抗ERG[EPR3864]（ab92513）

用浓度为1µg/ml的ab92513对福尔马林固定石蜡包埋人肾标记ERG进行免疫组织化学分析。免疫染色是在Ventana DISCOVERY ULTRA（Roche Tissue Diagnostics）仪器上使用OptiView DAB IHC检测试剂盒进行的。使用ULTRA细胞调节液（CC1 pH8.5）进行热介导抗原回收32分钟。ab92513抗ERG抗体在37℃下孵育16分钟。切片用苏木精II复染。图像插页显示仅二级抗体对照组无染色。

流式细胞术重叠直方图显示左侧THP-1阳性细胞和右侧HCT116阴性细胞，ab92513染色（红线）。用4%甲醛固定细胞（10分钟），然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后将细胞培养在含有10μg/ml人IgG和10%正常山羊血清的1x PBS中，以阻断FC受体和非特异性蛋白-蛋白质相互作用，然后使用抗体（ab92513）（1x 10⁶100μl，0.04μg/ml（1/54000）），22°C下30分钟。

将二级抗体山羊抗狂犬病IgG H&L（Alexa Fluor®488）预吸附液在1/4000的温度下于22°C孵育30分钟

同位素对照抗体（黑线）为重组兔IgG，单克隆[EPR25A]-同位素对照，使用的浓度和条件与主要抗体相同。未标记样本（蓝线）也用作对照。

使用50 mW蓝光激光器（488nm）和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。

免疫组织化学分析中使用ab92513对抗-ERG抗体[EPR3864]进行组织芯片染色。本表详细概述了每种测试样品类型的阳性（勾号）和阴性（交叉标记）染色。该切片在室温下与ab92513孵育30分钟，然后使用现成的LeicaDS9800（Bond™Polymer Refine Detection）。免疫染色在徕卡生物系统BOND®RX仪器上进行。

用Tris-EDTA缓冲液（pH 9.0，表位检索溶液2）进行热介导抗原检索20分钟。

福尔马林固定、石蜡包埋的小鼠脑组织在免疫组织化学分析中使用ab92513以1/200稀释进行ERG染色。用马萝卜过氧化物酶抗体作为二级抗体。

抗原检索：40x；蛋白酶K抗原回收-37℃下15分钟

阻塞缓冲区：5%NFDM/TBST
稀释缓冲液：5%NFDM/TBST

ab92513在THP-1细胞中ERG染色，在HCT116细胞中呈阴性表达。用4%甲醛固定细胞（10分钟），用0.1%Triton x-100渗透5分钟，然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。然后用ab92513在+4°C下以1μg/ml和约7291，小鼠单克隆[DM1A]以0.5μg/ml的浓度作用于α-管蛋白。然后用约150081、山羊抗兔IgG-H&L（Alexa Fluor）多克隆二级抗体^®488），以1/1000稀释度预吸附（以绿色显示）和ab150119号小鼠IgG-H&L（Alexa Fluor）山羊多克隆二级抗体^®647），以1/1000稀释度预吸附（以红色显示）。用DAPI标记细胞核DNA（以蓝色显示）。使用共焦显微镜（Leica-Microsystems TCS SP8）采集图像，显示单个共焦切片。

GEDI捕获细胞的功能特征和基因改变检测。TMPRSS2:ERG融合蛋白在来自去势抵抗性前列腺癌（CRPC）患者的GEDI捕获的循环肿瘤细胞（CTC）中检测到。PSMA采集的CTC在设备上用ab92513染色。显示了PSMA+/CD45−CTC的代表性示例，其中两个对ERG呈阳性。比例尺：10微米。

使用ab92513对人类前列腺癌样本进行ERG和GSTP1免疫染色。

前列腺癌样本的代表性免疫组织化学图像显示，ERG阳性，GSTP1（A）阴性，ERG和GSTP1阳性（B），ERG与GSTP1阴性（C），ERG-GSTP1呈阴性（D）。ERG的内部染色对照是内皮细胞（箭头），GSTP1的内部染色对照是正常前列腺的基质细胞和/或基底细胞。N、 正常前列腺；S、 基质；T、 肿瘤腺体。比例尺等于100μm

THP-1（人单核细胞白血病细胞系）细胞的细胞内流式细胞术分析，用纯化的ab92513标记ERG，稀释度为1/1000（1ug/ml）（红色）。细胞用4%多聚甲醛固定，用90%甲醇渗透。山羊抗兔IgG（Alexa Fluor^®488) (约150077)（1/2000稀释）作为二级抗体。兔单克隆IgG（黑色）(约172730)以未与一级抗体和二级抗体孵育的细胞（蓝色）作为未标记对照。 

阻塞缓冲区：5%NFDM/TBST
稀释缓冲液：5%NFDM/TBST

用纯化的ab92513在1/100工作稀释度下对THP-1（人单核细胞白血病细胞系）细胞进行免疫荧光染色，并用DAPI进行反染色。次要抗体是Alexa Fluor^®488山羊抗兔(约150077)，稀释度为1/1000。约7291是一种小鼠抗微管蛋白抗体（1/1000），用于染色微管蛋白和ab150120型（Alexa Fluor公司^®594山羊抗鼠软件，1/1000），如右上角面板所示。将细胞固定在4%PFA中，并使用0.1%Triton X 100进行透化。阴性对照显示在底部中间和右侧面板中-对于阴性对照1，使用纯化的ab92513，稀释度为1/500，然后使用Alexa Fluor^®594羊抗鼠抗体(ab150120型)稀释度为1/500。对于阴性对照2，约7291（小鼠抗微管蛋白）以1/500的稀释度使用，然后使用Alexa Fluor^®488羊抗兔抗体(约150077)稀释度为1/400。

Alexa Fluor公司^®488 (约196374)和Alexa Fluor^®647 (约196149)这个克隆有共轭版本。

用未纯化的ab92513进行石蜡包埋人前列腺癌3期组织的免疫组织化学分析，显示+ve染色。

在开始IHC染色方案之前，执行热介导抗原检索。