重组抗Ki67抗体[SP6]（ab16667）

蛋白质印迹：1/500稀释的抗MKI67抗体[SP6]（ab16667）染色，显示为绿色；鼠抗CANX[CANX/1543](ab238078型)以1/20000稀释度加载控制染色，以洋红色显示。在Western blot中，ab16667被证明与MKI67特异结合。在野生型A549细胞裂解液中在359 kDa处观察到一条带，在MKI67敲除细胞系中未观察到该大小的信号。为了生成此图像，分析了野生型和MKI67敲除A549细胞裂解物。首先，样品在SDS-PAGE凝胶上运行，然后转移到硝化纤维素膜上。TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞^®20（TBS-T），然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。在TBS-T中清洗四次斑点，在室温下与二级抗体孵育1小时，再次清洗四次，然后成像。二级抗体为羊抗兔IgG H&L 800CW和羊抗鼠IgG H&L 680RD，稀释度为1/20000。

参见Abreview

HCT116细胞球体中Ki67的ab16667染色。细胞用100%甲醇固定（5分钟），用0.5%Triton X-100渗透1小时，然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中隔夜室温下封闭。然后在室温下用ab16667以2µg/ml和约7291，小鼠单克隆[DM1A]以2µg/ml的速度与α-管蛋白结合。DAPI用作核复染（以蓝色显示）。作为次级抗体约150081山羊抗兔（Alexa Fluor^®488）（以绿色显示）和ab150120型山羊抗鼠（Alexa Fluor^®594）（以洋红色显示），在室温下培养过夜。所有渗透、封闭和抗体培养步骤均使用旋转振动筛进行。

使用高含量分析仪（Operetta CLS、Perkin Elmer）采集图像，并显示共焦截面的最大强度投影。

抗体ab16667在4%甲醛固定（10分钟）下也有效。

FFPE正常人扁桃体组织的致色多重免疫组化染色。Ab16667，抗Ki67 DAB染色原。Ab16669，抗CD3紫色染色原和约192847年，抗CD68蓝绿色染色剂加苏木精II复染。
在Roche Ventana Benchmark Ultra仪器上进行显色免疫染色。将切片脱蜡，并与CC1溶液孵育24分钟，100°C。在此之后，按照ab16667（1/500）的顺序进行3轮染色，约192847年(1/4000)公元16669年(1/1000). 在染色轮之间，使用Ultra CC2溶液在100°C下进行8分钟的抗体变性，以避免交叉反应。先用抗兔HQ开发信号，然后用抗-HQ HRP结合Chromomap DAB试剂盒、Discovery紫色或Discovery-青色系和苏木精II复染。

免疫组织化学分析中，使用“ab16667”在1/200稀释度（0.145μg/ml）下对“抗Ki67抗体[SP6]”进行组织芯片染色。该表提供了阳性（勾号）和阴性（十字号）的详细概述每个测试样品类型的染色。以小鼠脾组织为例，Ki67在正常肝组织中几乎不表达或表达水平很低，IHC试验结果通常为阴性。而Ki67在脾组织增殖细胞中的表达上调，IHC试验结果为阳性。
使用热介导抗原检索对切片进行预处理约93678（柠檬酸缓冲液，pH 6.0）。切片在+4°C下与ab16667孵育过夜，然后使用现成的山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP聚合物）(约214880). 苏木精用作反染色。

福尔马林固定石蜡包埋人结肠癌组织切片中ab16667染色Ki67的IHC图像。用ab16667在1/200（0.145μg/ml）稀释液中孵育切片，并准备使用山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP聚合物）(约214880)被用作次要的反体。人结肠癌的阳性染色。该切片在4°C下与ab16667孵育过夜。用苏木精对切片进行复染。 

热介导抗原检索使用约93678（柠檬酸缓冲液，pH 6.0）。

用1/200（0.145µg/ml）ab16667标记Ki67的石蜡包埋小鼠肾组织，然后用现成的LGoat抗狂犬病IgG H&L（HRP聚合物）二级抗体进行免疫组织化学分析(约214880).低表达：仅在小鼠肾脏增殖细胞（箭头）上呈阳性染色。将切片在4°C下用ab16667孵育过夜，并用苏木精复染。

仅二级抗体对照：二级抗体是一种现成的山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP聚合物）(约214880).

