巴基斯坦使用激素类避孕药的性活跃妇女阴道菌群调查

摘要

背景

先前的研究报告称，在性活跃的绝经前妇女中，避孕药具与尿道感染中度增加有关。我们研究的目的是了解激素避孕药的使用是否会对巴基斯坦哈尔普尔-信德省避孕药使用者的阴道微生物群产生任何影响。

方法

对巴基斯坦Khairpur Sindh地区20-30岁和31-40岁的女性人群进行了一项前瞻性研究，研究对象为荷尔蒙避孕药。从试验人群和对照组（n=100）收集大量阴道拭子样本（n=100%），并使用标准微生物和生化技术调查阴道微生物菌群。

结果

从20-30岁的荷尔蒙避孕药使用者的阴道拭子培养结果显示，无统计学意义念珠菌属(10%的样本），并且具有统计学意义(第页 < 0.05)腐生葡萄球菌。（18%样本），无乳链球菌（23%样本），大肠杆菌（28%样品）和发酵乳杆菌（32%样本）。在31-40岁年龄组中，样本的统计显著百分比(第页 < 0.05）显示发酵乳杆菌(28%),念珠菌标准普尔（24%），和大肠杆菌，（24%），其中无统计学意义的样本显示腐生葡萄球菌（13%）和无乳链球菌（11%）。

结论

使用激素避孕药会根据年龄改变女性阴道的正常微生物群。发酵乳杆菌出现为优势物种，其次是大肠杆菌在20-30岁的年龄组中，发酵乳杆菌，念珠菌属和大肠杆菌与相应的对照组相比，在31-40岁的女性中占主导地位。两者之间的反向关系大肠杆菌和发酵乳杆菌在20-30岁的女性中观察到。

背景

激素避孕（HC）提到了对内分泌系统起作用的避孕方法。

先前的研究确定尿路感染（UTI）是避孕药使用的并发症[1，2]. 美国每年约有1700万女性患有UTI，经济损失数十亿美元[三]. 由于许多国家对避孕药具的作用机制和副作用表示担忧，避孕方法在改善妇女健康方面受到阻碍[4]. 由于包括巴基斯坦在内的发展中国家的人口增长速度最快，它非常重视其“人口规划项目”，尽管花费了大量预算，但目标尚未实现[5]. 其中一个原因是担心UTI，这是一个每年影响数百万女性的严重健康问题。UTI是第二常见的感染类型。女性尤其容易感染UTI，五分之一的女性在一生中会患上UTI[1]. UTI作为HC使用的副作用在Khairpur之前没有记录。本研究旨在通过分析激素避孕药对阴道的影响来解决这一知识差距微生物群Khairpur市育龄妇女使用HC的情况。

方法

样本是从20–30岁和31–40岁的非妊娠更年期前妇女（每组100人）中随机采集的，使用激素避孕药具对照组（未使用避孕药具的女性；每组n=100）。样本取自巴基斯坦信德省Khairpur市的不同医院。医院包括：民事医院、威灵顿夫人医院、生殖健康服务和卢克曼妇产院。在采集样本之前取得知情同意。该研究由Khairpur区卫生委员会批准。

高位阴道拭子采集

使用商用无菌棉签将大约1英寸的棉签插入阴道，收集避孕药具使用者和对照组的阴道拭子样本，并将其保存在冰箱中，立即用Amies运输介质（马来西亚化学公司）运送至实验室。微生物调查是在哈尔普尔大学沙阿卜杜勒·拉蒂夫分校微生物诊断和研究中心进行的。拭子在各种培养基上都有无菌条纹，如血琼脂（Oxoid）含10%（v/v）去纤维羊血，巧克力琼脂（Oxoid）、麦康基琼脂（Mac Conkey’s琼脂）、营养琼脂（Oxoid）和沙伯雷葡萄糖琼脂（Saboureaud glucose琼脂），并在37°C有氧培养24小时。培养后，按照Gupta等人的描述半定量记录结果[6]作为0（无生长）、1+（第一条条纹区上的菌落）、2+（第一条和第二条条纹区的菌落、3+（第一条、第二条和第三条条纹区中的菌落和4+（第一、第二、第三和第四条条纹区菌落）。检查并记录分离菌的菌落形态。使用标准微生物技术进行革兰氏染色和生化测试。分离微生物的纯培养物保存在无菌甘油肉汤（营养肉汤中16%v/v）中，以通过标准生化试验进行鉴定。E类.大肠杆菌 最初在Mac Conkey琼脂上分离，然后在营养琼脂中分离使用API-20 E（bioMerieux France）识别根据制造商的说明.葡萄球菌服务提供商。在营养琼脂中生长并根据过氧化氢酶试验、凝固酶试验、血琼脂溶血试验进行鉴定含10%（v/v）去纤维羊血用纸片扩散法进行新生霉素（雨果诊断；5微克纸片）敏感性试验；链球菌sp.为在营养琼脂中生长并通过过氧化氢酶试验、羊血琼脂溶血试验进行鉴定含10%（v/v）去纤维羊血，胆汁溶解度试验和杆菌肽敏感性试验。乳酸杆菌服务提供商。在含有5%CO的营养琼脂（pH 5.5）中培养 ₂ 然后根据过氧化氢酶试验和葡萄糖发酵活性鉴定[7——10].

