14q11.2-q13同源的12号染色体区域。
Robertson等人(1998年)报告称,鸡内耳中Coch的表达模式与DFNA9(601369)患者颞骨中嗜酸沉积的组织学结果相类似,与粘多糖基质一致,DFNA9是一种非综合征性疾病,常染色体显性聋,前庭功能外显不全。在DFNA9患者的前庭迷路中也检测到与鸡前庭系统中Coch表达相对应的结构中的嗜酸物质。Robertson等人(1998)研究了3个在颞骨检查中具有特征性组织病理学发现的家族。患有DFNA9的听力损失患者的发病年龄在20至30岁之间,最初在高频时更严重,在40至50岁时表现出不同程度的无听力障碍进展。一些DFNA9患者接受了耳蜗植入,其他患者使用了助听器。通过眼震电图和组织病理学评估,发现前庭临床受累范围从无症状到有眩晕、前庭功能减退。Robertson等人(1998年)在这3个家族中的每一个家族中,在小鼠和鸡COCH中保守的残基中都发现了COCH基因的突变,该突变位于一个包含4个保守半胱氨酸的区域,与多头鲎中的一种脂多糖结合凝血因子(FCH,或LCCL)的一个域同源。
Robertson等人(2001年)提出了一种针对LCCL结构域的抗体。用抗叶绿素进行的免疫组化显示,染色主要在小鼠螺旋缘和螺旋韧带的纤维细胞区域以及人胎儿和成人组织切片中。这些位点对应于通过原位杂交确定的表达COCH mRNA的区域,以及显示DFNA9组织学异常的内耳区域。表达COCH mRNA和蛋白产物的纤维细胞是受DFNA9影响的个体颞骨切片中缺失或显著减少并被嗜酸性脱细胞物质替代的细胞类型。
为了确定DFNA9的分子基础,Grabski等人(2003)产生了myc标记的野生型和突变型cochlins,并探索了它们在瞬时转染系统中的行为。实验结果表明,COCH突变不太可能导致分泌异常,细胞外事件可能导致DFNA9病理学改变。他们一致认为,野生型耳蜗蛋白积聚在细胞外沉积物中,与基质成分纤维连接蛋白(FN1;135600)紧密平行,而突变型耳蜗蛋白在细胞外物质的数量和模式上有所不同。虽然一些突变体表现出几乎正常的沉积模式,但一些突变体完全没有沉积。结果表明,DFNA9来源于未能正确整合到细胞外基质中的基因产物。
Robertson等人(2006年)在小鼠和人类内耳中发现,耳蜗免疫染色仅限于中胚层来源的组织;神经外胚层衍生结构明显缺乏耳蜗蛋白表达。可卡因免疫阳性中胚层结构包括螺旋韧带、边缘和骨螺旋板的通道,它们是膜耳蜗的一部分。前庭迷路和嵴在感觉上皮下的纤维细胞和基质以及壶腹壁中显示出强烈的耳蜗蛋白染色。蛋白质组分析显示,野生型小鼠的耳蜗和前庭迷路中有较强的稳定耳蜗蛋白表达,而在Coch-null小鼠中没有表达。对人类对照组和DFNA9颞骨的蛋白质组分析表明,耳蜗蛋白是对照组人耳蜗中最普遍的蛋白质。Robertson等人(2006年)指出,他们的发现与之前使用Northern印迹、组织原位杂交、免疫组织化学分析的研究结果一致。
常染色体显性聋9
在分离常染色体显性聋-9(DFNA9;601369)的3个无关家族的受累成员中,Robertson等人(1998年)确定了COCH基因中的杂合错义突变(603196.0001-603196.00 03)。
Fransen等人(1999年)报告了1个比利时大家庭和2个荷兰小家庭的遗传分析,这些家庭患有与前庭功能障碍相关的常染色体显性非综合征进行性感音神经性聋。所有3个家族都携带pro51-to-ser突变(603196.0004)。在所有3个有听力损失和平衡问题的家庭中,超过25%的患者表现出其他症状,包括眩晕、耳鸣、耳塞和听力损失。临床上,这些症状符合梅尼埃病(156000)的标准。Fransen等人(1999年)建议,在梅尼埃病症状患者中应考虑COCH突变。
由于在一些COCH突变的家族中描述了梅尼埃病样症状,Usami等人(2003年)对来自常染色体显性遗传性听力障碍独立家族的23名患者进行了COCH突变分析,其中4名患者报告了前庭症状,20名梅尼埃疾病患者。在一名常染色体显性遗传性听力损失和前庭症状患者中发现了一种新的点突变,ala119至thr(A119T;603196.0006),但在梅尼埃病患者中未发现突变。Usami等人(2003年)得出结论,COCH基因突变是常染色体显性遗传性耳聋伴前庭症状患者的重要原因,