热介导抗原检索使用约93678（柠檬酸缓冲液，pH 6.0）。

用1/200（0.145µg/ml）的ab16667标记石蜡包埋小鼠肝组织Ki67，然后用现成的LGoat抗狂犬病IgG H&L（HRP聚合物）二级抗体进行免疫组织化学分析(约214880).低表达：仅在小鼠肝脏增殖细胞（箭头）上呈阳性染色。将切片在4°C下用ab16667孵育过夜，并用苏木精复染。

仅二级抗体对照：二级抗体是一种现成的山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP聚合物）(约214880).

热介导抗原检索使用约93678（柠檬酸缓冲液，pH 6.0）。

用1/200（0.145µg/ml）的ab16667对石蜡包埋的人肾组织标记Ki67进行免疫组织化学分析，然后使用现成的LGoat抗狂犬病IgG H&L（HRP聚合物）二级抗体(约214880).低表达：阳性染色仅见于人肾脏的增殖细胞（箭头）。将切片在4°C下用ab16667孵育过夜，并用苏木精复染。

仅二级抗体对照：二级抗体是一种现成的山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP聚合物）(约214880).

热介导抗原检索使用约93678（柠檬酸缓冲液，pH 6.0）。

用1/200（0.145µg/ml）的ab16667对石蜡包埋的人肝组织标记Ki67进行免疫组织化学分析，然后使用现成的LGoat抗狂犬病IgG H&L（HRP聚合物）二级抗体(约214880).低表达：仅在人肝脏的增殖细胞（箭头）上呈阳性染色。将切片在4°C下用ab16667孵育过夜，并用苏木精复染。

仅二级抗体对照：二级抗体是一种现成的山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP聚合物）(约214880).

热介导抗原检索使用约93678（柠檬酸缓冲液，pH 6.0）。

免疫组织化学分析中，使用“ab16667”在1/200稀释度（0.145μg/ml）下对“抗Ki67抗体[SP6]”进行组织芯片染色。该表提供了阳性（勾号）和阴性（十字号）的详细概述每个测试样品类型的染色。以人结肠组织为例，正常结肠组织中Ki67几乎不表达或表达水平很低，IHC检测结果通常为阴性。而Ki67在结肠组织增殖细胞中的表达上调，IHC试验结果可能为阳性。
使用热介导抗原检索对切片进行预处理约93678（柠檬酸缓冲液，pH 6.0）。切片在+4°C下与ab16667孵育过夜，然后使用现成的山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP聚合物）(约214880). 苏木精用作反染色。

ab16667染色野生型HAP1细胞中的Ki67（顶面板）和Ki67敲除HAP1的细胞（底面板）。细胞用100%甲醇固定5分钟，用0.1%Triton X-100渗透5分钟，然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。然后用ab16667以1/250的稀释度培养细胞，并约195889年以1/250稀释度（以伪红色显示）在+4°C下过夜，然后在室温下进一步培养1小时山羊抗狂犬病IgG H&L（Alexa Fluor®488）预吸附（ab150081）二级抗体浓度为2μg/ml（以绿色显示）。核DNA用DAPI标记为蓝色。

这张图片是从杂交瘤版本生成的。

1-3车道：合并信号（红色和绿色）。绿色-在359 kDa下观察到ab16667。红色负载控制，约130007在125 kDa时观察到。  

在野生型HeLa细胞中，ab16667与Ki67反应。敲除细胞系时观察到信号丢失约255407（敲除细胞裂解物约263762)已使用。对野生型和Ki67基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。ab16667和抗V蛋白抗体[VIN-54](约130007)分别在4°C下以1/100稀释度和1/20000稀释度培养过夜。用山羊抗兔IgG H&L（IRDye^®800CW）预吸附床(ab216773号)和山羊抗鼠IgG H&L（IRDye^®680RD）预吸附床(约216776)二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。

