主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔ERK1单克隆抗体[Y72] 适用于:WB、IP、IHC-P、Flow Cyt(Intra)、ICC/IF 敲除已验证 反应对象:老鼠、人类
相关共轭物和制剂
(美国)
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产品名称 -
日本 兔单克隆抗体 [Y72]至ERK1 -
宿主 兔子 -
特异性 该抗体识别ERK1。该抗体不会与其他MAP激酶发生交叉反应。 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 老鼠,人类 -
免疫原 合成肽。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
表位 ab32537与位于ERK1 N末端的表位反应。 -
阳性对照 WB:HeLa、HEK-293T、HEK293、Jurkat和RAW264.7,小鼠脑、心、肾、脾和NIH/3T3全细胞裂解物和ERK1重组蛋白。 IHC:人肺癌、人宫颈癌和人扁桃体组织。 ICC/IF:野生型HAP1和Jurkat细胞。 流式细胞术(内部):HeLa和Jurkat细胞。 HAP1细胞。 IP:Jurkat细胞。
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常规说明
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 pH值:7.20 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:59%PBS、40%甘油(甘油、甘油)、0.05%BSA -
浓度信息加载。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆 单克隆 -
克隆编号 年72 -
同种型 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
兼容的辅助设备 -
同位素控制 -
KO细胞系 -
KO细胞裂解物 -
阳性对照 -
重组蛋白
美国
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靶标
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功能 通过磷酸化一些转录因子,如ELK-1,参与分化细胞减数分裂、有丝分裂和有丝分裂后功能的启动和调节。 磷酸酯类EIF4EBP1; 启动翻译所必需的。 磷酸化微管相关蛋白2(MAP2)。 磷酸化物SPZ1(根据相似性)。 磷酸化热休克因子蛋白4(HSF4)。 -
序列相似性 属于蛋白激酶超家族。 CMGC Ser/Thr蛋白激酶家族。 MAP激酶亚家族。 包含1个蛋白激酶结构域。 -
结构域 TXY基序包含苏氨酸和酪氨酸残基,其磷酸化激活MAP激酶。 -
翻译后修饰 在Thr-202和Tyr-204上双重磷酸化,激活酶。 PTPRJ在Tyr-204进行脱磷。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 -
别名 ERK 1抗体 ERK-1抗体 ERK1抗体
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图片
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所有车道: 稀释1/1000的抗-ERK1抗体[Y72](ab32537) 车道1: 小鼠脑裂解物 车道2: 小鼠心脏裂解物 3号车道: 小鼠肾脏裂解物 车道4: 小鼠脾脏裂解物 车道5: Raw 264.7(小鼠Abelson小鼠白血病病毒诱导的肿瘤巨噬细胞)全细胞裂解物 车道6: NIH/3T3(小鼠胚胎成纤维细胞)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释1/20000 预测的带宽大小: 43千帕 观察到的频带大小: 43千帕 暴露时间: 180秒 阻塞缓冲液和浓度: 5%NFDM/TBST 稀释缓冲液和浓度: 5%NFDM/TBST。 此斑点是使用 高的 灵敏度ECL基板。 约181602 用作加载控件。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗-ERK1抗体[Y72](ab32537) 车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道2: MAPK3敲除HEK-293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 43千帕 观察到的频带大小: 43千帕 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在43 kDa下观察到ab32537。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 western blot显示ab32537与野生型HEK-293T细胞中的ERK1反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 ab266519型 (敲除细胞裂解物 约257099 )已使用。 对野生型HEK-293T和MAPK3敲除HEK-293细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 ab32537和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
