特技

  • 附带条件

    抗PKCα-[Y124]
    PKCα
  • 特惠

    pKCα
  • 特技

    兔子
  • 临时合同

    专利:世界银行IHC-P流式细胞术知识产权ICC/IF免疫复合物受体更多细节
  • 附带条件

    专利:鼠、鼠、人、猪、金鱼
  • 附带条件

    在人PKCα-AA 650至C-末端(C末端)的合成肽。确切的序列是专有的。

  • 生殖器官

    • WB:HEK293、K562、HeLa、C6细胞裂解物和猪骨骼肌组织裂解物。②IHC-P:人肺癌和人子宫内膜癌组织。
  • 附带条件

    试验大小可用于购买该抗体。

    我们的拉伯®技术是一种专利的杂交瘤技术,用于制备兔单克隆抗体。有关我们专利的详情,请参阅拉巴卜®专利.

    我们一直在努力确保我们为客户提供一流的抗体。作为这项工作的结果,我们很高兴现在提供这种抗体的纯化格式。我们正在更新我们的数据表。提纯的格式在产品标签上标有“PUR”字样。如果您有任何关于这个更新的问题,请联系我们的科学支持小组。

    这个产品是重组兔单克隆抗体.

特技

船首

我们的保证担保覆盖使用AB32676在以下测试应用中。

应用注意事项包括推荐的起始稀释液;最佳稀释/浓度应由最终用户确定。

船首 AB型 特技
世界银行 1/1000—1/10000。检测大约75 kDa的带(预测分子量:77 kDa)。
IHC-P 1/100。在IHC染色方案开始之前用TrIS/EDTA缓冲液pH 9进行热介导的抗原修复。

未纯化的使用率为1/250~1/500。

流式细胞术 1/20。

未纯化的使用率为1/100。

AB17230-兔单克隆IgG,适合用作该抗体的同种型对照。

知识产权 1/20。

未纯化的使用率为1/100。

ICC/IF 1/200。

200nm的PMA处理30分钟诱导PKCα向膜转运。

免疫复合物受体 1/100。

特效药

船首

  • 第1巷野生型HAP1细胞裂解液(20μg)
    第2巷PKCα敲除HAP1细胞裂解液(20μg)
    第3巷K562细胞裂解液(20μg)
    第4巷HEK293细胞裂解液(20μg)
    1—4车道合并信号(红色和绿色)。绿色-AB33676在77 kDa处观察到。红色负载控制,AB8245,观察到37 kDa。

    AB32476在野生型HAP1细胞中与PKCα特异性反应。当PKCα敲除样品被检查时没有观察到带。野生型和PKCα敲除样品进行SDS-PAGE。AB323 76AB8245(GAPDH的负荷控制)分别稀释1/5000和1/1000,在4℃孵育过夜。用羊抗兔IgG H& L(印迹)开发印迹。®预吸附(800 CW)AB21673和山羊抗小鼠IgG H&L(Ir染料)®第六百八十)预吸附AB21677二次抗体在室温下稀释1/10000小时,成像前1小时。

  • 在200nm的PMA处理野生型HAP1细胞(顶板)和200kPMA处理的敲除HAP1细胞(下盘)中,未纯化的Ab323 76染色PKCα染色野生型HAP1细胞(顶面板)和PKCα。用200nm PMA处理细胞30分钟,诱导PKCα向细胞膜转运。然后用100%甲醇(5min)固定细胞,用0.1%的Triton X-100渗透5分钟,然后用1% BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1% pB-TWEN中阻断1h,然后用AB323 76在1/200稀释液中孵育。AB791在1ug/ml浓度下,每隔4±C过夜,然后在室温下进一步孵育1h,山羊抗IgG的第二抗体(Alexa Furor®488)。AB1500)2μg/ml(绿色显示)和山羊IgG的山羊次级抗体(Alexa Furor®594)AB15117在2ug/ml(用伪彩色红色显示)。用DAPI标记蓝色核DNA。

    在4%甲醛(10分钟)固定的HAP1细胞中,在相同的测试条件下也得到阳性信号。


    采用共焦显微镜(徕卡MyStices,TCS SP8)拍摄图像。

  • Ab323 76(纯化)在1:20稀释(0.ug)免疫沉淀PKCα在293(人胚胎肾上皮细胞)全细胞裂解液中。

    泳道1(输入):293(人胚肾上皮细胞)全细胞裂解液10ug

    泳道2(+):AB323 76和293(人胚肾上皮细胞)全细胞裂解液

    泳道3(-):兔单克隆IgGAB17230代替AB32476在293(人胚肾上皮细胞)中的全细胞裂解物

    Western blot检测IP检测试剂(HRP)AB131366用于1:1000稀释液的检测。

    阻隔和稀释缓冲液:5% NFDM/TBST。

    在37 kDa和50kDa之间的带可能是C项片段。(PMED:10381525)

