Six1型是哺乳动物肾脏早期器官发生所必需的

小鼠永久肾的发育始于胚胎第11天左右，从后肾间质和输尿管芽开始，这两个细胞都是通过两个组织之间的诱导相互作用从中间中胚层发育而来的(Lechner和Dressler，1997年;Kuure等人，2000年;Schedl和Hastie，2000年). 输尿管芽是由Wolffian管产生的上皮管，它侵入后肾间质或基细胞。一旦芽和间充质相遇，就会发生一系列相互作用的诱导事件；因此，输尿管芽生长并分支形成尿收集系统，间质增生并分化为肾单位。这个相互作用的过程一直持续到成熟肾脏的形成。尽管尚不清楚后肾间质是通过诱导输尿管芽的形成而启动器官发生的，还是在输尿管芽出芽之前，最初的信号来自Wolffian导管，最近的遗传学和分子研究表明，后肾间质可能首先被确定，间质信号可能促进输尿管芽的形成（由Vainio和Lin，2002年). 然而，目前尚不清楚哪些基因决定了后肾的起源，哪些实际分子控制着后肾间质的形成。

研究表明，如果没有后肾间质，收集系统和肾单位都无法形成(阿什利和莫斯托菲，1960年). 因此，功能性后肾间质的形成是肾脏正常发育所必需的。最近，基因失活和原位杂交实验表明，一些转录因子在介导后肾间质形成中发挥作用。这个富士康1编码翼螺旋蛋白的基因被证明在定位间充质中起作用，因为富士康1^-/-小鼠，后肾间质异常地在前面形成，这导致输尿管太向前生长或形成多条输尿管(Kume等人，2000年). 同源异形盒基因Lim1型从一开始就在中间中胚层表达，并已证明对所有肾脏都是必需的(Tsang等人，2000年). 配对盒基因Pax2（帕克斯）在E8.5的中间中胚层和E10.5的后肾间质、Wolffian管和输尿管芽中表达(Torres等人，1995年).帕克2^-/-小鼠不能形成任何肾脏，也没有输尿管芽，尽管后肾间质可以在形态学上观察到(Torres等人，1995年;Brophy等人，2001年). 最近的研究表明帕克2原因Gdnf公司后肾间质失去表达，以及Pax2（帕克斯）调节Gdnf公司体外转录(Brophy等人，2001年). 眼睛缺失1(埃亚1)编码转录辅激活子的基因只在后肾间质中表达埃亚1^-/-小鼠出现肾发育不全，其后中胚层不能产生Gdnf(Xu等人，1999年;Buller等人，2001年).销售1编码锌指蛋白，也表达于后肾间质和销售1^-/-由于输尿管芽发育不全，小鼠出现肾小管形成障碍(Nishinakamura等人，2001年). 转录因子Wt1在诱导前首先在后肾间质中表达重量1-敲除小鼠输尿管芽未能从Wolffian管中生长出来，后肾间质随后凋亡，导致肾脏发育完全失败(Kreidberg等人，1993年). 然而，这些调节基因在后肾早期诱导过程中如何发挥作用以及它们是否相互作用尚不清楚。此外，控制后肾间质形成的分子途径尚未建立。

胶质源性神经营养因子（Gdnf）是一种间充质衍生信号，作用于分布在输尿管上皮的受体酪氨酸激酶（Ret）和Gfrα1共受体，并诱导其产生侵入后肾间质的输尿管芽(Sainio等人，1997年;萨马尔和萨里奥拉，1999年). 事实上Gdnf，c-Ret公司和Gfr公司α1显示出类似的输尿管芽生长扰动(Schuchardt等人，1994年;Moore等人，1996年;Pichel等人，1996年;Sanchez等人，1996年;Cacalano等人，1998年). 尽管Gdnf及其受体c-Ret和Gfrα1在早期肾脏形态发生中作为诱导信号具有重要意义，但这种信号转导途径究竟是如何调控输尿管芽的发育的，以及调控输尿管芽表达的机制Gdnf公司在间充质中还没有被很好地理解。

