重组反腐败4抗体[EPR17929]-ChIP等级（ab181557）

染色质是根据Abcam X-ChIP协议从F9（鼠胚睾丸癌细胞系）细胞中制备的。用甲醛固定细胞10分钟。使用25µg染色质、5µg ab181557（红色）和20µl抗兔IgG sepharose珠进行ChIP。将5μg兔正常IgG添加到珠对照（灰色）中。免疫沉淀DNA通过实时PCR（Sybr green方法）定量。

“pro”代表启动子区，“NC2”代表阴性对照，即启动子区的阴性位点。

封闭和稀释缓冲液：5%NFDM/TBST

Oct4在未分化胚胎干细胞和癌干细胞样细胞中高度表达（PMID:2601316221826175）。ab181557在低表达Oct4的未分化癌细胞系中，如HeLa、HEK-293、MDA-MB-231、HepG2、Huh7、HCT-116和PANC-1（PMID:21975933、29789579、2562591、26059097、23928699、27344963、25837691、29254202、28854261、27996162），即使稀释度为1:200，也无法检测到靶带。

对4%对甲醛固定、0.1%Triton X-100渗透性NCCIT（人类多能干胚胎癌）细胞（阳性细胞系）或NIH/3T3（小鼠embyro成纤维细胞）细胞（阴性细胞系）进行免疫荧光分析，在1/250稀释度下用ab181557标记Oct4，然后用山羊抗兔IgG（Alexa Fluor®488）(约150077)1/400稀释度的二级抗体（绿色）。共聚焦图像显示NCCIT细胞系上的核染色和弱细胞质染色。NIH/3T3细胞系中呈阴性表达。细胞核反染为DAPI（蓝色）。用检测到Tubulin约7291（抗Tubulin小鼠单克隆抗体），稀释1/500ab150120型（AlexaFluor®594山羊抗鼠次要），稀释度为1/500（红色）。
阴性对照如下：
-ve对照1:ab181557，1/250稀释，然后ab150120型（AlexaFluor®594山羊抗鼠次要），稀释度为1/500。
-ve控制2：约7291（抗Tubulin小鼠单克隆抗体），稀释1/1000，然后约150077（Alexa Fluor®488 Goat Anti-Rabbit IgG H&L），稀释度为1/400。

染色质是从NCCIT（人类多潜能胚胎癌细胞系）细胞中制备的。使用10^7个NCCIT细胞和8µg ab181557[EPR17929]进行ChIP。ChIP DNA在Illumina NovaSeq 6000上测序，深度为3000万读。
可以下载映射读取的其他屏幕截图在这里.

ab181557通过ICC/IF（免疫细胞化学/免疫荧光）对人胚胎干细胞中的Oct4进行染色。用甲醛固定细胞，用0.1%Triton在PBS中渗透1小时，用10%血清在25°C下封闭1小时。样品与一级抗体（1/200，PBS中含有0.1%吐温20）在4°C下孵育16小时。单克隆山羊抗兔Alexa Fluor^®594作为次级抗体，稀释度为1/200。

参见Abreview

Oct4从1mg NCCIT（人类多能性胚胎癌）全细胞提取物中以1/50稀释的ab181557进行免疫沉淀。使用ab181557在1/10000稀释度下对免疫沉淀物进行Western blot。抗抗体IgG（HRP）是针对非还原型IgG的，以1/1500稀释度作为二级抗体。

通道1:NCCIT全细胞提取物10µg（输入）。第2通道：NCCIT全细胞提取物中的ab181557 IP。通道3：兔单克隆IgG(约172730)而不是NCCIT全细胞提取物中的ab181557。
阻塞和稀释缓冲液和浓度：5%NFDM/TBST。

曝光时间：3分钟

阻塞/稀释缓冲液：5%NFDM/TBST。

成人组织低表达

ab181557通过细胞内流式细胞术对人类细胞系NCCIT（人类多能干胚胎癌）中的OCT-4进行染色。用4%多聚甲醛固定细胞，并将样品与一级抗体以1/70的稀释度孵育。山羊抗兔IgG（Alexa Fluor^®488），稀释度为1/2000，用作二级抗体（红色）

同位素对照：兔IgG单克隆[EPR25A]约172730（黑色）

未标记对照：未与一级抗体和二级抗体孵育的细胞（蓝色）

石蜡包埋人卵巢无性细胞瘤组织的免疫组织化学分析，以1/1000稀释的ab181557标记Oct4，然后用山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP）标记(ab97051型)1/500稀释度的二级抗体。观察了人类卵巢无性细胞瘤癌细胞的核染色和弱细胞质染色。苏木精逆行染色。

阴性对照：用PBS代替一级抗体，二级抗体为山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP）(ab97051型)稀释1/500。

在开始IHC染色方案之前，用pH为6的柠檬酸缓冲液进行热介导抗原回收。

石蜡包埋人乳腺癌组织标记Oct4的免疫组织化学分析，ab181557稀释1/1000，然后是山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP）(ab97051型)1/500稀释度的二级抗体。人类乳腺癌的阴性染色。苏木精反染。

阴性对照：用PBS代替一级抗体，二级抗体为山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP）(ab97051型)稀释1/500。

在开始IHC染色方案之前，用pH为6的柠檬酸缓冲液进行热介导抗原回收。

石蜡包埋人睾丸组织标记Oct4的免疫组织化学分析，ab181557稀释1/1000，然后是山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP）(ab97051型)1/500稀释度的二级抗体。成人睾丸的阴性染色。苏木精反染。

阴性对照：用PBS代替一级抗体，二级抗体为山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP）(ab97051型)稀释1/500。

在开始IHC染色方案之前，用pH为6的柠檬酸缓冲液进行热介导抗原回收。