  • Ab323 76(纯化)在1:20稀释(0.ug)中免疫沉淀PKCα在Jurkat(人T细胞白血病T淋巴细胞)全细胞裂解液中。

    泳道1(输入):Jurkat(人T细胞白血病T淋巴细胞)全细胞裂解液10ug

    泳道2(+):AB32476和Jurkat(人T细胞白血病T淋巴细胞)全细胞裂解物

    泳道3(-):兔单克隆IgGAB17230代替AB32476在Jurkat(人T细胞白血病T淋巴细胞)全细胞裂解液中的表达


    Western blot检测IP检测试剂(HRP)AB131366用于1:1000稀释液的检测。

    阻隔和稀释缓冲液:5% NFDM/TBST。

    在37 kDa和50kDa之间的带可能是C项片段。(PMED:10381525)

  • 未纯化的AB323 76在野生型HAP1细胞(顶板)中的PKCα和敲除HAP1细胞中的PKCα(下盘)。在未处理的条件下,PKCα在细胞的细胞质中表达。然后用100%甲醇(5min)固定细胞,用0.1%的Triton X-100渗透5分钟,然后用1% BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1% pB-TWEN中阻断1h,然后用AB323 76在1/200稀释液中孵育。AB791在1ug/ml浓度下,每隔4±C过夜,然后在室温下进一步孵育1h,山羊抗IgG的第二抗体(Alexa Furor®488)。AB1500)2μg/ml(绿色显示)和山羊IgG的山羊次级抗体(Alexa Furor®594)AB15117在2ug/ml(用伪彩色红色显示)。用DAPI标记蓝色核DNA。

    在4%甲醛(10分钟)固定的HAP1细胞中,在相同的测试条件下也得到阳性信号。


    采用共焦显微镜(徕卡MyStices,TCS SP8)拍摄图像。

  • 第1巷野生型HAP1细胞裂解液(20μg)
    第2巷PKCα敲除HAP1细胞裂解液(20μg)
    第3巷K562细胞裂解液(20μg)
    第4巷HEK293细胞裂解液(20μg)

    1—4车道合并信号(红色和绿色)。绿色-未纯化的AB33676在77 kDa处观察到。红色负载控制,AB8245,观察到37 kDa。

    这种Western blot图像是AB323 76和竞争对手的最早引用的兔多克隆抗体的比较。

  • Flow Cytometry分析HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)细胞用纯化的AB32476标记PKCα,以1:20稀释(5μg/ml)(红色)标记。用4%多聚甲醛固定细胞。山羊抗兔IgG(Alexa For)®488)在1∶2000稀释液中使用二次抗体。同种型对照- 90%甲醇。未标记的对照-兔单克隆IgG(黑色)。不与原代抗体和二级抗体(蓝色)孵育的细胞。

  • 用纯化的AB323 76细胞(0.4μg/ml)标记人宫颈癌上皮细胞Hela细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析。用4%聚甲醛固定细胞,用0.1% Triton X-100渗透。用AB19589抗α-微管蛋白抗体[D11a] - Microtubule Marker(Alexa For)对细胞进行复染®594)1:200(2.5μg/ml)。AB1500羊抗兔IgG(Alexa For)®488)以1:1000稀释液作为第二抗体。DAPI核复染剂PBS代替原代抗体作为二次抗体对照。

  • 免疫组化(福尔马林/PFA固定石蜡切片)分析纯化的Ab323 76在1:100稀释液(1.01μg/ml)下标记PKCα。使用EDTA缓冲液,pH9.0进行热介导的抗原检索,进行热介导的抗原检索。用苏木精对组织进行染色。免疫组化一步法HRP聚合物(即刻使用)二次抗体以1:0稀释。PBS代替原代抗体作为阴性对照。

  • 免疫组化(福尔马林/PFA固定石蜡切片)分析脑胶质瘤组织切片,以纯化的AB32476标记PKCα,以1:100稀释(1.01μg/ml)。使用EDTA缓冲液,pH9.0进行热介导的抗原检索,进行热介导的抗原检索。用苏木精对组织进行染色。免疫组化一步法HRP聚合物(即刻使用)二次抗体以1:0稀释。PBS代替原代抗体作为阴性对照。

