2.1. 分子生物学、蛋白质表达和纯化

表达PmScsC和PmScsC的结构ΔN是以前创建的（Furlong等。, 2017)使用UniProt序列B4EV21而不使用预测的周质信号序列(即残留物22–243）。制作PmScsCΔ连接子表达构建，PmScsC中编码柔性肽连接子（残基39-KADEQQAQFRQ-49）的DNA从奇异P 供应链控制中心用引物5′-GCAATCATGGCTCTGCAGCGACGAAAGCACTGGCTACATGCC-3′和5′-GGCATGTTCTAGCCAGTCTCGTCTGCAGAGCATGC-3′进行重叠延伸PCR。然后使用连接依赖性克隆将突变基因插入pMCSG7。构建物的测序证实了编码蛋白与N末端His在同一框架内₆tag和TEV蛋白酶裂解位点，发现PmScsC残基6Δ连接子也从天冬酰胺突变为赖氨酸。在TEV蛋白酶裂解后，根据全长PmScsC的序列对蛋白质残基进行编号（从S开始₁N个₂A类_三…). 所有蛋白质均表达于大肠杆菌BL21（DE3）pLysS细胞并用固定化金属亲和力纯化色谱法，TEV蛋白酶裂解和尺寸排除色谱法如前所述（Furlong等。, 2017). 采用SDS-PAGE和考马斯染色法估计每个蛋白的纯度>95%。蛋白质的浓度通过测量A类₂₈₀样品和理论调整A类₂₈₀第页，共1页 毫克 毫升⁻¹蛋白质溶液[Abs 0.1%(w个/v（v）)]. 理论A类₂₈₀0.1%的值(w个/v（v）)根据确定ProtParam公司（Gasteiger公司等。, 2005)PmScsC、PmScsC分别为0.528、0.643和0.558ΔN和PmScsCΔ链接器。

2.2. 二硫异构酶和二硫醇氧化酶测定

PmScsC的二硫异构酶和二硫醇氧化酶活性Δ如前所述确定链接器（Furlong等。, 2017). 简言之，为了测定二硫键异构酶的活性，我们评估了该蛋白质对打乱的RNase A（scRNase A）进行重折叠的能力。0.23 毫克 毫升⁻¹(10 µM（M）)PmScsC公司ΔLinker孵化了40个 µM（M）scRNase A；在不同的时间点采集样品，用分光光度法测定RNase A活性，最终浓度为3 米M（M）胞苷3′，5′-环磷酸单酯（cCMP）。结果以仅RNase a对照活性的百分比报告，并针对仅scRNase a-阴性对照进行调整。PmScsC的二硫醇氧化酶活性Δ通过测量蛋白质在合成肽中两个半胱氨酸之间形成二硫键的能力来评估链接器。肽底物具有在N末端与铕结合的1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸（DOTA）和在C末端与赖氨酸甲氧基香豆素酰胺（MCA）结合。随着半胱氨酸被氧化，肽的末端变得非常接近，从而导致荧光增强。PmScsC公司Δ链接器（80 n个M（M）或0.002 毫克 毫升⁻¹)与8个 µM（M）使用Synergy H1 Hybrid平板阅读器（美国佛蒙特州BioTek）监测肽底物的含量和荧光随时间的增加，在340和615的激发和发射波长下读取荧光 nm。肽氧化速率与原型二硫醇氧化酶EcDsbA的活性有关。将二硫键异构酶和二硫醇氧化酶测定分别重复两次和三次，并报告各自的平均值和标准偏差。

2.3. 结晶

PmScsC的初始结晶命中ΔN和PmScsCΔ在昆士兰大学远程操作结晶和X射线衍射设施（UQ ROCX）中，使用蚊子机器人（英国墨尔本TTP Labtech）设置的商用结晶屏，在96周的悬挂滴蒸气扩散实验中发现了链接物。所有结晶实验均在293培养 并使用岩石成像仪进行监测摇滚乐制作者软件（Formulatrix，美国马萨诸塞州沃尔瑟姆）。

