1.简介
X射线晶体学在过去30年中取得的巨大成功很大程度上归功于高强度同步辐射(SR)设备的可用性。最近,不断增长的驱动力亮度X射线源的增加导致在美国和日本建立了X射线自由电子激光(FEL)设施,在欧洲、东南亚和其他地方正在建设新设施(Weckert,2015). X射线自由电子激光提供了巨大的强度增益,允许从几纳米的晶体中获得分子结构(查普曼等。, 2011)最终,在不需要晶体的情况下以高分辨率可视化大分子结构和复合物的可能性(斯特恩等。, 2014). 扩展到亚原子分辨率的X射线衍射数据(即≤1º)可以得到非常精确的电子密度图,从而可以确定大部分H原子的位置。氢原子位置的知识提供了质子化状态的详细信息(例如用于氨基酸侧链、结合药物/抑制剂等.)、水结构和氢键,这对理解大分子功能至关重要(Kosinka Eriksson等。, 2013; 松冈等。, 2015; 尾形等。, 2015). 此外,可以获得电荷密度信息,如克雷姆宾(杰尔施)的研究所示等。, 2000)醛糖还原酶(Guillot等。, 2008)和胆固醇氧化酶(扎里赫塔等。, 2015). 中子晶体学为亚原子X射线晶体学提供了一种定位H原子的替代方法,是定位高极化H原子和质子(H+)因为这些用X射线是看不见的。由于H及其同位素氘(D)的相干中子散射长度与大分子的其他常见元素的大小相似(表1),它们的位置可以比X射线所需的分辨率低得多。此外,在亚原子分辨率的电子密度图中观察到的H原子通常是热运动较低的原子,而流动性较大的H原子(通常是生物上最有趣的原子)往往保持不可见,因为它们本来就很弱的散射信号被进一步抹去。尽管中子衍射数据集的分辨率低得多,但中子晶体学已显示出难以在亚原子电子密度图中观察到的H原子位置(加德伯格等。, 2010).
| | 中子相干 | 中子 | X射线散射长度(10−12 厘米) | 同位素 | 原子序数 | 散射长度(10−12厘米) | 非相干截面(Barn=10−28 米2) | 罪θ= 0 | (罪θ)/λ= 0.5 Å−1 | 1H(H) | 1 | −0.374 | 80.27 | 0.28 | 0.02 | 2H(D) | 1 | 0.667 | 2.05 | 0.28 | 0.02 | 12C类 | 6 | 0.665 | 0 | 1.69 | 0.48 | 14N个 | 7 | 0.937 | 0.50 | 1.97 | 0.53 | 16O(运行) | 8 | 0.580 | 0 | 2.25 | 0.62 | 31P(P) | 15 | 0.513 | 0.01 | 4.23 | 1.83 | 32S公司 | 16 | 0.280 | 0 | 4.50 | 1.90 | | |
使用中子的另一个优点是,它们不会对晶体造成任何可观察到的辐射损伤,因此可以在室温下收集数据,避免任何潜在的低温冷却效应(Keedy等。, 2014)从而确定无损伤结构。这一点尤其重要,因为尽管X射线探测器和数据采集协议取得了所有进步,但在100 K时仍可能发生辐射损伤(利布施纳等。, 2013; 凯基莉等。, 2014). 这在金属蛋白的氧化还原中心(Kekilli等。, 2014; 苏加等。, 2015)以及含有羧酸的残留物天冬氨酸和谷氨酸,因为X射线会导致一氧化碳2消除、排除测定天冬氨酸和谷氨酸质子化状态(Gerstel等。, 2015). 我们注意到,尽管蛋白质数据库(PDB)中有大量的X射线结构,但在环境温度下,氧化还原系统真正的“无损伤”结构仍然稀缺。
中子晶体学在大分子中氢原子定位的应用历来局限于研究小单元-细胞系统(细胞边缘<30º),其中大晶体的直径为几毫米三可以种植。即便如此,由于缺乏优化的仪器,仍需要数月的长时间数据采集(Schoenborn,2010). 随着中子晶体学扩展到传统边界之外,以更小的样本和更短的数据采集时间解决更大和更复杂的问题,情况不再是这样。这种转变的起源可以在许多进展中找到,包括准劳(Blakeley)的发展等。, 2010; 梅勒尔等。, 2013)和单色(Kurihara等。, 2004;https://www.mlz-garching.de/biodiff)带柱面成像探测器的衍射仪核反应堆中子源,散裂中子源处的飞行时间(TOF)劳厄衍射仪等。, 2004; 科茨等。, 2010; 库萨卡等。, 2013)样品氘化的集中设施和结构计算的新工具精炼(黄嘌呤等。, 2010; 格鲁尼等。, 2014). 在PDB中的83个中子结构中,超过一半(49/83)是自2010年以来沉积的(图1). 其中许多说明了X射线和中子晶体学相结合的互补性,以确定重要的氢原子位置,从而提高我们对大分子结构和功能的理解。
| 图1 自2010年以来,PDB中沉积的大分子的中子和联合X射线/中子结构,包括每个大分子的数据收集细节和晶体学参数。结构按照晶体体积与不对称单位体积之比从最低到最高排序。那些比率最低的人被认为是最具挑战性的。以红色突出显示的是HIV-1蛋白酶与抗逆转录病毒药物结合的研究(韦伯等。, 2013)晶体体积与非对称单元体积。橙色突出显示了对来自硫还原热球菌(I-P基地;休斯等。, 2012)这是目前最大的单位电池和非对称单元要研究的体积。蓝色突出显示的是对红血球毒素从火球菌属(RdPf;Munshi)等。, 2012)这是到目前为止14小时收集数据的最快速度。绿色部分突出显示的是另一项关于RdPf(Cuypers)的研究等。, 2013)这是目前分辨率最高的研究,为1.05°。紫色突出显示的是在100K下对细胞色素进行的中子冷冻晶体学研究c(c)过氧化物酶(MW~34 kDa)(卡萨迪等。, 2014)和β-内酰胺酶(MW~28 kDa)(Coates等。, 2014)以黄色突出显示的是对Cu亚硝酸盐还原酶(MW~37 kDa)的研究环裂无色杆菌(交流电NiR)和细胞色素c(c)′(MW~14 kDa)来自产碱木糖氧化酶类(阿克斯CytCp)。 |
