重组抗病毒素抗体[EPR3776]-细胞骨架标记（ab92547）

以1/250工作稀释度纯化的ab92547对石蜡包埋小鼠肾脏进行免疫组织化学染色。使用的二级抗体是山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP）（ab97051）二级抗体1/500。用苏木精对样品进行反染色。使用pH 9.0的Tris-EDTA缓冲液进行抗原检索。使用PBS代替一级抗体作为阴性对照，如插图所示。

该印迹是在MOPS缓冲系统下使用4-12%双三凝胶生成的。凝胶在200V下运行50分钟，然后在30V下转移到硝化纤维膜上70分钟。然后使用LI-COR®封闭缓冲液将膜封闭一小时，然后在4°C下与ab92547培养过夜。使用IRDye®800CW山羊抗狂犬病二级品在室温下以1:10000稀释1小时检测抗体结合，然后使用Odyssey®CLx成像系统成像。

Jhy公司^lacZ/lacZ小鼠表现出放射状胶质细胞向室管膜细胞分化的延迟。

P10侧脑室冠状切片的免疫组织化学分析Jhy公司^+/+（A、E）和Jhy公司^lacZ/lacZ（I，M）小鼠在背侧（A-D，I-L）和腹侧（E-H，M-P）脑区表达Vimentin（粉红色，ab92547）、Glast（绿色）和Acα-Tub（橙色）。右下面板（D、L、H、P）表示合并图像的放大倍数较高的视图。在Jhy公司^+/+内侧壁背侧和腹侧细胞表达分化的室管膜标记物Vimentin（A，B，E，F）和Acα-Tub（A，D，E，H），但放射状胶质标记物Glast（A、C、E，G）为阴性。在Jhy公司^lacZ/lacZ大脑，一些背侧细胞对未分化标记物Glast（I，K）保持阳性，同时也表达分化标记物Vimentin和Acα-Tub（I、J、L）。Jhy公司^lacZ/lacZ腹侧细胞只表达波形蛋白和Acα-Tub（M-P）。虚线表示（C，G，K，O）中的内壁室管膜细胞。（Q-R）背侧（Q）和腹侧（R）室管膜细胞中Glast（-）Vimentin（+）Acα-Tub（+）（黑条）和Glast。MW，内侧壁；LW，侧壁；LV，侧脑室；*表示p≤0.05。比例尺：50μm（A-P）。

在工作稀释度为1/200的条件下，用ab92547（绿色）对石蜡包埋的多聚甲醛固定恒河猴视网膜组织进行免疫组织化学染色。将样品在4°C的2.5%血清中用一抗静置20小时。使用的二级抗体是山羊抗兔AlexaFluor 488，比例为1/400。使用柠檬酸盐pH 6进行热介导抗原检索。在25°C下用5%血清封闭组织1小时30分钟

参见Abreview

在Leica Bond上进行的人类乳腺癌福尔马林固定石蜡包埋组织切片*中未纯化ab92547染色Vimentin的IHC图像。用柠檬酸钠缓冲液（pH6，表位检索溶液1）进行热介导抗原检索预处理20分钟。然后在室温下用ab92547，1/200稀释液培养该切片15分钟，并使用HRP共轭紧凑聚合物系统检测。DAB被用作显色剂。然后用苏木精对切片进行复染，并用DPX固定。阴性对照组未使用一级抗体（如插图所示）。

对于其他IHC染色系统（自动化和非自动化），客户应优化可变参数，如抗原回收条件、初级抗体浓度和抗体孵育时间。

*组织取自人类研究组织库，由NIHR剑桥生物医学研究中心支持

ab92547在野生型HeLa细胞中对VIM进行染色，在VIM敲除HeLa的细胞中呈阴性表达。用4%甲醛固定细胞（10分钟），用0.1%Triton x-100渗透5分钟，然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。然后用2μg/ml的ab92547在+4°C下培养细胞过夜约7291，小鼠单克隆[DM1A]以0.5μg/ml的浓度作用于α-管蛋白。然后将细胞与约150081、山羊抗兔IgG-H&L（Alexa Fluor）多克隆二级抗体^®488），以1/1000稀释度预吸附（以绿色显示）和ab150119号小鼠IgG-H&L（Alexa Fluor）山羊多克隆二级抗体^®647），以1/1000稀释度预吸附（以红色显示）。用DAPI标记细胞核DNA（以蓝色显示）。用共焦显微镜（Leica-Microsystems TCS SP8）采集图像，显示单个共焦切片。。在相同的测试条件下，该产品也可与100%甲醇（5分钟）固定。