PmScsC的衍射良好的杆状晶体ΔN是在一个96 well的筛板中获得的，筛板由200个筛板组成 nl PEGRx HT（美国加利福尼亚州Aliso Viejo Hampton Research）条件C10[0.1 M（M）三水醋酸钠pH 4.5，30%(w个/v（v）)PEG单甲醚5000]和200 nl 38号 毫克 毫升⁻¹PmScsC公司Δ10中为N 米M（M）HEPES pH 7.4。全氟聚醚（美国加利福尼亚州Aliso Viejo，Hampton Research）用于在液氮中闪蒸冷却晶体之前对其进行低温保护。

PmScsC针状晶体Δ在商业屏幕JCSG的F12井中获得链接器-加（Molecular Dimensions，Newmarket，England），然后在24孔板栅筛中围绕原始条件进行优化。这种优化产生了更坚固、衍射更好的晶体。数据收集自使用1生长的晶体 0.1微升 M（M）HEPES pH值7，32%(v（v）/v（v）)Jeffamine M-600和1 40微升 毫克 毫升⁻¹PmScsC公司Δ链接器输入10 米M（M）HEPES pH 7.4、150 米M（M）氯化钠。晶体在结晶条件下加20%乙二醇进行低温保护，然后在低温流中闪蒸冷却（100 K） ●●●●。

2.4. 数据收集、结构解决和细化

PmScsC的数据Δ使用0.95370的波长收集N结构 100时的奥数 澳大利亚同步加速器MX2光束线上的K，使用蓝色-Ice软件（McPhillips等。, 2002). 数据经过处理并在三角中缩放空间组 P（P）312使用XDS公司（卡布施，2010年),无意义（埃文斯，2006年)和SCALA公司（埃文斯，2006年). 通过以下方法获得相位分子置换在里面相位器（麦考伊等。, 2007)使用肠道沙门菌伤寒血清型ScsC（PDB条目4gx赫兹; 牧羊人等。, 2013)作为模型。在中通过迭代模型构建改进了初始模型库特（埃姆斯利等。, 2010)和精炼在里面菲尼克斯（亚当斯等。, 2010). 最终PmScsC的质量ΔN模型评估使用摩尔概率（陈）等。, 2010)并且有一个R（右）_自由的20.8%的值和R（右）_工作分辨率为2.15时的17.5% Å。坐标和结构因子已根据代码保存在蛋白质数据库中6个月和原始数据图像可从https://doi.org/10.14264/uql.2018.843.

PmScsC的数据Δ在UQ ROCX低温条件下收集链环结构（100 K） 使用Rigaku FR-E超明亮X射线发生器，产生波长为1.54187的X射线 欧，和一个日惹土星944 CCD区域探测器。数据收集是通过Rigaku进行的CrystalClear公司（v.2.0）程序。数据在中处理iMosflm公司（v.7.1.3；巴提耶等。, 2011)带有空间组 H（H）32（也称为R（右）32:小时)并按比例增加漫无目的的（Evans&Murshudov，2013年)如在中央对手方清算所4套房（v.6.5.008；Winn等。, 2011). 由于UQ ROCX的探测器距离限制，衍射数据的最高分辨率限制为2.08 Å。晶体强烈衍射，导致非常高的平均值我/σ(我)值（总体27.2，最高分辨率外壳中11.8）。该结构分阶段建造分子置换使用相位器（麦考伊等。, 2007)和催化域紧凑型PmScsC晶体结构（残留物47–224；PDB条目4xvw（四驱车）)被用作搜索模型。然后手动将三聚化域（不含11-氨基酸柔性连接体）构建到库特（埃姆斯利等。, 2010). 使用轮次菲尼克斯定义和手动调整库特，参考摩尔概率（陈）等。, 2010). 决赛R（右）_自由的和R（右）_工作值分别为21.0%和17.4%，分辨率为2.08 Å。坐标和结构因子已根据代码保存在蛋白质数据库中6英里小时和原始数据图像可从https://doi.org/10.14264/ucl-2018.842所有结构图均于年制作PyMOL公司（v.1.6；Schödinger）和结构定线库特使用“叠加”命令（Emsley等。, 2010)与C对齐^α用最小二乘法计算原子。这个联系人来自的程序中央对手方清算所4套房（优胜者等。, 2011)用于分析PmScsC和PmScsC三聚体柄之间的相互作用Δ链接器。数据收集和细化统计如表1所示.