这个硅x1该基因与眼果蝇(所以)基因，早期调节果蝇属眼睛形成(Cheyette等人，1994年;Serikaku和O'Tousa，1994年). 在果蝇，所以与苍蝇协同作用第6页基因无眼的(依),眼睛缺失(艾娅)和腊肠犬(数模转换器)调节眼睛的形态发生（综述Treisman，1999年). 哺乳动物六基因家族由六个成员组成(Six1-6型)共有两个高度保守的结构域，一个同源结构域（HD）和一个对蛋白质相互作用至关重要的特殊六域（SD）(Kawakami等人，1996年;Chen等人，1997年;Pignoni等人，1997年). 除了眼睛之外，这六个基因还广泛与Pax、Eya和Dach（哺乳动物腊肠犬)哺乳动物器官发生过程中许多组织中的基因，表明其基因产物与保守Pax的存在可能存在相互作用-埃亚-六个监管层级(Oliver等人，1995年;Oliver等人，1995年b;Xu等人，1997年a;Xu等人，1997年b;Xu等人，1999年;Xu等人，2002年). 在哺乳动物肾脏发育早期，Six2型在诱导肾脏器官发生前后在后肾间质中表达，其在后肾间质中的表达为埃亚1-从属的(Xu等人，1999年).

同样，我们最近发现硅x1也在诱导前后的后肾间质中表达。然而，六个基因在肾脏发育过程中的功能尚未确定。

我们最近产生了Six1型无效突变小鼠和出生时因多器官畸形而死亡的小鼠(Xu等人，2002年;Laclef等人，2003年). 我们现在已经研究了Six1型在肾脏发育早期。Six1型在未诱导和诱导的后肾间质中表达Six1型^-/-由于后肾诱导失败，胚胎缺乏肾脏。我们的分析表明，在肾脏发育早期，后肾间质中的Pax、Eya和Six之间的上位关系与在果蝇属眼部影像盘。此外，我们的结果表明Six1型也需要用于表示Six2型和销售1在后肾间质中。这些分析表明Pax2、Eya1、Six1、Six2和销售1在肾脏早期发育的分子和遗传途径中的功能，提示Six1型在后肾间质诱导能力的建立中。

这个Six1型通过用无启动子替换内源性起始密码子和外显子1，产生了零突变等位基因大肠杆菌自动液位计-lacZ公司-poly（A）盒式磁带和PGK-neo公司基因(Laclef等人，2003年). 携带突变小鼠硅x1突变等位基因，Six1型^lacZ公司利用基因打靶技术获得。埃亚1/Six1型通过携带突变等位基因的小鼠杂交产生双杂合突变小鼠埃亚1和Six1型(Six1型^lacZ公司). 针对靶向性破坏埃亚1或Pax2（帕克斯）将该基因进行杂交，分别产生三种可能基因型的胚胎。

按照说明对小鼠和胚胎进行基因分型(Torres等人，1995年;Xu等人，1999年;Xu等人，2002年).

在PBS中解剖用于组织学和原位杂交的胚胎，并在4°C下用4%多聚甲醛固定过夜。将胚胎膜保存在DNA分离缓冲液中进行基因分型。按照描述进行组织学检查(Xu等人，1999年). 可视化硅x1^lacZ公司表达，突变胚胎用X-gal染色并按说明切片(Xu等人，2002年).

对于原位杂交，我们在每个探针的每个阶段使用了四个野生型或突变胚胎，如下所述(Xu等人，1997年a).

我们使用ApopTag检测试剂盒（Intergen）进行了用于检测凋亡细胞死亡的TUNEL测定。我们使用了六个野生型或突变型胚胎进行此分析。

Six1型在后肾间质中强烈表达，在E10.5的Wolffian管或输尿管芽上皮中未检测到其表达(图1A). 为了进一步证实我们的观察结果，我们接下来确定了Six1型使用X-gal染色Six1型^lacZ公司杂合子X-gal染色Six1型^lacZ公司E10.5的胚胎重演了Six1型-RNA原位杂交研究获得的表达模式(图1B). 在E11.5，在输尿管芽周围诱导的间质中观察到强烈的X-gal染色(图1C). 从E13.5到P0，Six1型X-gal染色检测到发育中的肾脏在后肾小管中的表达(图1D和数据未显示）。X-gal染色E17.5肾脏的组织切片显示lacZ公司-阳性细胞位于集合小管内(图1E、F). 研究是否Six1型在肾脏形成过程中起任何作用，我们接下来检查了Six1型^-/-老鼠。在40人中硅x1^-/-(Six1型^lacZ/lacZ)到目前为止，分析新生小鼠，39只动物出现肾发育不全（97.5%）。只有一只动物两侧出现严重发育不全或发育异常的肾脏雏形（数据未显示）。来自胚胎泌尿生殖道中间中胚层的其他器官，包括原肾和中肾、肾上腺和生殖道，看起来正常(图2A-D以及未示出的数据）。组织学检查Six1型^-/-E12.5小鼠，当后肾形成时，显示存在Wolffian管，有时还存在输尿管样结构(图2B、D).