福尔马林固定石蜡包埋人扁桃体切片的免疫组织化学分析，以1/200（0.156µg/mL）的ab16667标记Ki67。 

图像A: 
二级抗体是一种现成的山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP聚合物）
人类扁桃体组织与ab16667在+4°C孵育过夜。
热介导抗原检索约93678（柠檬酸缓冲液，pH 6.0）。
人类扁桃体上的核染色。该切片在+4°C下与ab16667孵育过夜。

图像B：
二级抗体是现成的LeicaDS9800（Bond™Polymer Refine Detection）
在徕卡生物系统BOND上用ab16667培养人扁桃体组织^®RX仪器。
用柠檬酸缓冲液（pH 6.0，表位检索溶液2）进行20分钟的热介导抗原检索。

ab16667在福尔马林固定石蜡包埋的大鼠脾脏组织切片中染色Ki67的IHC图像。采用热介导抗原回收法（柠檬酸缓冲液，pH 6.0）对切片进行预处理。然后用ab16667，1/200（0.156µg/mL）稀释液培养切片，并使用现成的山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP）抗体检测。大鼠脾脏的核染色。该切片在+4°C下与ab16667孵育过夜。DAB被用作发色剂。然后用苏木精对切片进行复染。 

福尔马林固定石蜡包埋人扁桃体组织切片中ab16667染色Ki67的IHC图像。使用热介导抗原检索对切片进行预处理约93678（柠檬酸缓冲液，pH 6.0）。然后用ab16667，1/200（0.156µg/ml）稀释液培养该切片，并使用现成的山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP）抗体进行检测。观察到人类扁桃体的核染色。该切片在+4°C下与ab16667孵育过夜。DAB被用作发色剂。然后用苏木精对切片进行复染。 

正常人扁桃体组织的荧光多重免疫组织化学分析（福尔马林固定石蜡包埋切片）。

抗PD1融合染色(ab237728号; 橙色；Opal™520），抗PDL1(ab237726号; 绿色；Opal™540），抗CD68(约192847年; 黄色的；Opal™570），抗CD3(公元16669年; 红色；Opal™620）、抗Ki67（ab16667；浅蓝色；Opal™650）和抗PanCK(约7753; 灰色；Opal™690）。

在徕卡生物系统BOND上进行免疫染色^®带有Opal™7色自动IHC套件的RX仪器（NEL821001KT，Akoya Biosciences^®).

切片在六轮染色中培养；按照…的顺序ab237728号（1/500稀释），ab237726号（1/500稀释），约192847年（1/300稀释），公元16669年（1/300稀释），ab16667（1/200稀释）和约7753（1/200稀释）；每个都使用单独的荧光酪胺信号放大系统。

柠檬酸钠抗原检索（徕卡ER1，pH6.0，30分钟）用于轮间酪胺信号放大，以去除前一轮的抗体，避免任何交叉反应。

DAPI（深蓝色）用作核反染剂。

使用Vectra Polaris对单个Opal™染料进行显微镜和假染色。

这张图片是从杂交瘤版本生成的。

人类扁桃体标记PD1的免疫组织化学（福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片）分析约243644在1/500稀释度（1.02µg/mL）下（D），Ki67和ab16667在1/200稀释度（0.15μg/mL）下（B），PD-L1和约228462稀释度为1/100（0.52μg/ml）（C）。Opal Polymer HRP Ms+Rb被用作第二抗体，DAPI被用于核抗衡染色。用柠檬酸缓冲液（pH 6.0，表位检索溶液1）进行20分钟的热介导抗原检索。

A组：人类扁桃体上抗Ki67（洋红色；Opal™690）、抗PD-L1（红色；Opal570）和抗PD1（绿色；Opal520）的合并染色。
B组：增殖细胞核抗Ki67染色。
图C：抗PD-L1染色在参与T细胞抑制的细胞膜上。
D组：抗原刺激T细胞上的抗PD1染色。

