1.简介

2003年春季，中国广东省首次发现的非典型肺炎疫情（称为严重急性呼吸系统综合征（SARS））蔓延至多个国家（马拉等。, 2003). 加拿大国家微生物实验室从多伦多的一名患者身上获得了Tor2分离物，并在非洲绿猴肾（Vero E6）细胞（Marra等。, 2003). 这种冠状病毒已被世界卫生组织公开命名为“SARS冠状病毒”（Marra等。, 2003). 这种冠状病毒已被确定为引起严重急性呼吸综合征（SARS）的独特病理实体，2003年，SARS在全球感染了8000多人，导致774人死亡。

冠状病毒是单链阳性RNA病毒，是包膜病毒家族的成员，其中包括大量感染不同动物物种的病毒（Siddell等。, 1983). 与这些病毒相关的主要疾病是呼吸道和肠道感染，尽管也会发生肝脏和神经系统疾病（Siddell，1995). 虽然SARS冠状病毒（SARS-CoV）在形态学上是一种冠状病毒，但它与已知的三类冠状病毒中的任何一类都没有密切关系，因此有人建议将其定义为第四类（第4组）冠状病毒等。, 2003).

表面糖蛋白类包膜病毒对病毒的进入和复制至关重要。这些包膜蛋白介导病毒粒子最初附着到细胞上以及随后病毒和细胞膜的融合，从而将病毒内容物释放到宿主细胞中（Eckert&Kim，2001b条). 与包括冠状病毒在内的其他包膜RNA病毒一样，基因组测序表明SARS-CoV包膜棘突（S）蛋白包含高度保守的七重区（HR1和HR2），这些区域在病毒膜融合中非常重要。这种七重区已成功用作许多病毒中病毒进入/融合抑制剂的靶点（Chan&Kim，1998; Eckert&Kim，2001年b条). 一般认为，包膜蛋白在病毒融合过程中经历了一系列构象变化。HR1和HR2区域被认为是该过程中的重要模块/域，并在不同融合状态下显示出不同的构象（Eckert和Kim，2001b条). 在目前的模型中，包膜融合蛋白至少有三种构象状态：融合前的天然状态、融合前的发夹中间状态和融合后的发夹状态（Chan等。, 1997; Eckert&Kim，2001年b条). 在这些状态转换过程中，HR1和HR2以中间构象状态暴露，但在融合后状态中相互结合形成线圈结构。因此在体外引入人力资源肽类在中间状态下与内源性HR对应物竞争，防止在融合后状态下转变为HR1/HR2线圈束的形成。一些人力资源肽类或类似物已被证明是病毒融合的有效抑制剂（Eckert&Kim，2001一,b条; 根等。, 2001).

膜融合是包膜病毒感染的关键步骤。螺旋-螺旋束构象被认为对于使两个类脂膜（细胞膜和病毒膜）彼此接近很重要，从而使膜融合以便于病毒进入。HR1/HR2线圈束也称为病毒融合蛋白的融合核心（Eckert&Kim，2001b条). 迄今为止，已经确定了几个融合核心的晶体结构，包括HIV gp41、HRSV F、流感病毒HA、埃博拉病毒GP和MHV（Bullough等。, 1994; 陈等。, 1997; 马拉什凯维奇等。, 1999; 徐，刘等。, 2004; 赵等。, 2000). 我们已经解决了晶体结构并提出了冠状病毒介导的病毒融合的分子机制（Xu，Liu等。, 2004). 然而，SARS-CoV棘突蛋白融合核心的详细结构尚不清楚。

我们以前的研究表明，来自SARS-CoV棘突蛋白的HR1和HR2复合物也形成了典型的稳定三聚体α-螺旋束（Xu，Zhu等。, 2004). 在这里，我们报道了SARS-CoV尖峰蛋白融合核心的纯化、结晶和初步晶体学研究。

2.材料和方法

3.结果和讨论

SARS-CoV 2-螺旋蛋白结构在几种条件下都可以很容易结晶，而使用0.1米乙酸钠pH 2.5，13%(五/五)聚乙二醇4000，0.02米精脒.4HCl（图1). 从单晶中收集到2.8º的衍射数据。这些晶体属于空间组 C类2，带晶胞参数一= 121.2,b条= 66.3,c（c） = 70.0 Å,α=γ= 90,β= 107.4°. 假设在非对称单元，马修斯数(V（V）_米)约1.7º^三 Da公司⁻¹计算出溶剂含量约为28%。选定的数据统计如表1所示.

表1 严重急性呼吸系统综合征2-螺旋线的数据收集和处理统计 “空间”组 C类2 单位-细胞参数（Ω，°） 一= 121.2,b条= 66.3,c（c）= 70.0,β= 107.4 波长（Ω） 1.5418 分辨率极限（Ω） 2.8 观察到的反射 27312 独特的反射 11974 完整性（%） 91.4 (80.8) 我/σ(我) 5.7 (1.2) R（右）合并(%) 13.9 (51.1) ‡R（右）合并=，其中〈我小时〉是观测值的平均值我国际卫生组织反射的小时.

图1 悬滴法生长的典型SARS 2-螺旋蛋白晶体米乙酸钠pH 2.5，13%(五/五)桩号4000，0.02米精脒.4HCl。

使用Rigaku RU2000旋转铜节点X射线发生器和MAR 345成像探测器从单晶中收集SARS-CoV 2-螺旋的X射线衍射数据（图2一和2b条). 晶体到探测器的距离为120 mm，曝光时间为600 s，振荡角度为1°，波长为1.5418Ω。

图2 (一)SARS 2-螺旋晶体的典型X射线衍射图。衍射图像是在MAR 345成像探测器上采集的。振荡范围为1°。(b条)图2所示区域的放大图像(一).

收集的数据被编入索引并用DENZO公司和电子秤组件（Otwinowski&Minor，1997年). 这个晶体结构SARS的2螺旋由分子置换带有MHV 2螺旋结构（PDB代码1个工作日)作为搜索模型。显然晶体结构SARS-CoV棘突蛋白的融合核心将提供病毒融合核心结构和SARS冠状病毒棘突蛋白介导的病毒融合机制的详细图片。这将为基于结构的融合抑制剂设计开辟一条新途径肽类或肽类似物，例如小分子，用于这种新出现的传染病。