抗Nrf2[EP1808Y]（ab62352）

ab62352在未经处理的野生型A549细胞（左面板）、处理的野生类型A549细胞和未经处理NFE2L2敲除的A549细胞中染色Nrf2（右面板）。用2µM MG-132处理细胞18小时(ab141003号). 用4%多聚甲醛固定细胞（10分钟），然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟，然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。然后用浓度为0.2µg/ml的ab62352培养细胞，并约7291（鼠抗α-管蛋白单克隆抗体）在4°C下以1/1000稀释过夜，然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体（Alexa Fluor^®488) (约150081)在2µg/ml（以绿色显示）和山羊对小鼠IgG的二级抗体（Alexa Fluor^®594) (ab150120型)浓度为2µg/ml（以洋红色显示）。核DNA用DAPI标记为蓝色。
使用共焦显微镜（Leica-Microsystems TCS SP8）拍摄图像。

Western blot假彩色图像：抗-Nrf2抗体[EP1808Y]-ChIP级染色，稀释1/500，以绿色显示；小鼠抗GAPDH抗体[6C5](约8245)以1/20000稀释度进行负载控制染色，以红色显示。在Western blot中，ab62352显示与Nrf2特异结合。在野生型HeLa细胞裂解液中在85 kDa处观察到一条带，在NFE2L2 CRISPR-Cas9编辑的细胞系中未观察到该大小的信号约262507（CRISPR-Cas9编辑的细胞裂解物约263934). 在CRISPR-Cas9编辑的低于85kDa的裂解液通道中观察到的谱带可能代表Nrf2的截断形式。这还没有进一步研究，基因产物的功能特性也没有确定。为了生成该图像，分析了野生型和NFE2L2 CRISPR-Cas9编辑的HeLa细胞裂解物。首先，样品在SDS-PAGE凝胶上运行，然后转移到硝化纤维素膜上。TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞^®20（TBS-T），然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。在TBS-T中清洗四次斑点，在室温下与二级抗体孵育1小时，再次清洗四次，然后成像。使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L（IRDye^®800CW）预吸收床(ab216773号)和山羊抗鼠IgG H&L（IRDye^®680RD）预吸收床(约216776)稀释1/20000。

蛋白质印迹的假彩色图像：1/1000稀释的抗-Nrf2抗体[EP1808Y]-ChIP级染色，显示为绿色；小鼠抗GAPDH抗体[6C5](约8245)以1/20000稀释度进行负载控制染色，以红色显示。在Western blot中，ab62352显示与Nrf2特异结合。

在野生型A549细胞裂解液中观察到85-90 kDa的靶带（箭头所示），在NFE2L2敲除细胞系中未观察到该大小的信号约285359（敲除细胞裂解物约289682). WT和KO上都存在低于目标的波段，我们不确定该波段的身份。

为了生成此图像，分析了野生型和NFE2L2敲除A549细胞裂解物。请注意，MG132治疗不会影响Nrf2的表达水平。首先，样品在SDS-PAGE凝胶上运行，然后转移到硝化纤维素膜上。在与一级抗体在4°C下孵育过夜之前，将膜封闭在TBS-0.1%Tween®20（TBS-T）中的3%牛奶中。在TBS-T中清洗四次斑点，在室温下与二级抗体孵育1小时，再次清洗四次，然后成像。二级抗体为羊抗兔IgG H&L 800CW和羊抗鼠IgG H&L 680RD，稀释度为1/20000。

HepG2细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析用纯化的ab62352标记1/500的Nrf2。细胞用4%多聚甲醛固定，并用0.1%Triton X-100渗透。约150077，Alexa Fluor^®用488-结合羊抗兔IgG（1/500）作为二级抗体。这些细胞与公元195889年，Alexa Fluor^®594-结合小鼠抗α-微管蛋白抗体（1/200）。细胞核用DAPI（蓝色）复染。

二级抗体对照：用PBS代替一级抗体作为阴性对照。

ab62352染色未经处理的HeLa细胞（顶部面板）和处理的HeLa细胞（底部面板）中的Nrf2。用2µM MG-132处理细胞18小时(ab141003号). 用4%多聚甲醛固定细胞（10分钟），然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟，然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。然后用1µg/ml浓度的ab62352培养细胞，并约7291（鼠抗α-管蛋白单克隆抗体）在4°C下以1/1000稀释过夜，然后在室温下与羊抗兔IgG二级抗体（Alexa Fluor®488）进一步孵育1小时(约150081)浓度为2µg/ml（以绿色显示）和山羊对小鼠IgG的二级抗体（Alexa Fluor®594）(ab150120型)浓度为2µg/ml（以红色显示）。核DNA用DAPI标记为蓝色。
使用共焦显微镜（Leica-Microsystems TCS SP8）拍摄图像。

Nrf2的表达受到氧化应激、电泳物和化学激活物的刺激（PMID:25761198、PMID:27638861和PMID:28587109）。ab62352在WB中的大多数未经处理的样本中未检测到信号。建议使用刺激物处理过的样品。

采用1:1000的ab62352对人iPSC-心肌细胞进行Western blot分析。封闭剂和稀释缓冲液为TBS-Tween中5%脱脂乳。

对人iPSC-心肌细胞进行细胞分馏，以将细胞核与细胞质分离（2巷）。

参见Abreview

HeLa细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析，用1/500纯化的ab62352标记Nrf2。细胞用4%多聚甲醛固定，并用0.1%Triton X-100渗透山羊抗狂犬病IgG H&L（Alexa Fluor®488）（ab150077）二级抗体（1/1000）作为二级抗体。细胞被复染公元195889年，抗α-管蛋白抗体[DM1A]-微管标记物（Alexa Fluor^®594). DAPI染色细胞核为蓝色。

二级抗体对照：用PBS代替一级抗体作为阴性对照。

HeLa细胞的细胞内流式细胞术分析，使用稀释1/60（红色）的纯化ab62352标记Nrf2。细胞用4%多聚甲醛固定。山羊抗狂犬病IgG H&L（Alexa Fluor^®488) (约150077)二级抗体（1/2000）作为二级抗体。黑色-同位素对照，兔单克隆IgG(约172730). 蓝色-未标记对照，细胞未与初级和次级抗体孵育。 

用ab62352标记1/40（红色）的Nrf2的HeLa（人宫颈腺癌）细胞的细胞内流式细胞术分析。细胞用4%多聚甲醛固定，并用90%甲醇渗透。Alexa荧光笔^®用488-结合羊抗兔IgG（1/2000）作为二级抗体。黑色-同位素对照，兔单克隆IgG。蓝色-未标记对照，细胞未与初级和次级抗体孵育。