2.5. SAXS公司

SAXS数据是在澳大利亚同步加速器（Kirby）的SAXS/WAXS光束线上收集的等。, 2013). 使用散漫的大脑软件（v.2.71；澳大利亚同步加速器；https://archive.synchrotron.org.au/aussyncbeamlines/saxswaxs/software-saxswax)并对数据进行了溶剂散射、样品透射和检测器灵敏度校正。0.1、0.5、2.0、5.0和10.0 毫克 毫升⁻¹PmScsC样品ΔN是通过稀释30 毫克 毫升⁻¹库存10 米M（M）HEPES pH 7.4，150 米M（M）氯化钠。对于PmScsC和PmScsCΔ链接器，在离心浓缩过程中采集样品，并且这些样品的浓度（基于A类₂₈₀读数）调整为0.1、0.5、2.0、5.0或10.0 毫克 毫升⁻¹在10中 米M（M）HEPES pH 7.4、150 米M（M）氯化钠。这些样品以及空白（10 米M（M）HEPES pH 7.4，150 米M（M）NaCl）装入96孔板中（表2; Trewella公司等。, 2017). 根据多孔体积（费歇尔等。, 2010)和来自我（0）使用由蛋白质序列确定的对比度和部分比体积，使用护根物（v.1.1；惠顿等。, 2008). 对于PmScsCΔN、 数据处理和吉尼亚分析使用普里默斯（v.3.2；科纳列夫等。, 2003). 对距离分布函数[第页(第页)]根据实验数据生成，使用GNOM公司（第4.6节；Svergun，1992年)，从中我（0）中，R（右）_克和D类_最大值已确定。达明（v.5.3；Svergun，1999年)用于生成蛋白质的16个虚拟原子模型，这些模型的平均值使用达马弗（v.2.8.0；Volkov和Svergun，2003年)，平均结构的分辨率使用SASRES公司（图卡宁等。, 2016). 在平均过程中使用了所有16个伪原子模型。PmScsC的模型散射曲线ΔN（SASBDB IDSASDEK4号机组)是根据晶体结构（PDB条目6烯)使用CRYSOL公司（v.2.8.3；斯维尔贡等。, 1995).

对于PmScsC（SASBDB IDSASDER4号机组)和PmScsCΔ链接器（SASBDB IDSASDEQ4系统)，数据被建模为模型散射曲线的线性组合，以量化溶液中不同低聚态的比例（Hu等。, 2012). PmScsC单体的结构（链A类)，二聚体（链A类和B类)和三聚体（链A类,B类和C)是从珊瑚先前针对PmScsC的SAXS数据优化的模型（SASBDB IDSASDB94标准; 弗隆等。, 2017). PmScsC的结构Δ连接单体（链A类)，二聚体（链A类和B类)和三聚体（链A类,B类和C)是从晶体结构PmScsC的Δ链接器（PDB条目6英里小时). 使用以下公式计算每个低聚物的散射曲线CRYSOL公司（第2.8.3节；Svergun等。, 1995). 计算的散射曲线（单位为e²)乘以第页_{e（电子）}²（厘米² e（电子）⁻²)×N个_A类（摩尔⁻¹) × 10⁻³（l） 厘米⁻³)=4.78181×10⁻⁵（厘米⁻¹ e（电子）⁻² 摩尔⁻¹ l） ●●●●。这种归一化允许在绝对尺度上拟合实验数据而产生的系数被解释为溶液中每个低聚物的摩尔浓度。对于PmScsC，单体和三聚体散射曲线的线性组合拟合到每个浓度的散射数据。此外，为了减少自由参数的数量，对每个SAXS曲线的单体浓度进行了优化，并使用通用的平衡常数， K（K）_t吨()三聚体的浓度根据K（K）_t吨和莫莫默浓度。对于PmScsCΔLinker，单体、二聚体和三聚体的线性组合散射曲线被拟合到每个浓度的散射数据。再次，为了减少自由参数的数量，还优化了每个SAXS曲线的单体浓度以及两个常见的平衡常数，K（K）_d日()、和K（K）_t吨(). 二聚体的浓度根据K（K）_d日以及单体浓度，而三聚体的浓度是根据K（K）_t吨单体和二聚体的浓度。根据每个成分的模型浓度，还计算了每个SAXS数据集的总蛋白质浓度，这些数据见表3这些计算的浓度系统地低于测量的蛋白质浓度。