确定是否Six1型在早期后肾诱导中起直接作用，我们接下来分析了Six1型^-/-胚胎在E10.5-11.5。在E11.5，输尿管芽侵入后肾间质(图2E)随后这两种组织之间的相互作用导致后肾的发育。在Six1型^-/-胚胎中，后肾间充质在形态上与周围的间充质不同，但体积缩小(图2F). 年，输尿管芽也形成，但未能完全侵入后肾间质Six1型^-/-E11.5胚胎(图2F). 随后的间充质冷凝和间充质内的输尿管分支在两侧均未发生（100%，n个=20). 通过TUNEL分析，凋亡细胞在细胞间质中增加Six1型^-/-E11.5胚胎(图2G-J). 因此Six1型导致输尿管芽侵入间质失败，继而间质凋亡。这些结果表明Six1型在肾脏早期形态发生中起重要作用。

确定肾发育早期的分子缺陷Six1型^-/-我们首先研究了Pax和Eya基因家族的表达是否依赖于Six1型.研究果蝇属表明艾娅是上位的所以并且这两个基因都位于同一遗传和分子途径的下游第6页基因依(Halder等人，1998年). 在肾脏，Pax2、Eya1和Six1型后肾间质中的表达重叠，所有三个突变体都缺乏肾脏形成(Torres等人，1995年;Xu等人，1999年). 要确定果蝇属圣像牌-埃亚-哺乳动物肾脏发育过程中有六个调控层次是保守的，我们分析了Pax2（帕克斯）或Eya1型是Six1型-独立。配对盒基因Pax2（帕克斯）通常在后肾间质形成前的中间中胚层、未诱导和诱导的后肾间充质、沃尔夫管和输尿管上皮中表达(Torres等人，1995年;Brophy等人，2001年). 在Six1型^-/-胚胎，无显著差异Pax2（帕克斯）在E9.0-10.5观察到中间中胚层、Wolffian导管和输尿管上皮的表达(图3A-D). 然而，Pax2（帕克斯）中缺少表达Six1型^-/-E10.5处的后肾间质（箭头，图3D).埃亚1在诱导前后后肾间质中正常表达(Xu等人，1999年). 在Six1型^-/-胚胎在E10.5时埃亚1在后肾间质中观察到正常水平(图3E、F). 因为最近的研究表明Pax2（帕克斯）未诱导的间充质中的表达与输尿管芽的诱导无关(Brophy等人，2001年)，这些结果表明Six1型是表达式所必需的Pax2（帕克斯），但不是Eya1型在诱导前的后肾间质中。

Six2型是Six基因家族的另一个成员，也在未诱导和诱导的后肾间质中表达(图3G)，其在间质中的表达不受影响Pax2（帕克斯）^-/-胚胎(Torres等人，1995年). 要解决以下问题：Six2型功能冗余Six1型在肾脏发育早期的间质中，我们分析了Six2型在里面Six1型^-/-E10.5-11.5处的后肾间充质。有趣的是Six2型在后肾间质中Six1型^-/-E10.5-11.5时的胚胎(图3H)，表明Six1型是的正常表达式所必需的Six2型在肾脏发育早期的后肾间质中。

