G蛋白偶联受体(GPCR)是最大的相关蛋白超家族。它们都有7个跨膜(TM)片段,允许细胞采样并对其环境作出响应。VLGR1是一种在中枢神经系统(CNS)中表达的大型钙结合GPCR。
通过筛选可能编码大脑中表达的大蛋白的cDNA,Ishikawa等人(1998年)分离出编码GPR98的部分cDNA,他们称之为KIAA0686。推断出的326-氨基酸蛋白预计与大鼠latrophilin有关(参见NRXN1;600565)。
Nikkila等人(2000年)利用锚定PCR技术扩展包含GPCR TM片段的cDNA序列,然后进行RT-PCR并筛选BAC和YAC克隆,分离出编码VLGR1的cDNA。序列分析预测,1967-氨基酸VLGR1蛋白包含一个N端信号肽、7个假定的Na(+)/Ca(2+)交换物、21个N-连接的糖基化位点、TM区域和一个具有棕榈酰化位点和多个潜在丝氨酸磷酸化位点的C端结构域。肾上腺和睾丸RNA的Northern blot分析显示片段转录物微弱表达;肝组织中未见表达。RT-PCR分析发现,除肝、脾和白细胞外,正常组织中存在低但广泛的表达。钙覆盖结合分析表明,细胞外重复结构域结合Ca(2+)。镁不会抑制这种结合,但新霉素和钆会抑制这种结合。Western blot分析显示约220-kD细胞表面VLGR1蛋白的表达。Nikkila等人(2000年)提出,VLGR1通过钙介导的相互作用结合其配体。
通过原位杂交分析,McMillan等人(2002年)证实,小鼠Vlgr1在胚胎第8.0天时在神经沟中高表达,在胚胎第8.5天时则在神经上皮中高表达。随着妊娠的进展,表达在光学结构中最为强烈,并延伸至整个大脑,然后在妊娠后期随着神经发生的减慢而变窄。在成年小鼠中,表达仅限于下丘脑的乳头状核。通过对小鼠脑组织的RT-PCR分析,随后进行5引物和3引物RACE扩增以及人类基因组数据库分析,McMillan等人(2002)分离出编码VLGR1的2种异构体的cDNA。他们将这些亚型命名为VLGR1B和VLGR1C,并将Nikkila等人(2000)确定的亚型重命名为VLGR1A。推导出的6307-氨基酸VLGR1B蛋白包含一个假定的信号肽、90个预测的N-连接糖基化位点、35个钙交换(CALX)-β重复序列,以及其胞外部分中的潜在戊聚糖(PTX;参见602492)结构域。VLGR1B的TM片段与大鼠latrophilin有关。推导出的2296氨基酸VLGR1C蛋白具有一个信号肽、15个CALX-β结构域和PTX结构域,但没有TM片段。RT-PCR分析表明,在所有测试组织中,VLGR1B的含量是VLGR1A的4倍,而在大多数测试组织中VLRG1C的含量大约是VLGR1B的1.5倍;在胎儿睾丸中,VLGR1C几乎完全表达。McMillan等人(2002年)得出结论,VLGR1是细胞表面表达的最大蛋白,可能是神经祖细胞类型的标记,对中枢神经系统的发育很重要。他们注意到,Vlgr1b在小鼠中占主导地位,并且没有人类VLGR1A的小鼠同源物。
通过基因组序列分析,McMillan等人(2002)确定GPR98基因包含90个外显子,跨度至少为600kb。
利用辐射杂交分析,Ishikawa等人(1998年)将GPR98基因定位到第5染色体。通过YAC克隆的连锁分析、FISH和辐射杂交分析,Nikkila等人(2000年)将GPR98基因定位到染色体5q14.1。
Skradski等人(2001年)确定了一个包含小鼠Mass1基因人类同源物的基因组克隆。利用这个克隆进行荧光原位杂交,他们将人类GPR98基因定位到染色体5q14上。
遗传性特发性癫痫中大多数突变的基因编码离子通道亚单位。这一规则的两个明显例外是MASS1基因和LGI1(604619)基因,后者在具有听觉特征的常染色体显性部分性癫痫中发生突变(ADLTE;600512)。Scheel等人(2002年)通过对两种蛋白质的氨基酸分析确定,每种蛋白质都包含一个新的同源结构域,该同源结构域由一个7倍重复的44位基序组成。这种新结构域的结构和结构特征使其很可能成为日益增长的蛋白质相互作用结构域中的一员,具有7叶片的β-螺旋桨折叠。MASS1基因产物是超大G蛋白偶联受体VLGR1的片段,该EAR结构域(用于癫痫相关重复序列)是配体结合外结构域的一部分。LGI1,以及一些新发现的LGI1亲缘关系,预计是一种分泌蛋白,由一个N端富含亮氨酸的重复区域和一个C端EAR区域组成。人类基因组编码至少6种EAR蛋白,其中一些映射到与癫痫发作相关的染色体区域。作者假设,EAR结构域可能通过与未知抗癫痫配体结合或干扰轴突导向或突触发生,在癫痫发病机制中发挥重要作用。
Ebermann等人(2010年)对人类胎儿大脑进行了酵母2杂交筛选,观察到PDZD7基因(612971)的PDZ2结构域与GPR98的C末端胞内结构域(包括其PDZ结合基序)的相互作用。免疫共沉淀研究证实了这种相互作用,并揭示其由PDZD7的PDZ2结构域和GPR98的PDZ结合基序介导。