2.H/D交换和全氘化
在中子大分子晶体学中,D取代H有两个主要原因。首先,H有一个异常大的非相干散射 横截面,而D的值要低~40倍(表1). 由于H原子约占高分子晶体中原子的一半非相干散射信号对高散射背景有显著影响;因此,通过降低非相干背景,H/D同位素替换提高了衍射数据的信噪比,从而扩大了分辨率极限。其次,由于D的相干散射长度是正的,大约是H的两倍,因此D原子比H原子更容易在中子图中定位。
中子研究通常使用D交换单晶(Tomanicek)进行(64/83,77%)等。, 2010; 瓦列夫斯基等。, 2010, 2012; 费希尔等。, 2012; 横山等。, 2013; 卡萨代等。, 2014; 黄等。, 2014; 兰根等。, 2014; 奥克萨宁等。, 2014; 万等。, 2014; 联合国等。, 2015; 米查尔奇克等。, 2015). H/D交换可以通过蒸汽交换或浸泡在D中实现2O溶液,允许交换附着在氧或氮上的溶剂可及氢原子,但不允许交换附着到碳上的氢原子。从D交换晶体中收集的中子数据可以很容易地以2.5º的分辨率显示O或N原子上的D原子。为了容易地定位H原子,数据必须扩展到~1.5º的分辨率(Chen等。, 2012)因为在较低分辨率下(正负中子散射体之间)的抵消效应限制了H原子附着在C原子上的可视化(例如中国2,中国三组)。越来越普遍的是使用全氘化样品进行的研究(总体上,19/83个结构,23%;自2010年以来,17/49个结构,35%)通过细菌在氘化培养基上的表达(Petit-Haertlein等。, 2009). 因为全氘化提供了完全的氘化(即全氘化晶体的中子衍射数据大大提高了信噪比,缩短了数据采集时间(Munshi等。, 2012)和/或提供更高分辨率的数据(Cuypers等。, 2013). 由于中子晶体学研究成功的历史瓶颈一直是需要足够大的晶体体积,也许最重要的是,全氘化允许从更小的晶体体积收集数据(囊性纤维变性。D-交换样品)(霍华德等。, 2011; 韦伯等。, 2013),使更大的单元-细胞系统更易于研究。此外,避免了中子图抵消效应,使所有D原子(分辨率为2.5º),包括那些附着在碳原子上的原子,都可以很容易地可视化(例如光盘2,CD三组)(费希尔等。, 2014). 世界各地的中子设施现已开发出专门的氘化实验室,如劳埃-朗之万研究所(ILL)的氘化实验室和橡树岭国家实验室(ORNL)的生物氘化实验室。
反应堆中子源处的中子仪器
近年来,在开发新的和改进的中子大分子晶体学仪器方面取得了很大进展。在反应堆中子源中,使用圆柱形中子敏感成像(NIP)探测器,该探测器完全包围样品并提供大范围的互易空间(>2π斯特拉迪安)已被纳入仪器设计中,如LADI-III衍射仪(布莱克利等。, 2010)在ILL高通量反应堆,BioDIFF衍射仪(https://www.mlz-garching.de/biodiff)在Forschungsreaktor Munchen II研究反应堆(FRM II)、BIX-3和BIX-4衍射仪(田中等。, 2002; 栗原市等。, 2004)在日本原子能机构(JAEA)的JRR-3M反应堆和IMAGINE衍射仪(Meilleur等。, 2013)在最高点通量ORNL的同位素反应器(HFIR)。为了减少所需晶体的体积,LADI-III和IMAGINE衍射仪使用准蓝方法进行数据采集,其中窄带通过(例如 δλ/λ=30%)从原始宽带波长光谱(白光)中提取。准寿命方法在通量相对于单色方法,与使用全白光束相比,减少了背景散射和反射重叠。2012年,LADI-III衍射仪被重新安置在靠近ILL反应堆的新导轨(H143)上。新的终端位置提供了改进的带通剖面(由于上游缺少仪器),最重要的是增加了四倍通量在样品位置(囊性纤维变性。之前的H142位置)。由于最近的这些改进,LADI-III正在进一步扩大该领域的范围。目前的2.0º分辨率结构(PDB代码:4JEC公司)与amprenavir结合的全氘化HIV-1蛋白酶(MW~21 kDa)(韦伯等。, 2013)具有用于数据采集的晶体体积的最低比率(33)(0.2 mm三)到非对称单元所研究的大分子的体积(60000Å三). 此外,2.5º分辨率结构(PDB代码:第三季度升)无机焦磷酸酶(I-PPase,MW~125 kDa)的非对称单元体积(一= 106.1 Å,b条= 95.5 Å,c(c)= 113.7 Å,β= 98.1°/C类2) 到目前为止(休斯等。, 2012). 该结构是使用5 mm的数据确定的三I-PPase的D-交换晶体;然而,最近使用LADI-III衍射仪收集到的数据分辨率为~2.5º,但数据来源于更小(0.32 mm三)I-PPase的全氘化晶体,说明了全氘化的巨大好处(Ng/Garcia-Ruiz,未发表的结果)。1.05Ω分辨率中子结构(PDB代码:4AR3号机组)全氘化物的氧化形式红血球毒素从火球菌属(RdPf,MW~6 kDa)是迄今为止沉积的任何结构中分辨率最高的(Cuypers等。, 2013). 这些数据是从6.9 mm三使用ILL的单色热中子衍射仪D19对RdPf的全氘化晶体进行测量。虽然D19衍射仪更常用于结构化学中的衍射研究,但它能够从小分子(细胞边缘<50以及从更大的大分子(细胞边缘<100º)到中等分辨率(1.8–2.5º),前提是足够大的晶体数毫米三可用。近年来,木糖异构酶(MW~43 kDa)的中子研究集成证明了这一点(Kovalevsky等。, 2010, 2012; 兰根等。, 2014).