接下来，我们分析了E10.5和11.5处后肾间质中其他几个特征良好的分子标记的表达。英国标准普尔4，的成员T细胞生长因子分泌信号β超家族在Wolffian导管和输尿管柄周围的间充质细胞中表达(图4A)并参与调节输尿管芽的生长和分支(宫崎骏等人，2000年;Raatikainen-Ahokas等人，2000年).英国标准普尔4^+/-突变小鼠表现出由输尿管芽发育异常引起的肾脏缺陷(宫崎骏等人，2000年). Bmp4蛋白也被证明可以调节由输尿管芽和间质表达的基因，包括Gdnf公司在器官培养中(宫崎骏等人，2000年;Raatikainen-Ahokas等人，2000年). 无显著差异英国标准普尔4在野生型和Six1型^-/-E10.5处的间充质(图4A、B)，表明Six1型的表达式不需要英国标准普尔4在肾脏发育早期。Bmp7型，的另一个成员T细胞生长因子β超家族被认为是一种生存信号，在肾脏发育过程中阻止间充质细胞凋亡（Dudley等人，1999；雷迪，2000;Al-Awqati和Oliver，2002年).Bmp7型在后肾间充质和输尿管上皮中正常表达，其表达水平在Six1型^-/-E10.5胚胎(图4C、D). 然而，它的表达域位于Six1型^-/-后肾间质缩小(图4D).重量1在后肾间质中表达，其缺失导致间质诱导失败(Kreidberg等人，1993年). 在E10.5中Six1型^-/-胚胎，尽管表达水平重量1间充质正常，其表达域比野生型胚胎小(图4E、F).销售1编码锌指蛋白，在肾脏间质中表达(图4G)其在小鼠体内的失活导致输尿管芽生长不完全和小管形成失败(Nishinakamura等人，2001年)，与中看到的类似Six1型^-/-动物。有趣的是，销售1中的表达式Six1型^-/-后肾间质在E10.5-11.5降至背景水平（箭头，图4H)，表明销售1在间质中的表达是Six1型-依赖。

Gdnf被证明是一种间充质信号，通过其在输尿管上皮细胞中表达的受体c-Ret和Gfrα1调节输尿管芽的生长(Vega等人，1996年;Sainio等人，1997年). 的空胚胎Gdnf公司缺乏输尿管芽的诱导，导致后肾完全缺失，而浸有Gdnf的珠状物可以在体外诱导输尿管从Wolffian管萌芽(Pichel等人，1996年;Sainio等人，1997年). 无显著差异Gdnf公司在野生型和野生型之间观察到后肾间质的表达水平Six1型^-/-E10.5胚胎(图4I，J). 然而，与野生型胚胎相比，其表达域也缩小了（箭头所示图4J). 这一结果与观察到的输尿管芽从Wolffian管中生长出来，但在Six1型^-/-胚胎(图2). 总之，我们的结果表明Six1型是表达式所必需的Pax2，Six2和销售1在E10.5-11.5的间充质中。此外，我们的数据表明Six1型失活导致Bmp7，Wt1和Gdnf公司间质中的表达域。

我们的结果还表明帕克2和Bmp7型输尿管上皮的表达在Six1型^-/-胚胎(图3C、D和图4C、D). 确定肾脏发育失败是否Six1型^-/-小鼠也是由输尿管上皮缺陷引起的，我们接下来检查了其他几种已知对早期肾脏形成重要的上皮因子，包括c-Ret、Gfrα1和Lim1。我们的研究结果表明，这些标志物在输尿管芽上皮中的表达在不存在Six1型（未显示数据）。

为了进一步阐明Pax、Eya、Six和销售1在肾脏发育早期的后肾间质中，我们接下来检测了埃亚·萨尔1和Six1型在里面Pax2（帕克斯）^-/-胚胎。Pax2（帕克斯）突变小鼠没有输尿管芽，但可以在形态学上观察到后肾间质(Torres等人，1995年;Brophy等人，2001年). 如所示图5，后肾间质中所有三个基因的表达水平在Pax2（帕克斯）^-/-胚胎在E10.5。该结果与之前的观察结果一致，即Six2型表达在Pax2（帕克斯）^-/-E10.5处的间充质(Torres等人，1995年). 此外，类似于Six2型在里面埃亚1^-/-E10.5胚胎(Xu等人，1999年),Six1型在埃亚1^-/-E10.5处的间充质(图5G、H). 这些结果以及之前的观察进一步表明Eya1、Six1和Six2型的上游函数Pax2（帕克斯）在肾脏发育早期的后肾间质中。因此，诱导前后肾间质中这些基因之间的遗传关系不同于果蝇属眼部影像盘。