Street等人(2005年)对一个患有听力损失、前庭和眼动障碍的美国家系进行了全基因组扫描和连锁分析。标记D14S1021获得的最大两两lod评分为7.08,COCH基因第12外显子(603196.0007)中发现一个突变,该突变与听觉功能障碍相关。Street等人(2005)指出,这是第一个报道的LCCL结构域之外的突变,该结构域由外显子4和5编码。
Hildebrand等人(2009)在分离DFNA9的5代家族的受影响成员中鉴定了COCH基因中的P51S(603196.0004)突变。一个有此突变的家庭成员出现双侧上半规管开裂。Hildebrand等人(2009年)建议对DFNA9相关性耳聋患者进行高分辨率颞骨CT检查,并对散发或家族性上半规管破裂患者进行COCH筛查。
在3名无家族病史且半规管破裂的非血缘患者中,Crovetto等人(2012年)排除了COCH基因编码外显子和内含子-外显子边界的突变。
Robertson等人(2006)发现,DFNA9患者的颞骨在整个螺旋韧带、角膜缘和骨螺旋层中都有大量的cochlin免疫反应性嗜酸性脱细胞沉积物。Coch-null小鼠没有显示这种物质,表明DFNA9-相关突变导致显性负效应。Robertson等人(2006年)认为,DFNA9中这些通道的阻塞会导致继发性神经元损伤和听力损失。
常染色体隐性聋110
JanssensdeVarebeke等人(2018年)在两个兄弟中发现了COCH基因的纯合无义突变(R98X;603196.0010),这两个兄弟均为摩洛哥血统的比利时近亲父母所生,患有常染色体隐性聋-110(DFNB110;618094)。该突变是通过基因组的下一代测序发现的,并经Sanger测序证实,与该家族中的疾病分离。RNA分析表明,突变导致非传感介导的mRNA衰变和功能完全丧失。
Makishima等人(2005年)将Coch缺失定位于小鼠内耳,发现突变体在内耳中没有可检测到的耳蜗蛋白,并且对咔哒声和纯音刺激具有听觉脑干反应,与野生型小鼠没有区别。lacZ报告分析显示,突变小鼠耳蜗和前庭迷路的非感觉上皮和间质区中Coch mRNA表达。Makishima等人(2005)得出结论,DFNA9可能不是由COCH单倍充足引起的,而是由内耳非感觉区域的显性负效应或功能获得效应引起的。
Chance等人(2010年)在Usher综合征1F(USH1F;602083)的耳聋模型Ames waltzer小鼠中确定了与耳蜗发病相关的蛋白质和蛋白质网络。野生型和Ames waltzer小鼠出生后第30天(耳蜗病理学已明确确定的时间点)的耳蜗蛋白通过定量2D凝胶电泳和质谱(MS)进行分析。在2270个点中,与对照组相比,Ames waltzer耳蜗中有69个点的强度发生了显著变化。在20个肽点中鉴定了cochlin蛋白;其中大多数上调,而少数下调。MS序列数据分析表明,在Ames waltzer耳蜗中,一组耳蜗全长亚型上调,而缺失N末端FCH/LCCL结构域的亚型下调。对所有差异表达蛋白质的蛋白质相互作用网络分析显示,许多具有统计学意义的候选蛋白质网络预计会在受影响的耳蜗中发生改变。对蛋白质组学和生物信息学研究中的候选基因进行定量PCR(qPCR)分析表明,Coch mRNA以及与应激反应和生存相关的转录因子p53(191170)、Brn3a(POU4F1;601632)和Nrf2(NFE2L2;600492)的mRNA上调。Chance等人(2010年)认为,耳蜗蛋白水平的增加可能是导致USH1F模型中耳蜗神经上皮退化的重要致病因素。
因子C是马蹄蟹Lumulus的丝氨酸蛋白酶,对抗菌反应至关重要。Py等人(2013)根据COCH与因子C的同源性,特别是在N末端LCCL结构域中,推测COCH也可能参与先天免疫。Western blot分析和免疫荧光显微镜显示,小鼠滤泡树突状细胞(FDCs)将Coch表达并分泌到通过脾白髓和淋巴结分布趋化因子和其他分子的导管腔中。缺乏Coch的小鼠保留了FDC对导管的粘附,而Coch缺乏对适应性免疫反应没有影响。在野生型小鼠的炎症过程中,聚集酶-1(ADAMTS4;603876)和聚集酶-2(ADAMTS 5;605007)产生了2种Coch裂解产物p8和p18,这些产物在血液中释放。Coch p8和p18片段分别对应于LCCL结构域和糖基化LCCL域。Coch-/-小鼠在肺部感染铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌后存活率降低,这与局部细胞因子生成减少、免疫效应细胞招募和细菌清除有关。Py等人(2013年)得出结论,产生COCH的FDC有助于细菌防御中的先天免疫反应。