6.结构精炼中子衍射数据的选择
最近几年精炼已开发出允许结构精炼单独或联合中子数据精炼使用X射线和中子衍射数据的策略。添加H和D原子后,中子结构的原子数大约是X射线结构的两倍。因此,尝试以中等分辨率细化中子结构(例如 d日最小值从2.0到2.5º),尤其是具有较大单位单元的单元,由于数据与参数的比率较低,可能会出现问题。通过结合X射线和中子技术的数据,可以提高数据与参数的比值,同时可以减少系统误差的影响。联合X射线/中子精炼策略使允许精炼在结构中的所有原子中,原则上会产生更精确的结构。这个菲尼克斯定义程序(Afonine等。, 2010)例如,能够在联合X射线/中子策略中以及单独针对中子数据来细化结构。此外,对SHELXL2013表(格鲁尼等。, 2014)使程序更便于使用精炼根据中子数据分析高分子结构。
8.氧化还原生物学:从电子的供给到利用
许多生物过程依赖于利用金属中心或簇的氧化还原特性的氧化还原过程。原子到亚原子分辨率X射线结构能够以前所未有的详细程度提供结构信息,但主要挑战仍然是氧化还原中心是第一个受到影响的光还原(亚诺等。, 2006; 霍夫等。, 2008; 埃利斯等。, 2008; 凯基莉等。, 2014). 目前正在开发几种解决方案来克服这一问题,包括部署大型晶体与具有快速CCD和光子计数探测器的微聚焦光束相结合。使用来自XFEL的超亮飞秒脉冲可以使大多数损伤过程失效,并且最近启用了结构测定牛细胞色素的完全氧化静息状态c(c)氧化酶(平田等。, 2014)以及SACLA FEL(Suga)的光系统II的未受损含氧复合体等。, 2015)使PSII中Mn团簇的细节与XAFS公司。为了尽量减少辐射损伤,晶体可以每隔几度转换数据,以提供纯氧化还原状态的结构,而不是X射线辐解产生的混合物。这一发展可以与中子衍射研究相结合,因为在从同一晶体获得亚原子分辨率X射线结构之前,该晶体可以首先用于收集高分辨率中子衍射,而不存在任何辐射损伤问题。实现这一点的一个例子是高电位铁硫蛋白(HiPIP)。HiPIP的MW为~9 kDa,并含有Fe4S公司4簇,表现出+2/+3氧化还原状态,并作为细胞色素的电子载体公元前1个复合物到光合紫色细菌中的反应中心复合物。使用体积为2.3mm的D交换HiPIP晶体三在J-PARC使用TOF劳厄衍射仪iBIX收集中子数据,分辨率为1.17º。随后,使用短X射线波长(0.4º)和强微聚焦光束,以及数据采集过程中大晶体的平移,收集了分辨率为0.48º的X射线数据(Hirano&Miki,未发表的结果;数据在2014年IUCr大会上提交)。HiPIP获得的X射线分辨率相当于迄今为止由更小的蛋白质crambin保持的记录(在2014年IUCr大会上提出),其分子量为~5 kDa。联合X射线/中子结构精炼这些非常高分辨率的数据集必将有助于我们理解电子和质子转移动力学的耦合。
亚硝酸铜还原酶(NiRs)中发生电子和质子转移的耦合,这已通过对这些酶的广泛结构-功能研究(Antonyuk等。, 2005, 2013; 莱费林克等。, 2011). 这里,我们包括了0.87º分辨率的NiR X射线结构的结果环裂无色杆菌(交流电NiR)(MW~37 kDa),底物亚硝酸盐结合。该结构包含所有固有残基(残基4-340)、两个铜离子、两个丙二酸根离子、一个亚硝酸根离子、三个乙酸根离子、一个硫酸根离子和674个水分子。决赛R(右)工作和R(右)自由的影响因素分别为12.3%和13.9%。X射线数据的数据收集和处理统计如表3所示.由于X射线数据的分辨率很高,1该结构中观察到61%的预期氢原子(图3). 图4显示了亚硝酸盐结合活性中心,催化核心可见大量H原子。尽管如此,尽管有很大比例的H原子可见,但质子路径中的许多关键H原子是不可辨别的。因此,观察到的Asp98的多重构象代表不同的反应状态,使得不可能看到质子(图4)与这个提取质子的残留物有关。这促使我们开始对交流电可以生长大晶体的NiR(见下文)。
X射线源、仪器 | Daresbury实验室,10.1站 | “空间”组 | P(P)21三;第198号 | 单位-细胞参数 | 一= 94.9 Å,b条= 94.9 Å,c(c)= 94.9 Å,α= 90°,β= 90°,γ= 90° | 波长(Ω) | 0.92 | 分辨率(Ω) | 26–0.87 (0.9–0.87) | 独特的反射 | 231231 | 完整性(%) | 99.7 (99.7) | 多重性 | 7.2 (4.7) | 我/σ(我) | 32.0 (2.5) | R(右)sym(对称) | 6.1 (46.8) | 威尔逊B类(Å2) | 6.3 | R(右)茴香(%) | 12.3 | R(右)自由(aniso)(%) | 13.9 | 蛋白质原子数 | 3639 | 多占用侧/主链 | 42/15 | 水分子 | 674 | 部分水域 | 94 | 铜离子 | 2 | 硫酸盐离子 | 0.4 | 醋酸盐离子 | 三 | 丙二酸根离子 | 2 | 可见/预期的H原子 | 1649/2700 | PDB接入号码 | 5千克 | R(右)sym(对称)=Σ|I–〈我〉|/Σ我,其中我是观测到的强度我\9002;是该反射的多重对称相关观测的平均强度。R(右)晶体=Σ||F类第页光突发事件| − |F类第页计算||/Σ|F类第页光突发事件|.R(右)自由的=Σ||F类第页光突发事件| − |F类第页计算||/Σ|F类第页光突发事件|其中|F类第页光突发事件|来自结构优化中未使用的测试集。R(右)茴香和R(右)自由(aniso)都是一样的R(右)晶体和R(右)自由的除各向异性原子位移参数细化外。 | |