因为埃亚1和Six1型发育中肾脏中后肾间质的表达重叠埃亚1和硅x1体外和培养细胞中的物理相互作用(Buller等人，2001年)为了进一步测试这些基因在哺乳动物肾脏发育过程中是否在分子途径中相互作用，我们检测了埃亚1^+/-/Six1型^+/-(表1和图6). 在129个背景下，21只复合杂合小鼠中有15只（15/21）的肾脏比正常小鼠小(表1和图6A). 发育不良的肾脏为单侧（6/15）或双侧（9/15）。在严重病例中，观察到肾脏完全缺如（发育不全）（28.6%）。在C57BL6背景中也得到了类似的观察结果(表1). 肾发育不全为单侧或双侧(表1和图6B-D). 在一些表现为肾发育不全的复合杂合子动物中，观察到盲端输尿管（箭头，图6B、C). 相反，每一个杂合子都没有或只有轻微的肾脏异常(表1). 这些数据表明埃亚1和Six1型在哺乳动物肾脏发育过程中。

分析肾发育不全的发育基础埃亚1^+/-/Six1型^+/-杂合子，我们比较了埃亚1^+/-/Six1型^+/-杂合子和控制肾脏在不同阶段。E17.5的横截面或纵截面埃亚1^+/-/Six1型^+/-发育不良的肾脏证实肾实质体积缩小，肾单位较少，但存在正常发育的结构(图6E、F). 在Six1型^+/-肾脏是在外周肾原发区分化的后肾帽组织（小泡），在这里发生输尿管芽分支和新肾单位的诱导，在形态学上是明显的（箭头图6E). 然而，在发育不全埃亚1^+/-/Six1型^+/-肾脏，在外周肾原性区分化的后肾小泡数量大大减少（箭头图6F). 因此，发育不全肾中肾单位的减少可能是由于输尿管芽和后肾帽组织在外周生肾区的诱导减少所致。为了分析发育过程中表型的出现，我们分析了早期肾脏。尽管后肾发育的第一阶段，包括输尿管芽的外翻和E10.5至12.5之间的初始分支，似乎都正常发生埃亚1^+/-/硅x1^+/-胚胎(n个=12），在E13.5时首次观察到输尿管芽支数量减少(图6G、H). 综上所述，结果表明肾发育不全发生在Eya1型^+/-/Six1型^+/-在胚胎发育后期，动物的肾脏发生异常。

为了进一步证明肾脏发育在硅x1^-/-胚胎、肾原基从Six1型^-/-E11.0胚胎和体外培养。培养五天后，所有野生型或杂合雏形发育成一个分支完整的肾结构，显示出强壮Pax2（帕克斯）表达式(n个=5和n个分别=10；图7A). 相反，Six1型^-/-肾原基没有形成肾脏(n个=6,图7B). 接下来我们检查了Six1型突变间充质可通过培养E11.0对诱导信号作出反应Six1型^-/-具有野生型或杂合型脊髓的间充质。培养五天后，100%（11/11）的硅x1^+/-间充质培养物显示出特征性的小管Pax2（帕克斯）mRNA表达(图7C). 相比之下Six1型^-/-间充质（0/6）表现出任何小管形成的迹象(图7D). 这个Six1型^-/-培养物中残留的间充质没有表达Pax2（帕克斯）（箭头，图7D).帕克斯2在脊髓中检测到mRNA的表达，脊髓被用作异源诱导物。因此，Six1型突变间充质对诱导信号无反应。

尽管在阐明参与早期肾脏发育诱导事件的重要基因方面取得了令人兴奋的进展，但控制肾脏器官发生诱导过程的分子机制仍基本未知。我们在这里显示同源盒基因Six1型在后肾诱导前后的后肾间质中表达，该基因失活导致肾发育不全。此外，我们还表明Eya1、Six1、Six2、Pax2和销售1可能在分子途径中发挥作用，并为两者之间的遗传相互作用提供证据埃亚1和Six1型在肾脏发育中。