3.1. PmScsC公司ΔN个晶体结构和SAXS分析

PmScsC的设计及其生化特性Δ之前曾报道过N（Furlong等。, 2017). 目前的工作报告了晶体结构此变体的。PmScsC晶体ΔN个突变体衍射到2.15的分辨率 奥在澳大利亚同步加速器。这个晶体结构使用分子置换只有一个PmScsCΔN分子位于非对称单元（表1，图2一和2b条). 在晶体包装中，PmScsCΔN与六个与对称性相关的分子接触，但没有一个与催化基序或其周围带正电的表面贴片结合。PmScsC的结构ΔN与催化域存在于之前报告的三个PmScsC结构中的每一个结构中（有效值0.51–0.68 O代表C^α174个残基的原子排列在链之间A类每个结构；图2c（c）). 小角度散射（表2)用于确定PmScsC的低分辨率溶液结构ΔN（图3). PmScsC的散射数据ΔN代表单体球状颗粒，与根据晶体结构PmScsC的ΔN（PDB条目6烯). 这个晶体结构也显示出与从散射数据导出的哑原子模型的良好一致性（图3c（c）).

图2 PmScsC的结构表征ΔN(一)PmScsC的结构ΔN变量。结构特征的颜色如图1所示二级结构元素根据本地PmScsC结构（Furlong等。, 2017). (b条)PmScsC中催化区的电子密度ΔN.钢丝网代表F类o个−F类c（c）电子密度差图（生成于菲尼克斯定义结构中省略了感兴趣的区域）轮廓为3σ并显示在a 2中 每个原子的半径。(c（c）)PmScsC结构线形立体图ΔN（绿色），链残余物46–221A类从紧凑型（青色；PDB条目4xvw（四驱车）)，过渡（黄色；PDB入口5idr（国际存托凭证）)和扩展（洋红色；PDB条目5标识4)PmScsC结构（Furlong等。, 2017; 均方根深0.51–0.68 奥，174个残基对齐）。这种叠加表明，无论是否存在三聚结构域，结构都是相似的。

图3 PmScsC的小角度X射线散射数据ΔN(一)PmScsC的测量散射数据ΔN.刚体模型的散射剖面显示为覆盖在PmScsC散射数据上的实心黑线ΔN个[χ2=1.12；CorMap测试（Franke等。, 2015)，302分，C= 14,P（P）= 0.018]. 插图：吉尼亚阴谋对于PmScsCΔN个(R（右）2= 0.991). (b条)对距离分布函数，第页(第页)，从散射数据中导出，表示PmScsC的球状结构ΔN（为清晰起见，乘以系数4），最大尺寸为～55 Å。(c（c）)PmScsC的可能形状Δ从16个哑原子模型的过滤平均值中获得的N（绿色信封）：χ2= 1.079 ± 0.001; NSD=0.522±0.007；分辨率=19±2 Å。中的图像(c（c）)是使用生成的PyMOL公司，其中灰色形状表示对齐的哑原子模型和晶体结构显示为与过滤模型对齐的功能区图（深绿色）。