| 图3 左:X射线结构交流电NiR(来自环裂无色杆菌),显示了电子密度图中0.87º分辨率下可见的H原子数(1649)。右:相同的X射线结构交流电NiR,但显示结构中所有2700个预期氢原子;在这个0.87º分辨率的X射线结构中观察到61%的预期氢原子。 |
| 图4 第二类Cu站点交流电与亚硝酸盐结合的近红外光谱分辨率为0.87º。催化重要的残基Asp98以多种构象出现,有两种明显的构象。第2个F类o个−F类c(c) 电子密度图(青色)轮廓为1.5σ级别和F类o个−F类c(c)氢省略图(红色)的轮廓为2.0σ级别。 |
12.结论
由于最近中子大分子晶体学能力和容量的增强,PDB中沉积的中子结构数量显著增加。该领域的局限性不断扩大,新的例子进一步说明了晶体体积或数据采集时间的减少,以及可实现的分辨率或单位体积的增加。此外,中子低温结晶术的可行性已经得到证明,可以进行更多的研究。通过对现有仪器的进一步改进,如为iBIX和MaNDi仪器增加新的探测器,以及建造新的仪器,如欧洲散裂源的TOF劳厄衍射仪“NMX”,这一趋势将继续下去。然而,可以公平地说,尽管在该领域取得了相对于X射线的所有进展,但中子衍射研究始终需要大得多的晶体(约线性尺寸的十倍),特别是随着研究更大的大分子和复合物的发展。正是在这个意义上,需要进一步开发用于大晶体生长的仪器和方法。创建专门用于优化晶体体积和质量的实验室,类似于集中氘化设施,将有助于提高中子大分子晶体学的效率。由于苛刻的实验要求,结构生物学家已被劝阻从事中子衍射研究,但随着更多示例的发布,说明了X射线无法提供的重要结构信息,和从更可行的晶体体积来看,中子晶体学的应用将变得更加普遍。除了众所周知的中子晶体学强度外,很明显,该方法在获得环境温度下大分子的无损伤结构方面有很大贡献。微焦点X射线束的使用,结合将晶体平移到没有损伤传播的位置,以及高效准确地合并来自晶体不同部分的序列图像的数据的能力,已经证明是有效的。理解X射线自由电子激光飞秒脉冲辐射损伤过程的工作仍在继续(例如,见Jönsson等。, 2015; Nass公司等。, 2015)细胞色素方面的一些早期成功报道c(c)氧化酶与光系统II。虽然中子和X射线晶体学都无法预测蛋白质到结构的途径,但对于后者,甚至对于膜蛋白来说,它已经变得更加可靠。重大努力(例如氘代和晶体体积/质量优化),以使更广泛的结构生物学界更容易获得中子晶体学。
工具书类
Afonine,P.V.,Mustakimov,M.,Grosse-Kunstleve,R.W.,Moriarty,N.W.,Langan,P.&Adams,P.D.(2010)。《水晶学报》。D类66, 1153–1163. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Amemiya,Y.(1997)。方法酶制剂。 276, 233–243. 交叉参考 中国科学院 谷歌学者
Antonyuk,S.V.、Han,C.、Eady,R.R.和Hasnain,S.S.(2013)。自然(伦敦),496, 123–126. 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Antonyuk,S.V.,Rustage,N.,Petersen,C.A.,Arnst,J.L.,Heyes,D.J.,Sharma,R.,Berry,N.G.,Scrutton,N.S.,Eady,R.R.,Andrew,C.R.&Hasnain,S.S.(2011年)。程序。美国国家科学院。科学。美国,108, 15780–15785. 科学网 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Antonyuk,S.V.、Strange,R.W.、Sawers,G.、Eady,R.R.和Hasnain,S.S.(2005)。程序。美国国家科学院。科学。美国,102, 12041–12046. 科学网 交叉参考 公共医学 中国科学院 谷歌学者
Arzt,S.、Campbell,J.W.、Harding,M.M.、Hao,Q.和Helliwell,J.R.(1999)。J.应用。克里斯特。 32, 554–562. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Blakeley,M.P.、Kalb,A.J.、Helliwell,J.R.和Myles,D.A.(2004)。程序。美国国家科学院。科学。美国,101, 16405–16410. 科学网 交叉参考 公共医学 中国科学院 谷歌学者