哺乳动物肾脏的形成包括三个不同的过程：第一，从后中胚层建立后肾间质；第二，输尿管芽的生长和分枝；第三，后肾间质向肾上皮细胞的转化和分化。我们的数据表明，在没有硅x1，肾脏发育在这三个过程的第二步被阻止。虽然输尿管芽存在于Six1型^-/-胚胎，它不能完全侵入间充质，间充质细胞从E11.5发生异常凋亡。随后的输尿管芽分支形态发生和间质中的小管分化没有发生。众所周知，Gdnf及其受体c-Ret和Gfrα1对肾脏发育过程中输尿管芽的正常生长和分支形态发生至关重要。事实上，Gdnf可以作为一种化学引诱剂来吸引Ret-expressing上皮细胞，并刺激输尿管芽的分支形态发生(Vega等人，1996年;Tang等人，1998年). 与观察到的输尿管芽在Six1型^-/-动物，我们检测到Gdnf公司中的表达式Six1型^-/-后肾间质。该结果表明Gdnf公司在mRNA水平不需要Six1型虽然我们无法直接确定GDNF蛋白是否由Six1型^-/-后肾间充质，我们的结果表明，无论生成多少硅x1^-/-胚胎不足以确保输尿管芽侵入后肾间质。这一证据还表明，一些其他因素受Six1型-调节通路可能对充分支持后肾间质的输尿管芽侵袭起重要作用。例如，它们可能是介导上皮和间充质相互作用的细胞心房成分。进一步的表达研究硅x1需要突变胚胎来验证这个假设。

在哺乳动物的肾脏中，Pax2、Eya1、Six1和Six2型后肾间充质和空突变体中的表达重叠Pax2、Eya1和Six1型缺乏肾脏形成(Torres等人，1995年;Xu等人，1999年). 因为Pax2（帕克斯）中间中胚层的表达在埃亚1^-/-E9.5和Six2型表达式在中丢失埃亚1^-/-E10.5处的后肾间质，我们先前认为果蝇属圣像牌-埃亚-哺乳动物肾脏发育中有六个调控层次(Xu等人，1999年). 虽然我们之前没有检测到Pax2（帕克斯）中的表达式埃亚1^-/-E10.5处的后肾间质，我们认为这是由于输尿管芽生长不足和后肾诱导失败所致。该解释基于之前在丹福斯的短尾巴(瑞典)突变体表明帕克2后肾间质的表达需要间质和输尿管芽之间的诱导性相互作用(菲尔普斯和德雷斯勒，1993年). 然而，最近的表达研究Ret公司突变体已经证明Pax2（帕克斯）在诱导前在后肾间质中表达，其在间质中的表达与输尿管芽的生长无关(Brophy等人，2001年). 这里我们展示了在小鼠肾脏发育过程中，Pax2（帕克斯）诱导前后肾间质中的表达是Eya1型-和Six1型-依赖。与我们的观察结果一致，之前已经表明Six2型表达式也保存在Pax2（帕克斯）^-/-间充质(Torres等人，1995年). 相反，我们发现Six1型间质中的表达在埃亚1^-/-胚胎，类似于Six2型(Xu等人，1999年). 有趣的是，我们发现Six2型后肾间质中的表达也Six1型-依赖。因此，我们的结果以及之前的观察结果表明埃亚1-六-Pax2（帕克斯）控制早期哺乳动物肾脏发育的调控层次，与Pax不同-埃亚-在果蝇属眼部影像盘。肾脏详细检查Pax2（帕克斯）/Six1型或Eya1/Six1/Pax2化合物敲除将增强我们对早期哺乳动物肾脏形态发生过程中这些转录因子之间可能的分子和遗传相互作用的理解。