3.2、。PmScsC的活动Δ链接器

天然PmScsC的一个关键结构特征是一种11-氨基酸柔性连接体，位于三聚化茎中，与催化域。这个短区域促进了SAXS分析中观察到的晶体结构中的构象变化和三聚蛋白的动态运动（Furlong等。, 2017). 为了更好地理解柔性链接器的作用，我们设计了一个PmScsCΔ删除11-残基连接子的连接子变体，并在标准分析中描述其功能。我们首先评估了PmScsC的活性Δ干扰RNase A分析中的连接子，发现其活性较差，基线活性类似于典型的二硫醇氧化酶，如EcDsbA或PmScsCΔN（图4一). 然后，我们在模型肽二硫醇氧化酶分析中评估了其活性，其中EcDsbA和PmScsCΔN均为激活状态。然而，与单体蛋白EcDsbA和PmScsC不同ΔN、 PmScsC公司Δ在二硫醇氧化酶分析中，连接物也不活跃（图4b条). 二硫异构酶活性被认为与齐聚硫氧还蛋白折叠蛋白（Furlong等。, 2017; Ke（克）等。, 2006; 孙和王，2000)，所以我们有兴趣确定PmScsCΔ连接子形成三聚体，如全长天然蛋白，或单体，如截短的PmScsCΔN变量。

图4 PmScsC的生化活性Δ链接器。(一)PmScsC的能力Δ杂乱RNase A中异构化错误二硫键的连接子较差；它甚至低于二硫醇氧化酶EcDsbA。(b条)PmScsC公司Δ连接剂二硫醇氧化酶活性较差；它比单体PmScsC低得多ΔN和类似于蛋白质二硫键异构酶EcDsbC和PmScsC。星号表示之前发布的数据（Furlong等。, 2017). 两个面板中的误差条表示平均值的标准偏差。

3.3. 这个晶体结构揭示了PmScsC的三聚体形式Δ链接器

先前报道的天然PmScsC的三种晶体结构表明，连接体残基可以采用螺旋（延伸信息）、链（中间信息）或环（紧密信息）二级结构（Furlong等。, 2017). 在扩展信息中晶体结构连接体采用螺旋构象，从而形成一个很长的螺旋（35个残基，约9.5圈；图5一)从三聚体柄延伸到催化域PmScsC的。

图5 PmScsC的晶体结构Δ链接器。(一)扩展PmScsC（PDB条目）的单原聚体5标识4). (b条)PmScsC单原聚体Δ链接器。晶体结构的不同特征如图1所示着色标记了每个结构的N末端，并指出了在天然结构中柔性连接体两侧的残基的位置。(c（c）)PmScsC中删除区域周围的电子密度Δ链接器结构。金属丝网代表F类o个−F类c（c）电子密度差图（生成于菲尼克斯定义其中感兴趣的区域从结构中省略）轮廓为3σ并显示在a 2中 每个原子的半径。

我们解决了晶体结构PmScsC的Δ链接器分辨率为2.08 使用分子置换（表1，图5b条和5c（c）). 变体在同一个晶体中结晶空间组(H（H）32）和结晶条件作为扩展信息PmScsC（PDB条目5标识4; 弗隆等。, 2017). 然而，PmScsC的单位-细胞尺寸Δ链接器比扩展的PmScsC结构短(一 = b条 = 64.0,c（c）= 299.8 与之相比一=b条= 86.7,c（c） = 330.0 Å). 这个晶体结构PmScsC的Δ链接器，如晶体结构PmScsC的扩展形式，是通过晶体对称的三聚体，在非对称单元（图6一). 据报道，在三种天然PmScsC晶体结构中，连接区两侧呈螺旋状的区域直接连接在PmScsC中Δ链接器和也是螺旋形的。

图6 PmScsC的三聚Δ链接器。(一)的侧视图和俯视图催化域在中晶体结构PmScsC的Δ链接器。这个晶体结构显示三个月晶体对称性。在许多方面晶体结构类似于中显示的本地扩展PmScsC(b条)（PDB条目5英寸4). 然而，连接三聚化域和催化域在PmScsC中较短Δ由于删除链接器而导致的链接器[cyan in(b条)]. 在两者中(一)和(b条)使用图1中使用的方案对蛋白质进行着色. (c（c）)静电表面电位的催化域PmScsC的Δ链接器原聚体结构。静电计算使用APBS公司（朱鲁斯等。, 2018)并在-7.5处绘制等高线 千吨 e（电子）−1（红色）和+7.5 千吨 e（电子）−1（蓝色）。橙色实心圆圈表示催化半胱氨酸的位置；PmScsC中与相邻催化域紧密接触的催化域区域周围有黑色椭圆形Δ链接器晶体结构。(d日)PmScsC三聚茎的疏水核Δ链接器；形成疏水核的残基侧链呈粉红色。(e（电子）)介导两个PmScsC三聚茎间侧链极性和静电相互作用的氨基酸残基ΔLinker原聚体。黑色虚线表示氢键，所涉及的残留物被标记。