Blakeley,M.P.、Teixeira,S.C.M.、Petit Haertlein,I.、Hazemann,I.、Mitschler,A.、Haertlein,M.、Howard,E.和Podjarny,A.D.(2010年)。《水晶学报》。D类66, 1198–1205. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Broennimann,Ch.,Eikenberry,E.F.,Henrich,B.,Horisberger,R.,Huelsen,G.,Pohl,E.,Schmitt,B.,Schulze-Briese,C.,Suzuki,M.,Tomizaki,T.,Toyokawa,H.&Wagner,A.(2006)。J.同步辐射。 13, 120–130. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Campbell,J.W.、Hao,Q.、Harding,M.M.、Nguti,N.D.和Wilkinson,C.(1998)。J.应用。克里斯特。 31, 496–502. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Casadei,C.M.、Gumiero,A.、Metcalfe,C.L.、Murphy,E.J.、Basran,J.、Concilio,M.G.、Teixeira,S.C.M.,Schrader,T.E.、Fielding,A.J.、Ostermann,A.、Blakeley,M.P.、Raven,E.L.和Moody,P.C.E.(2014)。科学类,345, 193–197. 科学网 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
H.N.查普曼。等。(2011).自然(伦敦),470, 73–77. 科学网 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Chen,J.C.、Hanson,B.L.、Fisher,S.Z.、Langan,P.和Kovalevsky,A.Y.(2012)。程序。美国国家科学院。科学。美国,109, 15301–15306. 科学网 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Coates,L.、Stoica,A.D.、Hoffmann,C.、Richards,J.和Cooper,R.(2010)。J.应用。克里斯特。 43, 570–577. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Coates,L.、Tomanicek,S.、Schrader,T.E.、Weiss,K.L.、Ng,J.D.、Jüttner,P.和Ostermann,A.(2014)。J.应用。克里斯特。 47, 1431–1434. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Cuypers,M.G.、Mason,S.A.、Blakeley,M.P.、Mitchell,E.P.、Haertlein,M.&Forsyth,V.T.(2013)。安圭。化学。国际编辑。 52, 1022–1025. 科学网 交叉参考 中国科学院 谷歌学者
Ellis,M.J.、Buffey,S.G.、Hough,M.A.和Hasnain,S.S.(2008)。J.同步辐射。 15, 433–439. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Eriksson,M.、van der Veen,J.F.和Quitmann,C.(2014)。J.同步辐射。 21, 837–842. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Fischetti,R.F.、Xu,S.、Yoder,D.W.、Becker,M.、Nagarajan,V.、Ishvili,R.S.、Hilgart,M.C.、Stepanov,S.和Makarov,O.&Smith,J.L.(2009年)。J.同步辐射。 16, 217–225. 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Fisher,S.J.、Blakeley,M.P.、Howard,E.I.、Petit-Haertlein,I.、Haertlein,M.、Mitschler,A.、Cousido-Siah,A.、Salvay,A.G.、Popov,A.、Muller-Dieckmann,C.、Petrova,T.和Podjarny,A.(2014)。《水晶学报》。D类70, 3266–3272. 交叉参考 IUCr日志 谷歌学者
Fisher,S.Z.、Aggarwal,M.、Kovalevsky,A.Y.、Silverman,D.N.和McKenna,R.(2012)。美国化学杂志。Soc公司。 134, 14726–14729. 科学网 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Gardberg,A.S.、Del Castillo,A.R.、Weiss,K.L.、Meilleur,F.、Blakeley,M.P.和Myles,D.A.A.A.(2010)。《水晶学报》。D类66, 558–567. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Gerstel,M.、Deane,C.M.和Garman,E.F.(2015)。J.同步辐射。 22, 201–212. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Gruene,T.