重组抗雌激素受体α抗体[E115]-芯片等级（ab32063）

1/5000稀释度ab32063对人子宫内膜石蜡包埋组织的免疫组化染色。二级抗体为羊抗兔IgG-H&L（HRP聚合物）。样品用苏木精反染色。抗原回收是用热介导的阿布93684（Tris/EDTA缓冲液，pH值9.0）。 

人子宫内膜细胞核染色。

封闭稀释缓冲液：5%NFDM/TBST。

ER66在子宫、卵巢、肾、肺、脑、肝、心脏中的表达水平较高（PMID:20861365、24977106、23675257、23940668、22070562），尤其在雄性或雌性幼体组织中表达水平较低（PMID:26384003、23940668）。ab32063不适合于检测卵巢和雌激素受体α低表达的组织。

4%多聚甲醛固定，0.1%Triton X-100渗透性4T1（小鼠乳腺癌上皮细胞系）细胞的免疫荧光分析，标记雌激素受体α，一级抗体抗雌激素受体α（ab32063），然后用山羊抗兔IgG H&L（Alexa Fluor）进行免疫荧光分析^®488页）(ab150081号)1/1000稀释度（2.0µg/mL）的次级抗体。共聚焦图像显示4T1细胞胞浆和细胞核染色。抗α-微管蛋白小鼠单克隆抗体-微管标记物（Alexa Fluor^®594页）(ab195889号)以1/200稀释度（2.5µg/mL）对微管蛋白进行复染。核反染色是蓝色的。

二级抗体唯一对照是：二级抗体是ab150081号山羊抗兔IgG H&L（Alexa Fluor^®488），稀释1/1000（2.0µg/mL）。

免疫荧光分析4%多聚甲醛固定，0.1%Triton X-100渗透性GH3（大鼠垂体上皮细胞系）细胞标记雌激素受体α和一级抗体抗雌激素受体α（ab32063），然后用山羊抗兔IgG H&L（Alexa Fluor）进行免疫荧光分析^®488页）(ab150081号)1/1000稀释度（2.0µg/mL）的次级抗体。共聚焦图像显示GH3细胞胞浆和细胞核染色。抗α-微管蛋白小鼠单克隆抗体-微管标记物（Alexa Fluor^®594页）(ab195889号)以1/200稀释度（2.5µg/mL）对微管蛋白进行复染。核反染色是蓝色的。

二级抗体唯一对照是：二级抗体是ab150081号山羊抗兔IgG H&L（Alexa Fluor^®488），稀释1/1000（2.0µg/mL）。

MCF-7细胞免疫细胞化学/免疫荧光分析1/1000纯化ab32063标记雌激素受体α。细胞用4%多聚甲醛固定，0.1%曲通X-100渗透。ab150077一辆Alexa Fluor^®以488株羊抗兔IgG（1/1000）为二级抗体。细胞与ab7291，小鼠抗微管蛋白（1/1000）使用ab150120型一辆Alexa Fluor^®以594株山羊抗鼠IgG（1/1000）为二级抗体。细胞核用DAPI（蓝色）复染。

对照1：一级抗体（1/1000）和二级抗体，ab150120型一辆Alexa Fluor^®594例山羊抗鼠IgG（1/1000）。

控制2：ab7291（1/1000）和次级抗体，ab150077一辆Alexa Fluor^®488例羊抗兔IgG（1/1000）。

用未纯化的ab32063结合雌激素受体α对人乳腺癌MCF7细胞进行芯片分析。细胞与1%甲醛交联10分钟。将样品与未稀释的一级抗体在4℃下孵育16小时。使用实时PCR检测蛋白质结合。
阳性对照：在PS2启动子处检测雌激素处理的MCF7细胞。
阴性对照：在PS2启动子处检测IgG芯片和无水乙醇细胞。

见Abreview

重叠直方图显示MCF7细胞未纯化ab32063染色（红线）。用4%多聚甲醛（10分钟）固定细胞，然后用0.1%PBS吐温渗透20分钟。然后将细胞培养在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中以阻断非特异性蛋白质相互作用，然后在22°C下用抗体（ab32063，1/1000稀释度）30分钟。使用的二级抗体为亚历山福禄^®488山羊抗兔IgG（H+L）(ab150077)在22°C下，在1/2000稀释30分钟。同型对照抗体（黑线）为兔IgG（单克隆）（1µg/1x10⁶电池）在相同的条件下使用。未标记的样本（蓝线）也被用作对照。用20mW氩离子激光器（488nm）和525/30带通滤波器采集了大于5000个事件。在相同条件下，用80%甲醇（5min）固定/0.1%PBS-Tween渗透20min，MCF7细胞呈阳性信号。 

1/5000稀释度ab32063对人乳腺癌石蜡包埋组织的免疫组化染色。二级抗体为羊抗兔IgG-H&L（HRP聚合物）。样品用苏木精反染色。抗原回收是用热介导的阿布93684（Tris/EDTA缓冲液，pH值9.0）。

乳腺癌细胞核染色。

封闭稀释缓冲液：5%NFDM/TBST。 

1/5000稀释度ab32063对人乳腺石蜡包埋组织的免疫组化染色。二级抗体为羊抗兔IgG-H&L（HRP聚合物）。样品用苏木精反染色。抗原回收是用热介导的阿布93684（Tris/EDTA缓冲液，pH值9.0）。

乳腺细胞核染色。

1/200稀释度纯化ab32063对人子宫内膜癌石蜡包埋的免疫组化染色。使用的次级抗体是ab97051一株HRP山羊抗兔IgG（H+L），1/500。样品用苏木精反染色。用pH9.0的Tris-EDTA缓冲液进行抗原回收。

曝光时间：1^st车道：85秒
二^nd公司车道：32秒

封闭稀释缓冲液：5%NFDM/TBST

抗雌激素受体α（ab32063，未纯化）稀释1:50的人乳腺癌免疫组化分析

用1/250稀释度纯化的ab32063对MCF7细胞（用4%PFA固定，tritonx100渗透）进行免疫荧光染色。Alexa Fluor公司^®以555山羊抗兔抗体为二级，稀释度为1/200。右边的面板显示DAPI反染色。

染色质由MCF-7+β-雌二醇30min和MCF-7细胞按Abcam-X-ChIP协议制备。用甲醛固定细胞10min，用25μg染色质、4μg纯化ab32063（蓝色）和20μl抗兔IgG琼脂糖微球进行芯片制备。将兔正常IgG加入珠子对照组（黄色）。免疫沉淀DNA用实时PCR（SYBR法）定量。引物位于TFF1基因的第二内含子。

MCF7细胞处理如下：

MCF-7饥饿过夜，然后用10nmβ-雌二醇在2%FBS培养基中处理30min。

对照组MCF-7饥饿过夜，然后在2%FBS培养基中放置30分钟。

底漆信息：

位于TFF1基因2内含子上。

顺序：

前进：5'-AGTCTCCCAACCTGATCCTT-3'

反面：5'-TTCCGGCCATTCCTACTAT-3'