重叠直方图显示用ab32537染色的HAP1野生型(绿线)和HAP1-MAPK3敲除细胞(红线)。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清中培养细胞,以阻止非特异性蛋白质相互作用,随后在22°C下用抗体(ab32537,1µg/ml)培养30分钟。 使用的二级抗体是Alexa Fluor ® 488山羊抗兔IgG(H&L)( 约150081 )在22°C下以1/2000稀释30分钟。 兔IgG同型控制抗体( 约172730 )在与第一抗体相同的浓度和条件下使用(HAP1野生型-黑线,HAP1-MAPK3敲除-灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和530/30带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
ab32537染色野生型HAP1细胞中的ERK1(顶部面板)和ERK1敲除HAP1的细胞(底部面板)。 细胞用100%甲醇固定(5min),用0.1%Triton X-100透化5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1h。 然后用ab32537以1/400的稀释度培养细胞,并 约7291 以1ug/ml浓度在+4°C下过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor®488)进一步孵育1小时( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor®594)( 第150117页 )2ug/ml(以伪红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 在4%甲醛固定的HAP1细胞(10分钟)中,在相同的测试条件下,该产品也发出阳性信号。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems,TCS SP8)拍摄图像。 -
免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)分析人宫颈癌组织标记ERK1,纯化ab32537,稀释1/50。 使用Tris/EDTA缓冲液pH 9进行热介导抗原检索。 ab97051型 以HRP结合的山羊抗兔IgG(H+L)作为二级抗体(1/500)。 使用PBS代替初级抗体的阴性对照。 苏木精复染。 -
重叠直方图显示用ab32537染色的HeLa细胞(红线)。 用4%甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%PBS-Tween 20渗透20分钟。然后将细胞在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中孵育,以阻断非特异性蛋白质相互作用,然后在22°C下用抗体(ab32537,1/11312)孵育30分钟。 使用的二级抗体是Alexa Fluor ® 488山羊抗兔IgG(H&L)( 约150081 )在22°C下以1/2000稀释30分钟。 同型对照抗体(黑线)为兔IgG(单克隆)( 约172730 ,0.01微克/1x10 6 电池)在相同条件下使用。 未标记样本(蓝线)也用作对照。 使用20mW氩离子激光器(488nm)和525/30带通滤波器采集了超过5000个事件。 该抗体在用80%甲醇(5分钟)固定/用0.1%PBS-Tween 20渗透20分钟的HeLa细胞中发出阳性信号。 -
车道1、3和5: 野生型HAP1细胞裂解物(20µg) 车道2、4和6: ERK1敲除HAP1细胞裂解物(20µg) 车道1和2: 42 kDa时观察到来自目标的绿色信号-ab32537 3号和4号车道: 来自装载控制的红色信号- 约8226 在42 kDa下观察到 车道5和6: 合并(红色和绿色)信号 当使用ERK1敲除样品时,ab32537表现出与ERK1特异性反应。 对野生型和ERK1基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 ab32537和 约8226 (β-肌动蛋白负荷控制)均稀释1/1000并在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附液开发印迹( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1/10000稀释1h。 -
所有车道: 抗-ERK1抗体[Y72](ab32537),稀释度为1/10000(纯化) 车道1: 293T全细胞裂解物 车道2: HeLa全细胞裂解物 3号车道: Jurkat全细胞裂解物 每车道10µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释1/20000 预测的带宽大小: 43千帕 观察到的频带大小: 44千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 阻隔和稀释缓冲液:5%NFDM/TBST -