生殖管测试

卵形芽殖细胞被鉴定为白色念珠菌通过芽管试验[9]. 将500μl人血清置于一个小试管中，观察细胞（称为生殖管）的管状生长，表明白色念珠菌使用无菌的金属丝环，用SDA平板上的酵母菌落接种血清。将试管放置在37°C的水浴中3 h。使用10X和40X物镜检查湿安装准备，冷凝器虹膜隔膜充分闭合，以提供良好的对比度。

统计分析

使用社会科学统计软件包（SPSS）第10版和Microsoft Excel（MS）软件程序对数据进行分析。计算HC使用者和对照组年龄组的微生物比例（百分比）。使用Mc Nemar试验测定每个年龄组HC使用者的每种微生物与激素避孕的使用的关联程度。构建表格以显示结果。统计显著性设置为95%置信水平CI，置信区间）或第页-值小于或等于0.05(第页值≤0.05）。

结果

对来自哈尔普尔市不同医院的避孕药具使用者的阴道拭子样本进行了年龄组和对照组的调查。革兰氏染色显示G+卵圆芽殖细胞，G+球菌成束，G+杆菌成链，G-球菌和G+丝状杆。通过生化试验鉴定分离出的微生物（表1). 进一步识别大肠杆菌由API-20E执行。葡萄球菌通过凝固酶试验、血琼脂溶血试验和新生霉素敏感性试验对sp.进行了进一步鉴定。使用新生霉素敏感性试验对该物种进行确认。这个葡萄球菌sp.凝固酶阴性；血琼脂上显示β溶血，对新生霉素（区域大小<17 mm）具有耐药性，因此被鉴定为腐生葡萄球菌。这个链球菌sp.在血琼脂上显示过氧化氢酶阴性反应，β溶血，胆汁不溶。杆菌肽耐药反应表明该菌为无乳链球菌属于B组乳酸杆菌sp.表现出过氧化氢酶阴性反应，并与酸和气体发酵葡萄糖，其特征是发酵乳杆菌.如果念珠菌由于目的是分离白色念珠菌这被阴性芽管试验排除了。计算试验组和对照组的半定量分级和隔离百分比。桌子2和三显示使用HC的20-30岁和31-40岁女性和对照组的半定量分级和隔离百分比。数据显示，与对照组相比，20-30岁年龄组的阴道细菌分离趋势和半定量分级存在统计学显著差异。腐生葡萄球菌。在18%的使用HC的女性和9%的对照组中发现(第页 < 0.05),无乳链球菌在23%和10%的控制中(第页 < 0.05),大肠杆菌在28%和6%的控制中(第页 < 0.05),发酵乳杆菌32%的女性和12%的对照组(第页 < 0.05). 仅隔离百分比念珠菌HC用户和对照组的sp显示出无统计学意义的差异(第页<0.05），且趋势保持相似。

表1使用激素避孕药的女性和对照组阴道拭子分离物的初步生化特征

表2使用激素避孕药的女性阴道拭子中分离出的微生物百分比的测定

表3对照组阴道拭子中微生物百分比的测定

在31-40岁年龄组的女性中，隔离趋势显示出统计学上的显著差异(第页<0.05）。这里是念珠菌24%的女性和10%的对照组存在sp(第页 < 0.05),大肠杆菌24%的女性和4%的对照(第页 < 0.05）和发酵乳杆菌28%的女性和16%的对照组(第页 < 0.05). HC使用者和对照组之间的隔离葡萄球菌和链球菌物种。隔离率趋势（%）表明发酵乳杆菌是20-30岁女性的主要阴道菌群念珠菌如图所示，sp在31-40岁年龄组的女性中占主导地位1如图所示，对照组在两个年龄组（20-30岁、31-40岁）中表现出相似的趋势2.