这个晶体结构PmScsC的Δ除了长螺旋线缩短了近三圈外，链接器与扩展的PmScsC类似（图5一和5b条). PmScsC晶体三聚体中的缩短螺旋Δ与天然延伸构象相比，Linker使三个催化域在变体中更接近。从原生质体的催化半胱氨酸之间的距离可以明显看出这种接近性：15 PmScsC中的AuΔ链接器和34 在扩展的本机结构中为？（在C^βCys84的原子；图6一和6b条).

PmSCs公司Δ链接器晶体结构还揭示了三聚体的每个催化域之间的相互作用。表面界面形成于靠近C的带正电贴片之间XX年C图案催化域一个原聚体和另一个中性/疏水性补丁（图6c（c）). 该界面不是在扩展的PmScsC结构中形成的，该结构使这两个区域都暴露于溶剂中，也不是由PmScsC中的晶体堆积形成的ΔN结构。

所有三种天然PmScsC晶体结构的三聚茎为α-具有疏水核的螺旋状结构，表面暴露的极性/带电残留物之间有氢键。这些特征在晶体结构PmScsC的Δ链接器（图6d日和6e（电子）). 然而，应注意PmScsCΔLinker在N末端有一个额外的意外突变（Asn6Lys）。在三种天然晶体结构中，Asn6残基的侧链与Gln9主链形成分子内氢键。在PmScsC中Δ链接器晶体结构Gln9的侧链采用与所有三种天然PmScsC结构相同的构象，但突变的残基Lys6没有与Gln9主链形成等效氢键。这种特殊氢键的缺乏可能会增加N端无序，尽管晶体结构这表明氢键和疏水接触对三聚反应几乎没有影响。

3.4. SAXS揭示了PmScsC的低聚物状态Δ链接器依赖于浓度

我们之前观察到PmScsC RHP变体（其中柔性连接子被刚性螺旋取代）与天然蛋白质一样形成三聚体，但在蛋白质二硫键异构酶分析（Furlong等。, 2017). 这种缺乏活动被认为是由于催化域使用小角度散射（Furlong）在溶液中观察到的运动等。, 2017). 这一发现导致了这样一种假设，即有效的蛋白质二硫键异构酶活性需要至少两个能够相互独立移动的催化结构域（例如二聚体或三聚体）（Furlong等。, 2017). 我们目前的结果表明，PmScsCΔLinker还形成三聚体，并且作为蛋白质二硫异构酶也不活跃。因此，我们预计，蛋白质二硫键异构酶活性的缺乏是由于催化域，并试图在使用小角度散射的解决方案中证实这一点。