Pax2（帕克斯）最近被提议成为Gdnf公司，因为Pax2（帕克斯）^-/-胚胎不表达Gdnf公司在未诱导的间质中Pax2（帕克斯）调节Gdnf公司在体外(Brophy等人，2001年). 然而，我们的结果表明Pax2（帕克斯）的表达式不需要Gdnf公司在后肾间质中。我们提出两个假设来解释这些观察结果。首先，因为Pax2（帕克斯）中间中胚层的表达在Six1型^-/-胚胎，我们假设Pax2（帕克斯）在后部中间中胚层的表达是启动Gdnf公司在后肾间质分化过程中的表达。一次Gdnf公司在间质中被激活，帕克斯2维持Gdnf公司随着后肾发育进行表达。这可以解释为什么Gdnf公司中缺少表达Pax2（帕克斯）^-/-胚胎。与此假设一致，Gdnf公司在重量1^-/-后肾间质不表达Pax2蛋白，尽管Pax2（帕克斯）mRNA表达在重量1^-/-后肾间质(Kreidberg等人，1993年;Donovan等人，1999年). 其次，因为帕克斯2在Wolffian导管和输尿管芽中正常表达Six1型^-/-胚胎时，可能需要Wolffian导管和输尿管芽上皮中Pax2的表达来维持Gdnf公司在间质中表达。这也可以解释Gdnf公司在中观察到的表达Pax2（帕克斯）^-/-后肾间质。为了支持这一假设Gdnf公司E11.5的后肾间质中的mRNA也在有以下缺陷的小鼠中发现紧急情况2，一种同源异型盒基因，主要在输尿管芽中表达，其破坏会抑制输尿管芽的生长和分支(宫本茂等人，1997年). 有趣的是，Pax2（帕克斯）在紧急情况2^-/-在E11.5时出现输尿管芽，而在紧急情况2^-/-后肾间质在此阶段明显正常(宫本茂等人，1997年).

我们的结果也表明销售1的下游功能Six1.销售1是哺乳动物的同源物果蝇属区域特异同源异型基因spalt公司(sal公司). 小鼠失活销售1导致肾发育不全或严重发育不全，原因是输尿管芽发育不全和肾小管形成失败，与Six1型^-/-胚胎。之前已经表明Gdnf、Eya1、Pax2和重量1表示为销售1^-/-E10.5处的后肾间充质，表明销售1可能在这些基因的下游发挥作用或独立于这些基因。因为我们的结果表明销售1E10.5中的表达也不受影响Pax2（帕克斯）^-/-后肾间质，可能销售1和Pax2（帕克斯）在肾脏早期发育期间功能平行。人类的杂合突变SALL1公司导致Townes-Brocks综合征，该综合征表现出与Branchio-O-to-Renal（BOR）综合征的表型重叠，这是人类的一种缺陷眼睛A1基因。有趣的是，销售1在埃亚1^-/-间充质（数据未显示）。因此，很可能Eya1、Six1、Six2、Pax2和销售1在肾脏早期形态发生中后肾间质的遗传和分子途径中的功能。

重量1也表达于后肾间质，其缺失导致输尿管芽生长失败和间质凋亡。我们的结果表明硅x1的表达式不需要重量1之前已经表明Six2型表示为重量1^-/-后肾间质(Donovan等人，1999年)和重量1表示为埃亚1^-/-间充质(Xu等人，1999年). 因此，有可能重量1独立于埃亚1和6个后肾发育基因。也有可能重量1与…并行或协同的功能埃亚1和6个后肾发育基因。

最后，应该注意的是，在胚胎晚期小鼠肾脏发育期间，Six1型仅在集合小管中观察到表达，而在来源于后肾间质的肾上皮中未观察到表达。虽然人们普遍认为后肾间充质致力于分化为肾单位，而输尿管芽仅限于形成肾集合系统，但一些体外细胞命运研究表明，后肾间质分化为肾集合系统的一部分，除了肾单位上皮(Koseki等人，1991年;Herzlinger等人，1992年;乔等人，1995). 观察Six1型肾脏发育过程中集合小管上皮细胞亚群的表达与这一发现一致。因此，有可能Six1型-E11.5表达的后肾间充质细胞是多能干细胞，在肾集合系统形态发生过程中，这些细胞的一个亚群被招募到集合小管上皮。我们的结果表明，除了在哺乳动物肾脏发育的早期功能外，硅x1也可能在肾集合系统的形态发生中起作用。

我们感谢P.GrussPax2（帕克斯）突变小鼠，R.Nishinakamura销售1探查，B.Tang寻求技术援助，L.Ross寻求有用的意见。显微镜和图像分析是由M.J.默多克慈善信托基金会拨款购买的设备实现的。这项工作得到了NIH P20RR 12345-02（至P.-X.X.）的支持。