  • 免疫组化(福尔马林/PFA固定石蜡切片)分析纯化的Ab323 76在1∶100稀释(1.01μg/ml)下标记PKCα。使用EDTA缓冲液,pH9.0进行热介导的抗原检索,进行热介导的抗原检索。用苏木精对组织进行染色。免疫组化一步法HRP聚合物(即刻使用)二次抗体以1:0稀释。PBS代替原代抗体作为阴性对照。

  • 免疫组化(福尔马林/PFA固定石蜡切片)分析人子宫内膜癌组织切片在纯化后的Ab323 76(1:100稀释)下标记PKCα(1.01μg/ml)。使用EDTA缓冲液,pH9.0进行热介导的抗原检索,进行热介导的抗原检索。用苏木精对组织进行染色。免疫组化一步法HRP聚合物(即刻使用)二次抗体以1:0稀释。PBS代替原代抗体作为阴性对照。

  • 所有车道:1/5000稀释(纯化)的抗PKCα抗体[Y124](AB32476)

    第1巷:293(人胚肾上皮细胞)全细胞裂解物
    第2巷:NIH/3T3(小鼠胚胎成纤维细胞)全细胞裂解物

    裂解物/蛋白质,每车道15盎司。

    次要的
    所有车道:山羊抗兔IgG H&L(HRP)AB97051单片机(1/50000稀释)

    预测波段大小:77 kDa



    阻隔稀释缓冲液:5% NFDM/TBST

  • 所有车道:1/5000稀释(纯化)的抗PKCα抗体[Y124](AB32476)

    第1巷:C6(大鼠胶质瘤神经胶质细胞)全细胞裂解物
    第2巷:猪骨骼肌裂解物

    裂解物/蛋白质,每车道15盎司。

    次要的
    所有车道:山羊抗兔IgG H&L(HRP)AB97051单片机(1/50000稀释)

    预测波段大小:77 kDa



    阻隔稀释缓冲液:5% NFDM/TBST

  • 重叠直方图显示HeLa细胞用未纯化的AB323 76(红线)染色。将细胞用4%多聚甲醛(10分钟)固定,然后用0.1%个PBS TWEN通透20分钟,然后在1X PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中孵育以阻断非特异性蛋白-蛋白相互作用,随后抗体(AB323 76,1/100稀释)在22℃下30分钟,第二抗体使用DyLoad®488山羊抗兔IgG(H+L)。AB96899在1/500℃稀释30 min,22℃时,同种型对照抗体(黑线)为兔单克隆IgG(1μg/1x10)。细胞)在相同条件下使用。术后随访5000例。该抗体在与相同条件下使用的0.1%个PBS TWEN中固定的甲醇(5分钟)/渗透的HeLa细胞中得到阳性信号。

  • 小鼠小肠组织的免疫组化分析,用未纯化的AB323 76染色PKCα。

  • 所有车道:1/10000稀释(纯化)的抗PKCα抗体[Y124](AB32476)

    第1巷:K562(人慢性粒细胞白血病淋巴母细胞)全细胞裂解物
    第2巷:Hela(人宫颈腺癌上皮细胞)全细胞裂解物

    裂解物/蛋白质,每车道20盎司。

    次要的
    所有车道:山羊抗兔IgG H&L(HRP)AB97051单片机(1/20000稀释)

    预测波段大小:77 kDa
    观察波段大小:80 kDa
    为什么实际频带大小与预测不同?



    阻隔稀释缓冲液:5% NFDM/TBST
    在37 kDa和50kDa之间的带可能是C项片段。(PMED:10381525)

  • AB32476通过IPC/IF(免疫细胞化学/免疫荧光)在HT1080细胞系中染色PKC。用多聚甲醛固定细胞,用0.1% Triton X-100渗透。样品在22°C与原代抗体(PBS 1/400)共孵育1小时,用Alexa Furor®488缀合山羊抗兔IgG多克隆作为第二抗体(1/1000)。

    见复审

特技

该产品已被引用:

  • Miranda Silva D等。 主动脉缩窄引起慢性压力超负荷心肌(逆向)重塑的双心室改变特征 SCI代表 :2956(2019)。阅读更多(PubMed:30814653)
  • 邹特等。 类器官来源的c-KIT+/SSEA4 -人视网膜前体细胞在啮齿动物移植过程中促进保护性视网膜微环境。 NAT通信 :1205(2019)。阅读更多(PubMed:30872578)
参见本产品的所有45个出版物