出乎意料的是，PmScsC的初始SAXS数据ΔLinker表现出强烈的浓度依赖性，与PmScsC不同低聚物形式之间的平衡一致Δ连接体（单体、二聚体和三聚体）。这一结果提出了一种可能性，即在低浓度下，野生型蛋白质也可能是单体、二聚体和三聚体的混合物，这也可能影响其功能或调节。为了进一步研究这种可能性，从本地PmScsC收集SAXS数据（图7)和PmScsCΔ链接器（图8)浓度在0.1到10.0之间 毫克 毫升⁻¹（表2). 最低浓度（0.1 毫克 毫升⁻¹)的形状第页(第页)天然PmScsC的功能与高浓度PmScsC的形状不同，表明野生型蛋白有一定的解离作用。试验了许多分析方法，但发现将单体和三聚体散射的线性组合拟合到每个浓度的数据中效果最好（图7和表3). 结果如表3所示对于所采用的两种建模方法（单个模型的全局拟合平衡常数适用于所有数据集并且独立地拟合每个数据集）。然而，可以看出，在低浓度下存在一些分歧，整体拟合预测溶液中单体的比例远低于独立拟合。因此，具有较高信噪比的高浓度数据集可能对确定的平衡常数。尽管如此，这两种分析方法都表明，材料的大部分在所有浓度下都以三聚体形式存在。对于PmScsCΔ链接器，结果大不相同；的形状第页(第页)曲线随评估的每个浓度而显著变化。我们再次尝试了许多方法来拟合这些数据，但发现将单体、二聚体和三聚体散射的线性组合拟合到每个浓度的数据效果最好（图8和表3). 虽然分析工作顺利，但由于溶液中单体和二聚体形式的结构未知，这一分析受到了限制。在每一种情况下，我们都做了一个简单的假设，即单体采用了相应的原聚体的结构晶体结构二聚体可以通过从三聚体中除去一个原聚体来表示晶体结构。我们还知道，原生PmScsC在解决方案中是动态的（Furlong等。, 2017). 虽然模型曲线为散射数据提供了合理的拟合，但实验数据与模型之间存在系统性差异，尤其是在较高浓度下。建模的局限性（缺乏准确的模型、动态运动）解释了大多数这种变化。

图7 本机PmScsC的SAXS数据。(一)在～0.1处收集的分散数据 毫克 毫升−1（蓝色；χ2=2.55），～0.5 毫克 毫升−1（橙色；χ2= 7.05), ∼2.0 毫克 毫升−1（绿色；χ2 = 72.85), ∼5.0 毫克 毫升−1（红色；χ2=371.94）和～10.0 毫克 毫升−1（灰色；χ2= 815.23). 每个散射曲线上的叠加线（黑色）是单体和三聚体散射曲线的拟合线性组合。(b条)对距离分布函数，第页(第页)，从按浓度归一化的散射数据中得出，0.1 毫克 毫升−1数据集与其他浓度的数据集略有不同（全部重叠），表明溶液中存在最低浓度的单体的可能性。(c（c）)根据拟合的全局优化模型，以单体和三聚体形式存在的蛋白质比例表明，在总蛋白质浓度高于0.05时 毫克 毫升−1（计算浓度，或0.1 毫克 毫升−1测量浓度）蛋白质几乎完全以三聚体的形式存在于溶液中。

图8 PmScsC的SAXS数据Δ链接器。(一)在～0.1处收集的分散数据 毫克 毫升−1（蓝色；χ2= 1.27), ∼0.5 毫克 毫升−1（橙色；χ2= 2.19), ∼2.0 毫克 毫升−1（绿色；χ2= 6.89), ∼5.0 毫克 毫升−1（红色；χ2=37.59）和~10.0 毫克 毫升−1（灰色；χ2= 177.29). 每个散射曲线上的叠加线（黑色）是单体和三聚体散射曲线的拟合线性组合。(b条)对距离分布函数，第页(第页)，从按浓度归一化的散射数据导出，表明溶液的低聚物组成高度依赖于浓度。(c（c）)根据拟合的全局优化模型得出的以单体、二聚体和三聚体形式存在的蛋白质比例表明，在低浓度下，单体物种在溶液中占主导地位。三聚体的浓度缓慢上升，预计在38℃时达到～0.2的蛋白质分数 毫克 毫升−1，这是进行结晶的浓度。

总的来说，SAXS分析表明，在最低浓度为0.1的溶液中，只有1–21%的天然PmScsC作为单体存在 毫克 毫升⁻¹; 我们得出结论，三聚体是溶液中天然蛋白质的主要形式，即使在低浓度下也是如此。对于变体PmSCsΔ链接器是一个不同的故事；蛋白质在不同的蛋白质之间处于平衡状态齐聚状态。0.1时 毫克 毫升⁻¹约97%的PmScsCΔ链节溶液以单体的形式存在，而～3%以二聚体的形式出现，三聚体可以忽略不计。10点 毫克 毫升⁻¹这些比例变化为～40%单体、～48%二聚体和～12%三聚体。