ab92547染色野生型HAP1细胞中的波形蛋白（顶部面板）和VIM敲除HAP1的细胞（底部面板）。细胞用100%甲醇固定（5分钟），用0.1%Triton X-100渗透5分钟，然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。然后用ab92547以0.5μg/ml和约195889年以1/250的稀释度（以伪红色显示）在+4°C下过夜，然后在室温下用山羊抗狂犬病IgG H&L（Alexa Fluor®488）预吸附（ab150081）二级抗体浓度为2μg/ml（以绿色显示）。核DNA用DAPI标记为蓝色。

使用共焦显微镜（Leica-Microsystems，TCS SP8）拍摄图像。

暴露于MTX、TAA和TGF-β1后福尔马林固定石蜡包埋人体微细组织的免疫染色。

MTX、TAA和TGF-β1治疗14天后，HepaRG/THP-1巨噬细胞/hTERT-HSC微组织的福尔马林固定石蜡包埋载玻片用苏木精&伊红（H&E）和波形蛋白染色。在石蜡化之前，将微组织固定在4%PFA中，并嵌入2%琼脂糖中。MTX、TAA和TGF-β1暴露后，微组织中波形蛋白阳性细胞增多。波形蛋白染色显示微组织中的星状细胞和THP-1巨噬细胞增殖，提示炎症过程开始。

有关完整图像，请参阅PMID 28665955。

重叠直方图显示用ab92547染色的HAP1野生型（绿线）和HAP1-VIM敲除细胞（红线）。用80%甲醇固定细胞（5分钟），然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清中培养细胞，以阻止非特异性蛋白质相互作用，随后在22°C下用抗体（ab92547，0.5µg/ml）培养30分钟。使用的二级抗体是山羊抗狂犬病IgG H&L（Alexa Fluor^®488）预吸附层(约150081)二级抗体在22°C下以1/2000稀释30分钟。兔IgG同型控制抗体(约172730)在与第一抗体相同的浓度和条件下使用（HAP1野生型-黑线，HAP1-VIM敲除-灰线）。未标记样本也用作对照（为了简单起见，未显示此行）。使用50 mW蓝光激光器（488nm）和530/30带通滤波器采集了超过5000个事件。

阻塞缓冲区：5%NFDM/TBST
稀释缓冲液：5%NFDM/TBST

阻塞缓冲区：5%NFDM/TBST
稀释缓冲液：5%NFDM/TBST

阻塞缓冲区：5%NFDM/TBST
稀释缓冲液：5%NFDM/TBST

用纯化的ab92547在1/250的工作稀释度下对HeLa（宫颈腺癌人上皮细胞系）细胞进行免疫荧光染色，并用DAPI进行反染色。二级抗体是山羊抗狂犬病IgG H&L（Alexa Fluor®488）（ab150077）二级抗体，稀释度为1/1000。约7291是一种小鼠抗微管蛋白抗体（1/1000），用于染色微管蛋白和山羊抗鼠IgG H&L（Alexa Fluor®594）预吸附剂（ab150120）1/1000，如右上面板所示。细胞固定在4%PFA中，并使用0.1%Triton X 100进行渗透。阴性对照显示在底部中间和右侧面板中-对于阴性对照1，纯化的ab92547以1/500的稀释度使用，然后山羊抗鼠IgG H&L（Alexa Fluor®594）预吸附剂（ab150120）稀释度为1/500。对于阴性对照2，约7291（小鼠抗微管蛋白）以1/500的稀释度使用，然后山羊抗狂犬病IgG H&L（Alexa Fluor®488）（ab150077）二级抗体稀释度为1/400。

ab92547染色HeLa（人宫颈腺癌上皮细胞系）细胞中的波形蛋白。细胞用100%甲醇固定（5min），然后用1%牛血清白蛋白/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸和0.1%PBS-Tween封闭1h。然后用ab92547以5μg/ml和约7291以1µg/ml的浓度在+4°C下过夜，然后在室温下用山羊抗狂犬病IgG H&L（Alexa Fluor®488）预吸附（ab150081）二级抗体2μg/ml（以绿色显示）和山羊抗鼠IgG H&L（Alexa Fluor®594）预吸附剂（ab150120）浓度为2μg/ml（以伪红色显示）。核DNA用DAPI标记为蓝色。