、Hahn,H.W.、Luebben,A.V.、Meilleur,F.和Sheldrick,G.M.(2014)。J.应用。克里斯特。 47, 462–466. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Guillot,B.、Jelsch,C.、Podjarny,A.和Lecomte,C.(2008)。《水晶学报》。D类64, 567–588. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Hirata,K.、Shinzawa-Itoh,K.,Yano,N.、Takemura,S.、Kato,K.与Hatanaka,M.、Muramoto,K.和Kawahara,T.、Tsukihara,T、Yamashita,E.、Tono,K.。、Ueno,G.、Hikima,T.,Murakami,H.、Inubushi,Y.、Yabashi,M.,Ishikawa,T.和Yamamoto,M。自然方法,11, 734–736. 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Hough,M.A.、Antonyuk,S.V.、Barbieri,S.、Rustage,N.、McKay,A.L.、Servid,A.E.、Eady,R.R.、Andrew,C.R.和Hasnain,S.S.(2011)。分子生物学杂志。 405, 395–409. 科学网 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Hough,M.A.、Antonyuk,S.V.、Strange,R.W.、Eady,R.R.和Hasnain,S.S.(2008)。分子生物学杂志。 378(2), 353–361. 交叉参考 谷歌学者
Howard,E.I.、Blakeley,M.P.、Haertlein,M.、Petit-Haertlein,I.、Mitschler,A.、Fisher,S.J.、Cousido-Siah,A.、Salvay,A.G.、Popov,A.、Muller-Dieckmann,C.、Petrova,T.和Podjarny,A.(2011)。J.分子识别。 24, 724–732. 科学网 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Huang,G.Y.、Gerlits,O.O.、Blakeley,M.P.、Sankaran,B.、Kovalevsky,A.Y.和Kim,C.(2014)。生物化学,53, 6725–6727. 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Hughes,R.C.、Coates,L.、Blakeley,M.P.、Tomanicek,S.J.、Langan,P.、Kovalevsky,A.Y.、GarcíA-Ruiz,J.M.和Ng,J.D.(2012)。《水晶学报》。F类68, 1482–1487. 科学网 交叉参考 IUCr日志 谷歌学者
Jelsch,C.、Teeter,M.M.、Lamzin,V.、Pichon-Pesme,V.,Blessing,R.H.和Lecomte,C.(2000)。程序。美国国家科学院。科学。美国,97, 3171–3176. 科学网 交叉参考 公共医学 中国科学院 谷歌学者
J.önsson,H.O.,T洗mneanu,N.,洘stlin,C.,Scott,H.A.&Caleman,C.(2015)。J.同步辐射。 22, 256–266. 科学网 交叉参考 IUCr日志 谷歌学者
Keedy,D.A.、van den Bedem,H.、Sivak,D.A.和Petsko,G.A.、Ringe,D.、Wilson,M.A.和Fraser,J.S.(2014)。结构,22, 899–910. 科学网 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Kekilli,D.、Dworkowski,F.S.N.、Pompidor,G.、Fuchs,M.R.、Andrew,C.R.、Antonyuk,S.、Strange,R.W.、Eady,R.R.,Hasnain,S.S.和Hough,M.A.(2014)。《水晶学报》。D类70, 1289–1296. 交叉参考 IUCr日志 谷歌学者
Kosinka Eriksson,U.、Fischer,G.、Friemann,R.、Enkavi,G.和Tajkhorshid,E.&Neutze,R.(2013)。科学类,340, 1346–1349. 公共医学 谷歌学者