切片经过三轮染色培养：按照ab16667的顺序培养10分钟，约24364430分钟约228462在室温下保持10分钟。每一轮之后都有一个单独的荧光酪胺信号放大系统。

免疫染色在莱卡生物系统BOND®RX仪器和Opal™4色试剂盒上进行。使用徕卡SP8共焦显微镜进行图像采集。

福尔马林固定石蜡包埋小鼠脾组织切片中ab16667染色Ki67的IHC图像。使用热介导抗原检索对切片进行预处理约93678（柠檬酸缓冲液，pH 6.0）。然后用ab16667，1/200（0.156µg/mL）稀释液培养切片，并使用现成的山羊抗狂犬病IgG H&L（HRP）抗体进行检测。小鼠脾脏的核染色。该切片在+4°C下与ab16667孵育过夜。DAB被用作发色剂。然后用苏木精对切片进行复染。 

仅二级抗体对照：二级抗体为约1500771000稀释度（2µg/mL）的山羊抗狂犬病IgG H&L（Alexa Fluor®488）。

仅二级抗体对照：二级抗体为约1500771000稀释度（2µg/mL）的山羊抗狂犬病IgG H&L（Alexa Fluor®488）。

4%多聚甲醛固定90%甲醇渗透亲本HAP1（野生型对照人慢性粒细胞白血病近单倍体细胞系）细胞的细胞内流式细胞术分析，在1/500稀释度（0.1ug）（红色）下用ab16667标记Ki67，与兔单克隆IgG比较(约172730)（黑色）同型对照和未标记对照（未与一级抗体和二级抗体孵育的细胞）（蓝色）。山羊抗兔IgG（Alexa Fluor®488，约150077)以1/2000稀释液作为二级抗体。

重叠直方图显示用ab16667染色的HAP1野生型（绿线）和HAP1-MKI67敲除细胞（红线）。用80%甲醇固定细胞（5分钟），然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清中培养细胞，以阻止非特异性蛋白质相互作用，然后在22°C下用抗体（ab16667,1/1000）培养30分钟。使用的第二抗体是山羊抗兔IgG H&L（Alexa Fluor^®488）预吸附层(约150081)二级抗体在22°C下以1/2000稀释30分钟。兔IgG同型控制抗体(约172730)在与第一抗体相同的浓度和条件下使用（HAP1野生型-黑线，HAP1-MKI67敲除-灰线）。未标记样本也用作对照（为了简单起见，未显示此行）。使用50 mW蓝光激光器（488nm）和530/30带通滤波器采集了超过5000个事件。这张图片是从杂交瘤版本生成的。 

用1/250稀释度的ab16667标记Ki67的人心脏干细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析。细胞固定在多聚甲醛中，并用0.01%的Triton x-100渗透。细胞在室温下在BSA中被封闭1小时。多克隆鸡抗兔Alex Fluor^®以1/500稀释度使用488个二级抗体。 

这张图片是从杂交瘤版本生成的。

参见Abreview

用免疫组织化学方法（福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片）对人睾丸中Ki67进行ab16667染色。用甲醛固定组织，并使用柠檬酸盐缓冲液执行热介导抗原回收步骤。然后在21℃下用1%的BSA封闭样品10分钟，然后在1/100的温度下用一级抗体孵育2小时。使用生物素结合的山羊抗兔多克隆作为次级抗体，稀释度为1/250。

这张图片是从杂交瘤版本生成的。

参见Abreview

ab16667用ICC/IF（免疫细胞化学/免疫荧光）染色人HEp-2细胞中的Ki67-增殖标记物。用多聚甲醛固定细胞，并用Triton X-100 0.25%在PBS中渗透。样品与一级抗体（DPBS中的1/50）在21°C下孵育1小时。使用Atto488-结合的驴抗兔多克隆（1/50）作为二级抗体。

这张图片是从杂交瘤版本生成的。

参见Abreview