在Leica Bond上进行的人类扁桃体福尔马林固定石蜡包埋组织切片ab32537染色ERK1的IHC图像。 用柠檬酸钠缓冲液(pH6,表位检索溶液1)进行热介导抗原检索预处理20分钟。 然后在室温下用2μg/ml的ab32537稀释液培养切片15分钟,并使用HRP共轭紧凑聚合物系统检测。 DAB被用作显色剂。 然后用苏木精对切片进行复染,并用DPX固定。 二级对照组中未使用一级抗体(如插图所示)。 对于其他IHC染色系统(自动化和非自动化),客户应优化可变参数,如抗原回收条件、初级抗体浓度和抗体孵育时间。 -
1/1000稀释(纯化)的抗-ERK1抗体[Y72](ab32537)+20µg的RAW264.7全细胞裂解液 次要 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释度为1/10000 预测的带宽大小: 43千帕 观察到的频带大小: 44千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 阻隔和稀释缓冲液:5%NFDM/TBST -
所有车道: 1/1000稀释的抗ERK1抗体[Y72](ab32537) 车道1: HeLa(人上皮癌细胞系)全细胞裂解液 车道2: HEK293(人胚肾细胞系)全细胞裂解液 3号车道: 重组人ERK1蛋白( ab43623型 ) ( ab43623型 ) 车道4: 重组人ERK2蛋白( 约43625 ) 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®790)( 约175781 )稀释度为1/10000 预测的带宽大小: 43千帕 观察到的频带大小: 44千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 该印迹是在MOPS缓冲系统下使用4-12%双三凝胶生成的。 凝胶在200V下运行50分钟,然后在30V下转移到硝基纤维素膜上70分钟。 然后使用Licor封闭缓冲液封闭膜一小时,然后在4°C下与ab32537孵育过夜。 用山羊检测抗体结合 抗兔Alexa Fluor ® 790 ) 约175781 在室温下以1:10000稀释1小时,然后使用Licor Odyssey CLx成像。 -
1/1000稀释(未纯化)的抗ERK1抗体[Y72](ab32537)+Jurkat细胞裂解物 预测的带宽大小: 43千帕 观察到的频带大小: 43千帕 -
用未纯化ab32537对人肺癌组织ERK1进行免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)分析。 在开始IHC染色方案之前,执行热介导抗原检索。 -
Jurkat细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析用稀释度为1/100的纯化ab32537标记ERK1。 用4%多聚甲醛固定细胞,并用0.1%Triton X-100渗透。 约150077 ,Alexa Fluor ® 用488-结合羊抗兔IgG(1/1000)作为二级抗体。 DAPI(蓝色)用作核染色。 约7291 、小鼠抗微管蛋白(1/1000)和 ab150120型 ,Alexa Fluor ® 还使用了594-共轭山羊抗鼠IgG(1/1000)。 对照1:一级抗体(1/100)和二级抗体, ab150120型 ,Alexa Fluor ® 594-共轭山羊抗鼠IgG(1/1000)。 控制2: 约7291 (1/1000)和二级抗体, 约150077 ,Alexa Fluor ® 488-共轭山羊抗兔IgG(1/1000)。 -
用ICC/IF(免疫细胞化学/免疫荧光)对HeLa细胞中ERK1进行未纯化ab32537染色。 用多聚甲醛固定细胞,并用0.5%Triton X-100在PBS中渗透。样品在22°C下与一级抗体(PBS中的1/500)孵育1小时。 约150081 ,一只山羊 抗兔Alexa Fluor ® 488 (1/200)作为二级抗体。 用DAPI复染。 细胞质和细胞核染色。 -
Jurkat细胞的细胞内流式细胞术分析,用稀释1/30(红色)的纯化ab32537标记ERK1。 细胞用4%多聚甲醛固定。 以FITC-偶联山羊抗兔IgG(1/150)作为二级抗体。 黑色-同位素对照,兔单克隆IgG。 蓝色-未标记对照,细胞未与初级和次级抗体孵育。 -
用细胞内流式细胞术对HEK293细胞进行未纯化ab32537染色ERK1(绿色)。 细胞用多聚甲醛固定并用70%甲醇渗透。 将样品与一级抗体(1/40在PBS+0.2%BSA+0.1%叠氮化钠中)在22°C下孵育1小时。 采用藻红蛋白结合的山羊抗兔IgG(1/100)作为二级抗体。 选通策略:活细胞。 紫色图代表同型对照。
实验方案
数据表及文件
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数据表下载
文 (52)
翟JP 等。 肾癌中GPNMB过度表达与广泛骨转移和不良预后相关。 Oncol Lett公司 23:36 (2022). 公共医学:34966452 文氏X 等。 内皮瞬时受体电位经典通道调节心肌梗死后血管生成并促进恢复。 J Am心脏协会 11:e023678(2022)。 公共医学:35253458 段L 等。 三七皂苷通过miR-194-MAPK通路的高甲基化缓解冠心病。 前沿药理学 13:829416 (2022). 公共医学:35784716 于D 等。 槲皮素保护人类支气管上皮细胞免受氧化损伤。 开放医学(战争) 17:375-383 (2022). 公共医学:35799602 徐伟 等。 PIK3CB通过PI3K/AKT/mTOR信号轴促进食管癌增殖。 细胞生物Int 46:1399-1408 (2022). 公共医学:35842767