鹿西尼亚斯®病原基因检测PCR试剂盒（腹泻原性大肠杆菌用）2｜基因检测｜DNA·RNA研究｜生命科学

鹿西尼亚斯®病原基因检测PCR试剂盒（用于腹泻原性大肠杆菌）2

腹泻原性大肠杆菌（Diarrheagenic E.coli）是引起人腹痛、腹泻症的大肠杆菌的总称，根据性质和症状的不同分为5种以及其他的腹泻原性大肠杆菌。另外，近年来，与大肠杆菌近缘的腹泻症起因菌Escherichia albertii（E.albertii）为原因的食物中毒和集体感染事例屡次发生。本产品通过多重PCR法，在腹泻原性大肠杆菌中主要的5种EHEC/VTEC（肠道出血性/贝洛毒素产生性大肠杆菌）、EPEC（肠道病原性大肠杆菌）、ETEC（肠道毒素原性大肠杆菌）、EIEC（肠道侵入性大肠杆菌）、EAggEC（肠道凝集附着性大肠杆菌）及E。可以同时检测与albertii致病性相关的基因。

特性

■使用2种引物混合，可以同时、区别检测大肠杆菌及E.albertii的菌种特异性基因和7种病原性因子*1。　　
*1致病因子麻黄素1,2型（VT1,2）基因（stx1,2）、耐热性恩特罗毒素（ST）基因（est）、易热性恩特罗毒素（LT）基因（elt）、亚胺基因（eae）、凝集附着性相关因子（aggR）、肠道侵入性相关因子（invE）
■通过将检测结果数值化，可以明确判定结果。
■附带了积极控制等PCR所需的试剂。
■根据内部控制的检测结果，可以确认有无PCR阻碍。

套件配置

	个别名称	容量	数量
试剂A	AptaTaq DNA Master（5已重命名Conc.）*	400µL	一根
试剂B	PCR补充剂	700µL	一根
试剂C	底漆1	200µL	一根
试剂D	底漆混合2	200µL	一根
试剂E	正控制	250µL	一根
试剂F	6个已重命名装载缓冲器	400µL	一根

＊AptaTaq DNA Master（5已重命名Conc.）是Roche诊断K.K.的产品。

操作步骤

增菌·分离培养	分离菌株
DNA提取	鹿西尼亚斯^®用DNA提取试剂制备模板DNA
PCR	进行2种多路PCR
电泳	进行3%琼脂糖凝胶电泳
查找	用溴化乙炔溶液检测PCR片段
判定	在专用的计算表中输入结果，进行病原型的判定

电泳模式

︓100bp DNA Ladder，P︓积极控制，1︓E。coli ATCC35150（EHEC/VTEC）
2︓E。coli ATCC43887（EPEC），3︓E。coli ATCC35401（ETEC），4︓E。coli NCTC11603（ETEC）
5︓E。coli分离株（EAggEC），6︓E。coli ATCC43893（EIEC），7︓E。coli ATCC11775（非病原性）
8︓E。albertii分离株（stx2f阳性），9︓E。albertii LMG20976,10︓Citrobacter freundii ATCC8090
负控制（TE缓冲液）

分析结果

	样本编号
	1个	2	3	4个	5	6个	7	8个	9	10
系数合计	97	1个	第二十四节：	16	2	4个	0	65	1个	10
病原型的判定	EHEC/VTEC（stx1+stx2+eae+）	EPEC（eae+）	ETEC（est+elt+）	ETEC（est+）	EAggEC（aggR+）	EIEC（invE+）	大肠杆菌	E.albertii（stx2+eae+）	E.albertii（eae+）	不能判定菌种

检测基因及其PCR扩增产物大小

	系数	放大尺寸（bp）	目标区域
读取，读取 mixture1	-是的	652	uidA（E.coli判定区域）
	32	532	stx1
	64	413	stx2
	-是的	252	lysp（E.albertii判定区域）
	1个	199	eae
	-是的	120	内部控制
读取，读取 mixture2	2	499	aggR
	4个	379	invE
	8个	270	金属板，金属板
	16	191	est
	-是的	120	内部控制

在本工具包中
*志贺痢疾菌所持有的志贺毒素基因也作为stx1检测。
*E.albertii拥有的stx2f变型也会检测为stx2。
*还可以找到Citrobactor属拥有的eae。
*检测est的猪型（STp）和人型（STh）。
*因为也能检测出大部分痢疾菌所持有的uidA，所以不能区分痢疾菌和大肠菌。

合计点位和病原型（大肠杆菌时）

合计点数	病原型
0	EHEC/VTEC、EPEC、ETEC、EIEC、EAggEC以外大肠杆菌
1个	EPEC（eae+）
2	EAggEC（aggR+）
4-7	EIEC（invE+）
8-15	ETEC（elt+）
16～23	ETEC（est+）
24-31	ETEC（est+单击功能区上elt+）
32～63	EHEC/VTEC（stx1+）
64-95	EHEC/VTEC（stx2+）
96～127	EHEC/VTEC（stx1+，stx2+）
上述以外	请同时使用生化性状等进行判断

产品信息

产品编号产品名称保存温度标准包装价格

08178-96 鹿西尼亚斯DNA提取试剂
Cica geneus DNA extraction reagent 冷藏分子生物学用 1次（120次） ¥24000

08377-96 鹿西尼亚斯病原基因检测PCR试剂盒（用于腹泻原性大肠杆菌）2
Cica geneus Pathogenessis Gene Detection PCR Kit（for Diarrheagenic E.coli）2 冷冻分子生物学用 1次（50次） ¥53000

产品编号	产品名称	保存温度	标准	包装	价格
08178-96	鹿西尼亚斯DNA提取试剂 Cica geneus DNA extraction reagent	冷藏	分子生物学用	1次（120次）	¥24000
08377-96	鹿西尼亚斯病原基因检测PCR试剂盒（用于腹泻原性大肠杆菌）2 Cica geneus Pathogenessis Gene Detection PCR Kit（for Diarrheagenic E.coli）2	冷冻	分子生物学用	1次（50次）	¥53000

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