图1

阴道拭子是从使用激素避孕药的妇女身上获得并加工的。图表显示了分离和鉴定出的每种微生物的趋势。黑线表示20-30岁的微生物，粉线表示31-40岁的微生物。1.念珠菌第2页。腐生葡萄球菌，三.无乳链球菌，4大肠杆菌，5发酵乳杆菌。

图2

从未使用激素避孕药的对照组获得阴道拭子。该图显示了分离和鉴定微生物的趋势。黑线表示20-30岁的微生物，粉线表示31-40岁的微生物。1念珠菌标准普尔，2腐生葡萄球菌，三。无乳链球菌，4大肠杆菌。大肠杆菌，5发酵乳杆菌。

讨论

本研究旨在调查口服避孕药对两个年龄组使用者阴道生态的影响。分离出5株微生物菌株，作为参考指标菌株进行评价。到目前为止，还没有一项已知的前瞻性研究确定避孕药在巴基斯坦哈尔普尔信德省不同年龄组使用激素避孕药的妇女中的作用。

在本研究中，我们报告了20-30岁和31-40岁避孕药使用者阴道微生物群的总体百分比很高（45%），这一发现与其他研究人员一致[6，11——13].这项研究之所以局限于这里报道的微生物种类，是因为这些微生物代表机会主义群体（除了 乳酸杆菌 发酵液)大多数尿路感染的病因都是由这些微生物群引起的。

我们的研究表明，两个对照组之间的微生物类型和趋势没有显著差异。然而，在微生物趋势上观察到显著差异，尤其是念珠菌sp和发酵乳杆菌年龄在20-30岁和31-40岁之间，表明年龄因素在阴道生态中的作用。虽然 发酵乳杆菌 是从两个年龄组中分离出来的，在我们研究中分离出的其他物种存在的情况下，其预防作用仍然不确定。 发酵乳杆菌 益生菌菌株在泌尿生殖道感染中的应用效果不佳[14]这可能是其他微生物过度生长的原因。然而，阴道方面的种族差异 乳酸杆菌 报告了因地理区域而异的物种[15].

There was no significant difference in isolation percentage of念珠菌sp来自20-30岁女性的测试和对照组，这与Peddie等人的研究结果一致[16]世卫组织报告称，避孕药具使用者和非使用者在以下情况下没有显著差异：白色念珠菌已进行调查。另一方面念珠菌与对照组相比，在31–40岁年龄组的女性中观察到sp，这与同一研究不一致[16]. 这阐述了年龄因素作为阴道生态的关键变量和决定因素的重要性。观察到两者之间存在反向关系大肠杆菌和发酵乳杆菌在20-30岁的女性中，这与Gupta等人的研究结果一致[6]然而，在我们的研究中，对于31-40岁的女性群体，没有建立这样的关联。我们研究的局限性包括无法进行阴道微生物群的非培养分离。尽管其他物种 乳酸杆菌 已被用作对抗UTI的益生菌[17]阴道微生物菌群数量较高 发酵乳杆菌 在使用HC的女性中，表明该物种的作用减弱，这可能会增加避孕药具使用者与非使用者尤其是30岁以上女性发生UTI的风险。在37至54岁有口服避孕药史的绝经前妇女中，最近公布的UTI略有增加[1].

据报道，避孕药使用者除了排卵受到抑制外，还表现为宫颈粘液增厚、肌肉张力改变和子宫内膜改变[11，18]. 尽管本研究未调查这些参数，但研究结果表明，这些因素可能是阴道定植的原因，我们的研究发现阴道菌群发生了改变，比例更高，并且这些影响在30岁以上的人群中可能会更加明显。

结论

根据本研究的结果，可以得出结论，使用激素避孕药的女性的年龄是阴道微生物群变化的重要因素。本研究提供了有关使用激素避孕药的女性阴道生态的重要信息，尤其是在30岁之后。更加重视计划生育方法。使用激素避孕药的女性可能会定期监测阴道生态的变化，以保持UTI最小化。