Kovalevsky,A.Y.、Hanson,L.、Fisher,S.Z.、Mustakimov,M.、Mason,S.A.、Trevor Forsyth,V.、Blakeley,M.P.、Keen,D.A.、Wagner,T.、Carrell,H.L.、Katz,A.K.、Glusker,J.P.和Langan,P.(2010)。结构,18, 688–699. 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Kovalevsky,A.、Hanson,B.L.、Mason,S.A.、Forsyth,V.T.、Fisher,Z.、Mustakimov,M.、Blakeley,M.P.、Keen,D.A.和Langan,P.(2012)。《水晶学报》。D类68, 1201–1206. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Kurihara,K.、Tanaka,I.、Refai Muslih,M.、Ostermann,A.和Niimura,N.(2004)。J.同步辐射。 11, 68–71. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Kusaka,K.、Hosoya,T.、Yamada,T.和Tomoyori,K.,Ohhara,T.,Katagiri,M.、Kurihara,K.和Tanaka,I.&Niimura,N.(2013年)。J.同步辐射。 20, 994–998. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Langan,P.、Greene,G.和Schoenborn,B.P.(2004)。J.应用。克里斯特。 37, 24–31. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Langan,P.、Sangha,A.K.、Wymore,T.、Parks,J.M.、Yang,Z.K.、Hanson,B.L.、Fisher,Z、Mason,S.A.、Blakeley,M.P.、Forsyth,V.T.、Glusker,J.P.,Carrell,H.L.、Smith,J.C.、Keen,D.A.、Graham,D.E.和Kovalevsky,A.(2014年)。结构,22, 1287–1300. 科学网 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Leferink,N.G.H.、Han,C.、Antonyuk,S.V.、Heyes,D.J.、Rigby,S.E.J.、Hough,M.A.、Eady,R.R.、Scrutton,N.S.和Hasnain,S..(2011)。生物化学,50, 4121–4131. 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Liebschner,D.,Dauter,M.,Brzuszkiewicz,A.&Dauter(2013)。《水晶学报》。D类69, 1447–1462. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
松冈S.、杉山S.、松冈D.、广泽M.、莱图S.、阿诺H.、原原T.、一原O.、木村S.R.、村上春树S.、石田H.、Mizohata E.、井上T.和村田M.(2015)。安圭。化学。国际编辑。 54, 1508–1511. 科学网 交叉参考 中国科学院 谷歌学者
Meilleur,F.、Munshi,P.、Robertson,L.、Stoica A.D.、Crow,L.、Kovalevsky,A.、Koritsanszky,T.、Chakoumakos B.C.、Blessing,R.和Myles,D.A.(2013)。《水晶学报》。D类69, 2157–2160. 谷歌学者
Michalczyk,R.、Unkefer C.J.、Bacik J.P.、Schrader T.E.、Ostermann,A.、Kovalevsky A.Y.、McKenna,R.和Fisher S.Z.(2015)。程序。国家。阿卡德。科学。美国,pii。201502255.(印刷前Epub)谷歌学者
Müller,M.、Burghammer,M.,Flot,D.、Riekel,C.、Morawe,C.、Murphy,B.和Cedola,A.(2000)。J.应用。克里斯特。 33, 1231–1240. 科学网 交叉参考 IUCr日志 谷歌学者
Munshi,P.、Chung,S.-L.、Blakeley,M.P.、Weiss,K.L.、Myles,D.A.A.和Meilleur,F.(2012)。《水晶学报》。D类68, 35–41. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Nass,K。等。(2015).J.同步辐射。 22, 225–238. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Ogata,H.、Nishikawa,K.和Lubitz,W.(2015)。《自然》(伦敦)。doi:10.1038/nature14110。(印刷前Epub)谷歌学者
Oksanen,E.、Blakeley,M.P.、El Hajji,M.、Ryde,U.和Budayova Spano,M.(2014)。公共科学图书馆一号,9,e86651科学网 交叉参考 公共医学 谷歌学者
Petit-Haertlein,I.、Blakeley,M.P.、Howard,E.、Hazemann,I.,Mitschler,A.、Haertlein,M.和Podjarny,A.(2009年)。《水晶学报》。F类65, 406–409. 科学网 交叉参考 IUCr日志 谷歌学者
