重组抗Ki67抗体[EPR3610]（ab92742）

流式细胞术重叠直方图显示野生型Hap1（绿线）和MKI67敲除Hap1用ab92742染色（红线）。用80%甲醇固定细胞（5分钟），然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后将细胞培养在含有10%正常山羊血清的1x PBS中，以阻止非特异性蛋白-蛋白质相互作用，然后再接种抗体（ab92742）（1x 10⁶100μl，0.04μg/ml（1/57000）），22°C下30分钟。

将二级抗体山羊抗狂犬病IgG H&L（Alexa Fluor®488）预吸附液在1/4000的温度下于22°C孵育30分钟

同位素对照抗体重组兔IgG，单克隆[EPR25A]-同位素对照在与一级抗体相同的浓度和条件下使用（野生型Hap1-黑线，MKI67敲除Hap1-灰线）。未标记样本也用作对照（为了简单起见，未显示此行）。

使用50 mW蓝光激光器（488nm）和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。

在相同条件下，该抗体在4%甲醛固定/0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟的Hap1中发出阳性信号。

RNApII-S2P-/低细胞与Ki-67-细胞的比较

a： 在T98G胶质母细胞瘤细胞增殖和静止期间Ki-67和RNApII-S2P的调节。在含有10%（v/v）胎牛血清（FBS）的培养基中培养T98G细胞，在添加0.5%（v/v）FBS的培养基上通过血清饥饿诱导其静止14天，然后将其以1:5的比例分裂到含有10%（v/v）FBS新培养基中再进行刺激，并培养3天。用胰蛋白酶-EDTA溶液将细胞从培养皿中分离出来，固定在10%（v/v）中性缓冲福尔马林中，然后离心。切下颗粒的石蜡切片，通过单一（棕色；a1，a2，a4，a5，a7，a8）或双重免疫染色（Ki-67，棕色；RNApII-S2P，红色；a3，a6，a9）检测Ki-67和RNApII-S2P的表达。苏木精（蓝色）用作核染色剂。Ki-67-RNApII-S2P-/低细胞（双染色切片中的蓝色细胞）仅在静止状态下出现（a6，箭头）。比例尺，10μm。b： 胶质母细胞瘤组织连续切片中Ki-67（b1）和RNApII-S2P（b2）的单色免疫染色。Ki-67-肿瘤细胞常见，而坏死区周围仅观察到少量RNApII-S2P-/低细胞（箭头）。N、 坏死区；五、 血管。比例尺，50μm。

使用ab92742检测到Ki67。

（来自Ishii等人的图S2）

ab92742染色野生型HAP1细胞中的Ki67（上图）和Ki67敲除HAP1细胞（下图）。细胞用100%甲醇固定（5分钟），用0.1%Triton X-100渗透5分钟，然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。然后用ab92742以1µg/ml和约195889年以1/250稀释度（以伪红色显示）在+4°C下过夜，然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体（Alexa Fluor）进一步孵育1小时^®488）(约150081)浓度为2μg/ml（显示为绿色）。核DNA用DAPI标记为蓝色。

Alexa Fluor公司^®488 (约197234)和Alexa Fluor^®647 (公元196907年)这个克隆有共轭版本。

阻塞和稀释缓冲液：5%NFDM/TBST。

重叠直方图显示Ramos（人类Burkitt淋巴瘤细胞系）细胞被未纯化的ab92742（红线）染色。用80%甲醇固定细胞（5分钟），然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中培养细胞，以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用，然后在22°C下用抗体（未纯化的ab92742，1/100稀释）培养30分钟。使用的第二抗体是DyLight^®488山羊抗兔IgG（H+L）(约96899)在22°C下，1/500稀释30分钟。同型对照抗体（黑线）为兔IgG（单克隆）（1µg/1x10⁶电池）在相同条件下使用。 

采集了超过5000个事件。 

Alexa荧光粉^®488 (约197234)和Alexa Fluor^®647 (公元196907年)这个克隆有共轭版本。 

免疫组织化学（福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片）分析人宫颈鳞癌组织Ki67，纯化ab92742标记为1/250。使用Tris/EDTA缓冲液pH 9进行热介导抗原检索。ab97051型使用HRP缀合的山羊抗兔IgG（H+L）作为第二抗体（1/500）。苏木精复染。

阴性对照使用PBS代替一抗（插图）。

乳腺癌组织中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PgR）和Ki-67的显色三联免疫染色，以验证三联免疫检测方法。

小组e： 急诊室⁺PgR公司^-基-67^-细胞被染色为红色（短箭头），ER^-PgR公司⁺基-67^-细胞染色为蓝色（黑色箭头），ER⁺PgR公司⁺基-67^-细胞被染成紫色（长箭头），Ki-67⁺细胞呈棕色（白色箭头）。这些颜色很容易辨别。比例尺，25μm。

通过在pH为9的抗原回收溶液中煮沸，对脱蜡切片进行抗原回收预处理。用兔抗Ki67 ab92742单克隆抗体以1/1000的稀释度孵育切片。与（HRP）结合的二级抗体反应后，用（DAB）显色，切片用苏木精复染。

用纯化的ab92742标记Ki67（1/250）的HT-29（人大肠腺癌细胞系）细胞的免疫细胞化学分析。细胞用4%多聚甲醛固定，并用0.1%Triton X-100渗透。约150077，Alexa Fluor^®用488-结合羊抗兔IgG（1/500）作为二级抗体。DAPI（蓝色）用作核染色。约7291、小鼠抗微管蛋白（1/1000）和约150120，Alexa Fluor^®还使用了594-共轭山羊抗鼠IgG（1/500）。

控制1：一级抗体（1/250）和二级抗体，约150120，Alexa Fluor^®594-共轭山羊抗鼠IgG（1/500）。

控制2： 约7291（1/1000）和二级抗体，约150077，Alexa Fluor^®488-共轭山羊抗兔IgG（1/500）。

用未纯化ab92742标记Ki67的人正常结肠组织的免疫组织化学（福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片）分析。在开始IHC染色方案之前，进行热介导抗原回收。

用未纯化ab92742标记Ki67的人结肠腺癌组织的免疫组织化学（福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片）分析。在开始IHC染色方案之前，进行热介导抗原检索。

Ramos（人类Burkitt淋巴瘤细胞系）细胞的细胞内流式细胞术分析，用纯化的ab92742标记Ki67，比例为1/150（红色）。细胞用2%多聚甲醛固定。以FITC-偶联山羊抗兔IgG（1/150）作为二级抗体。黑色-同位素对照，兔单克隆IgG。蓝色-未标记对照，细胞未与初级和次级抗体孵育。 

未纯化ab92742标记Ki67的人卵巢癌组织的免疫组织化学（福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片）分析。在开始IHC染色方案之前，进行热介导抗原回收。

未纯化ab92742标记Ki67的人宫颈癌组织的免疫组织化学（福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片）分析。在开始IHC染色方案之前，进行热介导抗原回收。

用免疫细胞化学方法对人腺癌细胞Ki67进行ab92742染色。

用多聚甲醛固定细胞，用0.1%Triton X-100在PBS中渗透，并用5%血清在21°C下封闭1小时。样品与一级抗体（1/1000）在4°C下孵育12小时。A Cy3细胞^®以驴抗兔结合IgG多克隆作为次级抗体，稀释度为1/200。

参见Abreview

对HeLa（宫颈腺癌人上皮细胞系）细胞进行免疫细胞化学分析，以1/250的稀释度用未纯化的ab92742标记Ki67。