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鹿西尼亚斯® 病原基因检测PCR试剂盒(用于腹泻原性大肠杆菌)

腹泻原性大肠杆菌E. coli)是引起人腹痛、腹泻症的大肠杆菌的总称,根据性质和症状的不同,分为7种。
本试剂盒通过多重PCR进行基因扩增,确认其扩增产物,可以确认日本主要报告的5种病原基因的持有状况。

特性

●使用3种引物混合物,可检测与肠道病原性大肠杆菌(EPEC)、肠道出血性大肠杆菌(EHEC)、肠道毒素性大肠杆菌(ETEC)、肠道侵入性大肠杆菌(EIEC)、肠道凝集性大肠杆菌(EAEC)的病原性相关的基因
●通过将检测结果数值化,可以容易地进行判定

套件配置

 个别名称容量数量
试剂A AptaTaq DNA Master(5×Conc.)* 1.2 mL 一根
试剂B PCR补充剂 1.1 mL 一根
试剂C 底漆1 0.4 mL 一根
试剂D 底漆混合2 0.4 mL 一根
试剂E 底漆3 0.4 mL 一根
试剂F 正控制 0.4 mL 一根
试剂G 6×装载缓冲区(BPB・XC) 1.2 mL 一根

*AptaTaq DNA Master(5×Conc.)是Roche诊断K.K.的产品。

操作步骤

增菌·分离培养 分离大肠杆菌
DNA提取 鹿西尼亚斯®用DNA提取试剂制备模板DNA
PCR 进行3种多路PCR
电泳 进行3%琼脂糖凝胶电泳
查找 用溴化乙炔溶液检测PCR片段
判定 在专用的计算表中输入结果,进行病原型的判定

电泳模式

s_dec_img01.jpg

100:100bp DNA梯度
P:积极控制
1:ATCC®35150(EHEC)
2:ATCC®43887(EPEC)
3:ATCC®35401(ETEC)
4:ATCC®43893(EIEC)
5:ATCC®25922(非致病性大肠杆菌)
6~10:临床分离株

游泳条件为3%琼脂糖KANTO HC(1×TBE缓冲液),使用Mupid-exU,100V设定为35分钟。使用13个孔的梳子,将样品μ装置游泳了。
*使用的琼脂糖凝胶是在一张凝胶上插入3个13孔科姆制作而成的。



样本编号
12345678910
系数合计 97 1 24 4 0 97 1 24 16 2
病原型的判定 EHEC EPEC ETEC EIEC 其他 EHEC EPEC ETEC ETEC EAEC

检测基因及其PCR扩增产物大小

 系数放大尺寸(bp)目标区域

Reaction
mixture 1
1 384 eaeA
32 132 stx1
64 93 stx2
Reaction
mixture 2
16 130 est
8 62 elt
Reaction
mixture 3
2 575 aggR
4 382 invE
内部
控制
120 16s rDNA

InvE基因可能会脱落,因为它是质粒上的侵入性基因。
①根据3个多路PCR的电泳结果读取带型。
②使用该电泳带有无的结果,在解析用Excel表中用二进制输入,进行病原型的判定。
③16s rDNA阳性时,可以推测是大肠杆菌。

合计点和腹泻原性大肠杆菌的病原型

合计点数病原型
0 除EHEC/STEC、EPEC、ETEC、EIEC、EAEC以外的大肠杆菌或近缘微生物
1 EPEC
2 EAEC
4~7 EIEC
8~11 ETEC(elt+)
16~19 ETEC(est+)
24~27 ETEC(est+、elt+)
32~35 EHEC/STEC(stx1+)
64~67 EHEC/STEC(stx2+)
96~99 EHEC/STEC(stx1+、stx2+)
上述以外 疑似混合感染

*不能区分EIEC和痢疾菌。合计积分为36的情况下,怀疑有志贺痢疾菌的可能性。
*stx2(志贺毒素
2型产生基因)可能无法通过变型检测。例)stx2f

产品列表

产品编号 产品名称 保存温度 标准 包装 价格
08178-96 鹿西尼亚斯R DNA提取试剂
Cica geneusR DNA extraction reagent
冷藏 分子生物学用 1次(120次) ¥24,000
08087-96 鹿西尼亚斯R病原基因检测PCR试剂盒(用于腹泻原性大肠杆菌)
Cica geneusR Pathogenesis Gene Detection PCR Kit (for Diarrheagenic E.coli)
冷冻 分子生物学用 1次(100次) ¥89,000

有关其他厂商商品的许可证专利,请向各厂商确认。

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6×Loading buffer
冷藏 电泳用 1pack ¥9,000
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Quick-Load 100 bp DNA Ladder
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46510-79 10×TBE缓冲液
10×TBE Buffer
电泳用 1L ¥5,300
49881-60 三代100bp DNA梯形图
TriDye 100bp DNA Ladder
冷藏 125 gel lanes ¥13,600

参考文献

1)公立大学法人大阪市立大学、株式会社KALS、株式会社二共刃型工业;“腹泻原性大肠杆菌检测方法”专利公开2008-283895
2) Ruttler, M.E.at el,Biocell, 30(2): 301-308, 2006
3)Hiroe, Aet al,Appl, Environ, Microbiol,78(9): 3177-3184, 2012

小册子

鹿西尼亚斯® 病原基因检测PCR试剂盒(用于腹泻原性大肠杆菌)(436KB)
基因检测相关产品指南(2.3MB)

使用说明书

病原基因检测PCR试剂盒(用于腹泻原性大肠杆菌)(390KB)

计算表(ZIP文件、Excel)

分析用Excel表

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