Riekel,C.(2004)。J.同步辐射。 11, 4–6. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Schoenborn,B.P.(2010)。《水晶学报》。D类66, 1262–1268. 科学网 交叉参考 IUCr日志 谷歌学者
Sheldrick,G.M.(2008)。《水晶学报》。A类64, 112–122. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Smith,J.L.、Fischetti,R.F.和Yamamoto,M.(2012)。货币。操作。结构。生物。 22, 602–612. 科学网 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
斯特恩,S。等。(2014).法拉第讨论。 171, 393–418. 科学网 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Suga,M.、Akita,F.、Hirata,K.、Ueno,G.、Murakami,H.、Nakajima,Y.、Shimizu,T.、Yamashita,K.,Yamamoto,M.,Ago,H.和Shen,J.R.(2015)。自然(伦敦),517, 99–103. 科学网 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Tanaka,I.、Kurihara,K.、Chatake,T.和Niimura,N.(2002年)。J.应用。克里斯特。 35, 34–40. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Tomanicek,S.J.、Blakeley,M.P.、Cooper,J.、Chen,Y.、Afonine,P.V.和Coates,L.(2010)。分子生物学杂志。 396, 1070–1080. 科学网 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Unno,M.、Ishikawa-Suto,K.、Kusaka,K.,Tamada,T.、Hagiwara,Y.、Sugishima,M.,Wada,K.和田,山田,T.,Tomoyori,K.(Hosoya,T.)、Tanaka,I.、Niimura,N.、Kuroki,R.、Inaka,K.)、Ishihara,M.和Fukuyama,K。美国化学杂志。Soc公司。 137, 5452–5460. 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Wan,Q.,Bennett,B.C.,Wilson,M.A.,Kovalevsky,A.,Langan,P.,Howell,E.E.&Dealwis,C.(2014)。程序。美国国家科学院。科学。美国,111, 18225–18230. 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Weber,I.T.、Waltman,M.J.、Mustakimov,M.、Blakeley,M.P.、Keen,D.A.、Ghosh,A.K.、Langan,P.和Kovalevsky,A.Y.(2013年)。医学化学杂志。 56, 5631–5635. 科学网 交叉参考 中国科学院 公共医学 谷歌学者
Weckert,E.(2015)。IUCrJ大学,2, 230–245. 科学网 交叉参考 中国科学院 公共医学 IUCr日志 谷歌学者
Winn,M.D.,Ballard,C.C.,Cowtan,K.D.,Dodson,E.J.,Emsley,P.,Evans,P.R.,Keegan,R.M.,Krissinel,E.B.,Leslie,A.G.W.,McCoy,A.,McNicholas,S.J.,Murshudov,G.N.,Pannu,N.S.,Potterton,E.A.,Powell,H.R.、Read,R.J.、Vagin,A.&Wilson,K.S.(2011)。《水晶学报》。D类67, 235–242. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Yano,J.、Kern,J.,Sauer,K.、Latimer,M.J.、Pushkar,Y.、Biesiadka,J.和Loll,B.、Saenger,W.、Messinger,J.以及Zouni,A.和Yachandra,V.K.(2006年)。科学类,314, 821–825. 科学网 交叉参考 公共医学 中国科学院 谷歌学者
Yokoyama,T.、Mizuguchi,M.、Nabeshima,Y.、Kusaka,K.、Yamada,T.和Hosoya,T.,Ohhara,T.。Kurihara,K.,Tanaka,I.和Niimura,N.(2013年)。J.同步辐射。 20, 834–837. 科学网 交叉参考 中国科学院 IUCr日志 谷歌学者
Zarychta,B.、Lyubimov,A.、Ahmed,M.、Munshi,P.、Guillot,B.、Vrielink,A.和Jelsch,C.(2015)。《水晶学报》。D类71, 954–968. 交叉参考 IUCr日志 谷歌学者
国际标准编号:2052-2525
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