阴性对照：1-兔一级抗体和抗鼠二级抗体；2–小鼠一级抗体和抗兔二级抗体。对照组1和2表明所用的一级和二级抗体之间没有非特异性反应。

HeLa细胞中未纯化的ab92547染色波形蛋白。细胞用100%甲醇固定（5分钟），在0.1%Triton X-100中渗透5分钟，然后在1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。然后用工作浓度为5μg/ml的ab92547培养细胞约195889年，小鼠单克隆[DM1A]与α-管蛋白（Alexa Fluor®594，以红色显示）在+250℃下过夜，然后在室温下用山羊抗狂犬病IgG H&L（Alexa Fluor®488）预吸附（ab150081）二级抗体浓度为2μg/ml（以绿色显示）。核DNA用DAPI标记为蓝色。

使用共焦显微镜（Leica-Microsystems，TCS SP8）拍摄图像。

重叠直方图显示HeLa细胞在2%PFA中固定，并用纯化的ab92547以1/50的稀释度染色（红线）。使用的二级抗体是FITC山羊抗兔抗体，稀释率为1/500。兔单克隆IgG用作同型对照（黑线），在没有一级和二级抗体的情况下培养的细胞用作阴性对照（蓝线）。

用免疫组织化学方法（甲醛固定石蜡包埋切片）对E17大鼠颊部切片进行抗病毒素（ab92547）染色。使用柠檬酸进行热介导抗原检索。样品与一级抗体（1/2000）在室温下孵育2小时。采用生物素结合的山羊抗兔IgG多克隆作为二级抗体。

图片由伦敦国王学院卡尔·霍布斯先生提供。

使用免疫组织化学（甲醛固定石蜡包埋切片）对成年小鼠大脑（海马齿状回区域）进行抗病毒素（ab92547）染色。使用柠檬酸进行热介导抗原检索。样品与一级抗体（1/2000）在室温下孵育2小时。采用生物素结合的山羊抗兔IgG多克隆作为二级抗体。

图片由伦敦国王学院卡尔·霍布斯先生提供。

用免疫组织化学方法（甲醛固定石蜡包埋切片）对人卵巢癌组织进行抗病毒素（ab92547）染色。使用柠檬酸进行热介导抗原检索。样品与一级抗体（1/2000）在室温下孵育2小时。采用生物素结合的山羊抗兔IgG多克隆作为二级抗体。

图片由伦敦国王学院卡尔·霍布斯先生提供。

用ab92547标记波形蛋白的福尔马林/PFA固定石蜡包埋人宫颈癌组织切片的免疫组织化学分析。

用ab92547标记波形蛋白的福尔马林/PFA固定石蜡包埋人肾组织切片的免疫组织化学分析。

用ICC/IF（免疫细胞化学/免疫荧光）对人Schlemms管内皮细胞中的波形蛋白进行未纯化ab92547染色。细胞用甲醛固定，用Triton X-100 0.2%渗透，用10%血清在20°C下封闭30分钟。样品与一级抗体（DPBS中的1/200）在20°C下孵育3小时。未稀释Alexa Fluor^®用488-共轭山羊抗兔IgG多克隆作为二级抗体。

参见Abreview

使用未纯化的ab92547对石蜡包埋的人类正常肾组织进行荧光免疫组织化学分析。绿色-波形蛋白红-PI。

使用未纯化的ab92547对石蜡包埋的人类正常结肠组织进行荧光免疫组织化学分析。绿色-波形蛋白红-PI

ab92547免疫组织化学染色大鼠皮肤组织切片中的波形蛋白（IHC-P-副甲醛固定，石蜡包埋切片）。用10%的缓冲正常福尔马林固定组织，并用5%的血清在21°C下封闭60分钟；抗原回收是在10mM柠檬酸钠缓冲液中通过热调解进行的。样品与一级抗体（1/200在封闭缓冲液中）在4°C下孵育12小时。A Cy3细胞^®-以结合驴抗兔IgG多克隆（1/200）为二级抗体。

参见Abreview

平衡解离常数（K_D类)
了解有关K的更多信息_D类

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