一级标准

-属于15评论或问答

应用
蛋白质印迹法
样品
人细胞裂解物-全细胞(人脐静脉内皮细胞)
凝胶运行条件
非还原非变性(天然)(10%)
装载量
20μg
规格
人脐静脉内皮细胞
阻塞步骤
牛奶作为30分钟(s)·浓度的封闭剂:5%℃:25℃

用户社区

核实客户

11月07日电

应用
免疫组化(冰冻切片)
样品
斑马鱼细胞(5μm冷冻视网膜切片)
透化作用
规格
5μm冷冻视网膜切片
阻塞步骤
血清阻断剂为30分钟(S)·浓度:20%℃:25℃
固定剂
多聚甲醛

Jenny Lenkowski博士

核实客户

02八月2017日

应用
免疫组化(PFA灌注固定冰冻切片)
样品
Fukomys anselli Tissue切片(视网膜)
抗原检索步骤
透化作用
规格
视网膜
阻塞步骤
血清阻断剂为1小时(s)和0分钟(s)·浓度:10%℃:温度21℃
固定剂
多聚甲醛

用户社区

核实客户

12月21日2016

应用
蛋白质印迹法
样品
大鼠组织裂解液-全(心脏)
凝胶运行条件
变性变性(9%)
装载量
60μg
治疗
肿瘤坏死因子α-30
规格
阻塞步骤
牛奶为2小时(S)和0分钟(S)·浓度的封闭剂:5%℃:温度22℃

Baptiste Jude先生

核实客户

07月2016日

问题
答案

很抱歉耽搁了你的时间。

用于提高抗PKCα抗体[Y1246](AB32476)的肽现在已经添加到您的目录中。这是在AB1339 53号目录下。

我希望这对我有帮助。如果您有任何问题,请不要犹豫,再次与我们联系。

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问题
答案

谢谢你的回复。

我将组织要加入目录的肽给你。一旦这样做了,我会告诉你的。

如果您还有任何问题,请随时与我们联系。

阅读更多

答案

感谢您星期五联系我们,用以提高抗PKCα抗体[Y124](AB32676)的免疫原。

请允许我说我能分享一些关于免疫原序列的信息。我不能给你们确切的序列,因为这是商业敏感的,但我可以说,使用的免疫原是从人PKCA的C端带出的合成肽,含有人PKCA的残基648~672(UnPROT:P17252)。

如果您感兴趣的话,我可以为您安排将阻断肽添加到目录中。

我希望这些信息对你有帮助。如果您需要进一步的信息,请随时与我们联系。

阅读更多
应用
蛋白质印迹法
样品
人细胞裂解液-全细胞(MCF7)
装载量
100000细胞
规格
MCF7
凝胶运行条件
变性变性
阻塞步骤
牛奶为1小时(S)和0分钟(S)·浓度的封闭剂:5%℃:温度24℃

用户社区

核实客户

5月17日2012

答案

根据我们的记录,AB32436被证明难以使用IWB,并且我们联系以帮助解决这个问题。看看我们的信件,看来我们正在等待更多的细节,以便帮助我们更好地了解所经历的困难。如果所请求的信息已经发送,它似乎没有达到我们的科学支持团队,我们对此不便表示歉意。在这种情况下,我们想再次询问信息,以便我们能够达成一项决议。如果问题已经解决,请让我们知道,这样我们可以放心,这个问题已经解决您满意,并更新我们的记录。我们祝您好运,期待您的回复。

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答案

谢谢您联系我们。我很抱歉听到你在我们的产品中遇到困难。我们认真对待产品投诉,调查每一件我们感觉不正确的产品。我正在附上我们的问卷,以便我们收集更多关于测试样本和使用的协议的信息。一旦我们收到了完整的问卷,我们将看看协议,看看是否有任何建议,我们可以做,可以提高结果。这些信息也将允许我们在内部调查这个案例,并在必要时启动额外的测试。如果产品是在过去六个月购买,并正在使用根据我们的Abpromise,我们将很高兴更换或退回抗体。我期待着收到你的回复。

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-属于15评论或问答

请注意:所有产品仅用于研究用途。不用于诊断程序
有关许可证查询,请联系PosisSts@ ABCAMC.

特惠