当小鼠执行概率巴甫洛夫条件反射任务时，监测胆碱能活动。小鼠被固定头部，并聆听不同频率的听觉刺激，这表示可能的奖赏和不可能的惩罚，或可能的惩罚和不太可能的奖励。用两种方法测量胆碱能活性。首先，用纤维光度法对胆碱能神经元进行体钙成像。其次，进行细胞外电生理记录，并使用光遗传标记鉴定任务执行小鼠的胆碱能神经元。该数据集包含小鼠的纤维光度数据、电生理数据和行为数据。

如前所述进行行为训练（Hegedus等人，2021年，使用开源头戴式装置对小鼠进行概率巴甫洛夫条件反射训练协议）。简单地说，小鼠已经习惯了头部固定装置，并被训练在头部固定装置中听声音和收集水奖励。不同频率的两个音调与可能的奖赏/不可能的惩罚或不可能的奖惩/可能的惩罚相关（12 kHz音调预测80%的水奖赏，10%的空气缓冲惩罚，10%的遗漏；4 kHz音色预测25%的水奖罚，65%的空气缓冲处罚，10%的省略）。

胆碱能神经元的体钙成像通过纤维光度法（双纤维光度法设置，Doric Neuroscience）进行，并通过Doric Studio软件在线可视化。将两个LED光源（465 nm，405 nm）导入荧光迷你立方体（iFMC4，Doric Neuroscience）。光由双通道LED驱动器的命令电压进行振幅调制（LEDD_2，Doric Neuroscience，465 nm波长的光以208 Hz调制，405 nm波长以572 Hz调制）。在培训期间，将光导入直径为400µm的跳线光纤，并连接到光纤植入物。使用相同的光纤收集双侧发射的荧光信号，用集成在迷你立方体中的500-550nm荧光检测器检测。发射的信号以12 kHz的频率进行采样，以硅胶进行解码，并以*.csv格式保存。

使用四极电极进行慢性细胞外电生理记录，如Hegedus等人，2021年，巴甫洛夫条件反射期间行为显著刺激对腹侧苍白球e型的差异募集所述。我们对ChAT-Cre小鼠的胆碱能神经元进行了光遗传学标记，详见Hangya等人，2015年，《通过强化反馈快速招募中枢胆碱能神经元》。

相关代码位于https://github.com/hangyabalazs/cholinergic_Pavlovian_analysis网站.