家族性发热性癫痫4
发达国家的研究表明,所有儿童中有2-5%在5岁之前会出现发热性癫痫发作。在日本人口中,发病率高达7%。据报道,在Frings小鼠菌株中,Mass1基因发生了自然突变,容易发生听源性癫痫(Skradski等人,1998年;Skrasski等人,2001年)。人类直系图MASS1映射到5q14,其中绘制了一种形式的发热性癫痫(FEB4;604352)。因此,MASS1是FEB4基因的有力候选基因。Nakayama等人(2002年)对48个患有家族性发热性癫痫的日本家庭的个体进行了MASS1突变筛查,发现25个DNA突变。9个错义多态性等位基因中没有一个与热性惊厥显著相关;然而,在1个发热性和非发热性癫痫家族中发现了一个导致C末端126个氨基酸残基缺失的ser2652至ter突变(S2652X;602851.001)。
Han等人(2020年)在一名20个月大的女孩和她患有高热惊厥的母亲身上发现了ADGRV1基因的杂合错义突变(NM_032119.3,c.2039A-G,D680G,rs547076322)。该突变通过靶向外显子组测序鉴定,并通过Sanger测序证实。在gnomAD数据库中,该变体的等位基因频率为2.8 x 10(-5)。未进行任何功能研究。作者得出结论,这种突变可能是导致FEB4的原因。
Usher综合征IIC型
Usher综合征II型是一种遗传异质性常染色体隐性遗传病,以听力损失和视网膜色素变性为特征。IIC型Usher综合征(USH2C;605472)映射到5q14-q21。Weston等人(2004年)认为VLGR1基因可能是USH2C的候选基因,因为它位于5q14.3-q21.1区间,其蛋白基序结构,以及耳蜗和视网膜消减文库中的EST表达。Weston等人(2004年)利用变性高效液相色谱法(DHPLC)和PCR产物的直接测序,对来自USH2C基因无关患者和156名其他USH2患者的PCR产物进行扩增,在3个USH2C家族和2个散发病例中鉴定出4个异构体特异性VLGR1突变。所有VLGR1突变的患者均为女性,与随机预期有显著差异。已在人类和小鼠中发现VLGR1突变,与两种物种的反射-视野表型相关。人中表达三种VLGR1 mRNA亚型:VLGR1a、VLGR1b和VLGR1c。Weston等人(2004年)观察到的USH2C突变均涉及VLGR1b亚型,但不涉及VLGR1亚型。
在31名与USH2A基因座无关的法国USH2患者中,有10名患者(608400),Besnard等人(2012)发现了GPR98基因的突变。在10例患者中,有2例在GPR98中仅发现1种有害突变;大基因组重排筛查显示,其中1例患者的GPR98多个外显子存在大量重复。对另一名患者的PDZD7基因(612971)进行了分析,但未发现突变。Besnard等人(2012年)得出结论,GPR98突变在导致USH2的突变中占很小但很重要的比例(6.4%)。
Usher综合征IIC型,GPR98/PDZD7 Digenic
在一名患有II型Usher综合征的51岁德国男子中,Ebermann等人(2010)在GPR98基因中发现了一个杂合移码突变(602851.0010),在PDZD7基因中发现了一个杂合移码突变(612971.0002),该男子的Usher基因USH2A(608400)、WHRN(607928)和CLRN1(606397)突变呈阴性。在GPR98或PDZD7中未检测到第二个突变等位基因。
Skradski等人(1998年)将导致小鼠听源性癫痫发作的基因位点定位在小鼠13号染色体中间约3.6 cM的区间。Frings听觉性惊厥易感小鼠是一种感觉诱发反射性惊厥模型。他们的发作表现为狂奔、失去翻正反射、强直性屈曲和强直性伸展,以响应高强度的声音刺激。Skradski等人(2001年)在突变Frings小鼠中鉴定出Mass1基因,并确定其为纯合子,用于导致编码蛋白提前终止的单碱基对缺失。该基因在各种组织中的mRNA水平很低,以至于cDNA无法通过标准的文库筛选方法进行检测。
McMillan等人(2002年)指出,Frings小鼠的表型是由于Vlgr1基因第31外显子内6835(G)核苷酸的自然缺失,将val2250转换为终止密码子(V2250X)。该突变阻止了Vlgr1b的合成,并通过63个氨基酸截断了Vlgr1c。据报道,Frings小鼠Mass1的突变基因有几个转录本,其中最长的转录本实际上由Vlgr1的外显子6至39组成。McMillan等人(2002年)确定,与Vlgr1相比,Mass1转录物的表达水平较低。他们提出Frings小鼠株中的Mass1突变支持VLGR1在CNS正常发育中的作用。
Johnson等人(2005年)确定,小鼠Mass1基因中的V2250X突变是BUB/BnJ小鼠早期听力损伤的原因。他们还表明,Cdh23(605516)突变的加性效应会导致与年龄相关的听力损失进展。