鹿西尼亚斯® 病原基因检测PCR试剂盒(用于腹泻原性大肠杆菌)
腹泻原性大肠杆菌E. coli)是引起人腹痛、腹泻症的大肠杆菌的总称,根据性质和症状的不同,分为7种。
本试剂盒通过多重PCR进行基因扩增,确认其扩增产物,可以确认日本主要报告的5种病原基因的持有状况。
特性
●使用3种引物混合物,可检测与肠道病原性大肠杆菌(EPEC)、肠道出血性大肠杆菌(EHEC)、肠道毒素性大肠杆菌(ETEC)、肠道侵入性大肠杆菌(EIEC)、肠道凝集性大肠杆菌(EAEC)的病原性相关的基因
●通过将检测结果数值化,可以容易地进行判定
套件配置
| 个别名称 | 容量 | 数量 |
试剂A |
AptaTaq DNA Master(5×Conc.)* |
1.2 mL |
一根 |
试剂B |
PCR补充剂 |
1.1 mL |
一根 |
试剂C |
底漆1 |
0.4 mL |
一根 |
试剂D |
底漆混合2 |
0.4 mL |
一根 |
试剂E |
底漆3 |
0.4 mL |
一根 |
试剂F |
正控制 |
0.4 mL |
一根 |
试剂G |
6×装载缓冲区(BPB・XC) |
1.2 mL |
一根 |
*AptaTaq DNA Master(5×Conc.)是Roche诊断K.K.的产品。
操作步骤
增菌·分离培养 |
分离大肠杆菌 |
DNA提取 |
鹿西尼亚斯®用DNA提取试剂制备模板DNA |
PCR |
进行3种多路PCR |
电泳 |
进行3%琼脂糖凝胶电泳 |
查找 |
用溴化乙炔溶液检测PCR片段 |
判定 |
在专用的计算表中输入结果,进行病原型的判定 |
电泳模式
100:100bp DNA梯度
P:积极控制
1:ATCC®35150(EHEC)
2:ATCC®43887(EPEC)
3:ATCC®35401(ETEC)
4:ATCC®43893(EIEC)
5:ATCC®25922(非致病性大肠杆菌)
6~10:临床分离株
游泳条件为3%琼脂糖KANTO HC(1×TBE缓冲液),使用Mupid-exU,100V设定为35分钟。使用13个孔的梳子,将样品μ装置游泳了。
*使用的琼脂糖凝胶是在一张凝胶上插入3个13孔科姆制作而成的。
| 样本编号 |
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
系数合计 |
97 |
1 |
24 |
4 |
0 |
97 |
1 |
24 |
16 |
2 |
病原型的判定 |
EHEC |
EPEC |
ETEC |
EIEC |
其他 |
EHEC |
EPEC |
ETEC |
ETEC |
EAEC |
检测基因及其PCR扩增产物大小
| 系数 | 放大尺寸(bp) | 目标区域 |
Reaction mixture 1 |
1 |
384 |
eaeA |
32 |
132 |
stx1 |
64 |
93 |
stx2 |
Reaction mixture 2 |
16 |
130 |
est |
8 |
62 |
elt |
Reaction mixture 3 |
2 |
575 |
aggR |
4 |
382 |
invE |
内部 控制 |
120 |
16s rDNA |
*InvE基因可能会脱落,因为它是质粒上的侵入性基因。
①根据3个多路PCR的电泳结果读取带型。
②使用该电泳带有无的结果,在解析用Excel表中用二进制输入,进行病原型的判定。
③16s rDNA阳性时,可以推测是大肠杆菌。
合计点和腹泻原性大肠杆菌的病原型
合计点数 | 病原型 |
0 |
除EHEC/STEC、EPEC、ETEC、EIEC、EAEC以外的大肠杆菌或近缘微生物 |
1 |
EPEC |
2 |
EAEC |
4~7 |
EIEC |
8~11 |
ETEC(elt+) |
16~19 |
ETEC(est+) |
24~27 |
ETEC(est+、elt+) |
32~35 |
EHEC/STEC(stx1+) |
64~67 |
EHEC/STEC(stx2+) |
96~99 |
EHEC/STEC(stx1+、stx2+) |
上述以外 |
疑似混合感染 |
*不能区分EIEC和痢疾菌。合计积分为36的情况下,怀疑有志贺痢疾菌的可能性。
*stx2(志贺毒素2型产生基因)可能无法通过变型检测。例)stx2f
产品列表
产品编号 |
产品名称 |
保存温度 |
标准 |
包装 |
价格 |
08178-96 |
鹿西尼亚斯R DNA提取试剂 Cica geneusR DNA extraction reagent |
冷藏 |
分子生物学用 |
1次(120次) |
¥24,000 |
08087-96 |
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分子生物学用 |
1次(100次) |
¥89,000 |
有关其他厂商商品的许可证专利,请向各厂商确认。
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分离培养基
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产品名称 |
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|
电泳用 |
100g |
¥29,500 |
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溴化乙炔溶液 Ethidium bromide solution |
冷藏 |
电泳用 |
10mL |
¥5,400 |
24080-96 |
6倍浓缩装载缓冲区 6×Loading buffer |
冷藏 |
电泳用 |
1pack |
¥9,000 |
49881-04 |
快速加载100bp DNA梯形图 Quick-Load 100 bp DNA Ladder |
冷藏 |
|
125 gel lanes |
¥14,600 |
46510-79 |
10×TBE缓冲液 10×TBE Buffer |
|
电泳用 |
1L |
¥5,300 |
49881-60 |
三代100bp DNA梯形图 TriDye 100bp DNA Ladder |
冷藏 |
|
125 gel lanes |
¥13,600 |
参考文献
1)公立大学法人大阪市立大学、株式会社KALS、株式会社二共刃型工业;“腹泻原性大肠杆菌检测方法”专利公开2008-283895
2) Ruttler, M.E.at el,Biocell, 30(2): 301-308, 2006
3)Hiroe, Aet al,Appl, Environ, Microbiol,78(9): 3177-3184, 2012
小册子
鹿西尼亚斯® 病原基因检测PCR试剂盒(用于腹泻原性大肠杆菌)(436KB)
基因检测相关产品指南(2.3MB)
使用说明书
病原基因检测PCR试剂盒(用于腹泻原性大肠杆菌)(390KB)
计算表(ZIP文件、Excel)
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